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耐药结核病实验室诊断技术研究进展
编辑人员丨3天前
结核病(TB)是严重危害公众健康的全球性公共卫生问题.耐药结核病(DR-TB)是TB防治的重点和难点.目前,常用的体外药物敏感性试验方法包括表型药物敏感性检测技术和分子药物敏感性检测技术.表型药物敏感性检测技术包括固体药物敏感性试验、液体药物敏感性试验、最低抑菌浓度法,分子药物敏感性检测技术包括GeneXpert MTB/RIF、线性探针技术、基因芯片技术、荧光聚合酶链反应(PCR)熔解曲线法、FluoroType MTBDR、Xpert MTB/XDR、核酸质谱分析、全基因组测序技术.文章就表型药物敏感性检测和分子药物敏感性检测对DR-TB实验室诊断技术的研究进展进行综述,旨在为DR-TB的早期诊断提供参考.
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编辑人员丨3天前
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一种可用于OBI检测的高灵敏度核酸提取方法的建立与验证
编辑人员丨3天前
目的 建立和验证1种可用于隐匿性HBV感染(OBI)检测的大体积高灵敏度核酸提取方法,并将其应用于低病毒载量OBI标本的定量检测.方法 参考罗氏核酸检测试剂盒核酸提取方法,建立1种大体积核酸提取方法.将HBV标准品分别配置成10 000 IU/mL、1 000 IU/mL、100 IU/mL、10 IU/mL和1 IU/mL浓度,采用磁珠法从10 mL相应浓度的标准品中提取核酸,采用荧光定量PCR法检测各浓度的CT值,每个浓度梯度进行平行双份检测,以病毒浓度的对数为X轴,2次检测CT值的平均值为Y轴,构建荧光定量标准曲线和回归方程.通过3次重复实验验证该方法的稳定性.应用本方法提取低病毒载量OBI标本核酸并进行荧光定量.结果 3次HBV病毒荧光定量标准曲线扩增效率(E)均在90%~105%,回归方程(R2)均>0.99.不同浓度标准品CT值的变异系数(CV)分别为0.63%、0.78%、1.52%、1.36%和0.78%.本方法可以提取出病毒载量低至1 IU/mL的OBI标本核酸并进行定量.结论 本方法HBV核酸定量检测系统检测下限可达1 IU/mL,并且具有较强稳定性和灵敏度,可用于低病毒载量OBI的定量检测.
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编辑人员丨3天前
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幽门螺杆菌感染所致人脐静脉内皮细胞功能异常及炎性反应的作用机制研究
编辑人员丨3天前
目的 探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)通过激活转录激活因子3(STAT3)/核转录因子κB(NF-κB)通路对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖、迁移、凋亡及炎性反应的影响.方法 将HUVEC分为对照组(未感染Hp)和Hp感染组(Hp感染复数=25),通过倒置显微镜观察感染Hp的HUVEC形态变化;细胞计数试剂盒8细胞增殖实验和平板克隆实验检测2组HUVEC增殖能力,Transwell实验和划痕愈合实验检测HUVEC的迁移能力,流式细胞术检测HUVEC的凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应检测2组HUVEC中Hp细胞毒素相关基因A、白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)信使核糖核酸表达情况;Western blot检测HUVEC细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、原癌基因(C-Myc)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、B 淋巴细胞瘤 2 基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、STAT3/NF-κB信号通路蛋白表达情况.结果 与对照组比较,Hp组细胞增殖、纵向、横向迁移能力明显降低,CyclinD1、PCNA、C-Myc、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,Bax、磷酸化STAT3/STAT3、磷酸化NF-κB P65/NF-κB-P65蛋白表达量和HUVEC凋亡率升高(P<0.05,P<0.01),炎性因子 IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α mRNA 水平升高(2.71±0.05 vs 1.06±0.41,1.42±0.02 vs 0.92± 0.11,2.50±0.29 vs 1.00±0.10,5.34±0.57 vs 1.00±0.16,P<0.01).结论 Hp 通过激活 STAT3/NF-κB 通路抑制HUVEC增殖、迁移,并诱导其凋亡和炎性反应的发生.
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编辑人员丨3天前
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改进核酸筛查混检阳性池再检模式的探讨
编辑人员丨3天前
目的 通过分析核酸筛查混检阳性池CT值分布区间与拆分率的相关性,为改进混检阳性池再检模式,降低输血残余风险提供依据.方法 回顾性分析2017年1月—2021年12月本站Cobas S201检测系统核酸筛查HBV混检阳性池标本拆分情况,选取影响拆分成功的主要因素CT值,以CT值分布区间为依据制定再检实验方案.针对2022年3月—2023年3月HBV混检阳性池标本,进行Cobas S201和Panther检测系统的同步检测,统计分析该类标本检测结果.结果 2017-2021年5年间混检阳性池为474个,混检HBV阳性池为324个,占混检阳性池的68.35%,其中2017-2020年每年的HBV阳性池占比明显高于HCV和HIV阳性池(P<0.05);5年间HBV拆分阳性池为167个,占混检HBV阳性池的51.54%,拆分阴性池为157个,占混检HBV阳性池的48.46%.5年间HBV拆分阳性池按CT值分为3个区间:CT值≤36、36<CT值≤40和CT值>40,其拆分率分别为95.8%、56.5%和14.8%(P<0.05);拆分阳性和拆分阴性2组中,36<CT值≤40区间混检池数量占比最高分别为80.8%、66.2%,且与其它2区间比较有差异(P<0.05).2022年3月—2023年3月混检HBV阳性池有65个,CT值≤36区间(5个)和CT值>40区间(12个),经Cobas S201拆分和Panther联检符合率都为100%,36<CT值≤40区间(48个),2种检测方法的符合率为81.25%.Cobas S201首次拆分结果和Panther联检结果不一致有9份标本,有4份标本Cobas S201首次拆分是阴性,同步Panther联检是阳性,4份标本中3份Cobas S201再单检是阳性,1份Cobas S201再单检是阴性,按照制定的再检方案判定规则是9份标本判定为不合格,按照混检阳性池拆分1次阴性即放行的规则至少会有3份标本漏检.结论 核酸筛查中混检阳性池再拆分阴性的献血者标本占有一定的比例,混检阳性池拆分1次阴性即放行的规则有漏检风险,对这部分标本可以有选择性的(36<CT值≤40区间)进行再检判定结果,既保证了血液安全又节约了再检成本.
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编辑人员丨3天前
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多奈哌齐疗效及不良反应相关的药物基因组学研究
编辑人员丨3天前
目的 分析多奈哌齐治疗阿尔茨海默病(AD)连续疾病谱患者的疗效及不良反应的药物基因组学研究.方法 连续募集2022年1月至2023年1月于解放军总医院就诊的分子病理初次诊断AD连续疾病谱时服用多奈哌齐治疗的患者72例.采取患者口腔颊黏膜细胞,应用MassARRAY核酸质谱技术检测细胞色素P450(CYP)2D6酶编码基因CYP2D6及乙酰胆碱转移酶编码基因CHAT基因型.随访9个月,通过神经功能量表、照料者评价及药物处方行为间接判断药物疗效,将其分为有效组28例和无效组22例;其中不良反应12例,无不良反应60例.采用多因素logistic回归分析多奈哌齐疗效与药物基因组学的相关性.结果 与无效组比较,有效组CHAT基因rs3793790 携带 G、rs2177370 携带 A 等位基因的频率显著升高(35.71%vs 9.09%,P=0.029;42.86%vs 9.09%,P=0.008).多因素logistic回归分析显示,CHAT基因rs3793790携带G和(或)rs2177370携带A较均不携带者应用多奈哌齐有效(95%CI:1.20~34.47,P=0.030).有、无不良反应患者CYP2D6基因调整后活性评分及是否携带*10比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 在AD连续疾病谱患者中,多奈哌齐疗效与CHAT基因多态性相关,未发现多奈哌齐不良反应与CYP2D6基因型的相关性.
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编辑人员丨3天前
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本期导读
编辑人员丨3天前
检验医学在临床医疗服务中,为疾病筛查、疾病预防、疾病诊断和疾病管理提供重要信息;在公共卫生管理中也起着重要的作用,如危害公共卫生安全的病原体检测、血液制品的安全使用、有毒有害物质的鉴定等.为了更好地展现近年来检验医学新进展,本期组约"检验医学重点号",特邀请浙江大学医学院附属邵逸夫医院张钧教授撰写"CRISPR/Cas系统在核酸检测中的应用和挑战",温州医科大学附属第一医院周铁丽教授撰写"细菌生物膜的耐受性、耐药性和治疗策略研究新进展",中国人民解放军联勤保障部队第九○三医院成军教授撰写"流行性感冒病毒感染的实验室诊断技术应用进展".欢迎阅读!
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编辑人员丨3天前
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miRNA-589-5p调控氧糖剥夺人脑微血管内皮细胞损伤的机制
编辑人员丨3天前
目的 微小核糖核酸-589-5p(miRNA-589-5p)、组蛋白去乙酰化酶(HDAC)3对氧糖剥夺人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响,并探索其潜在的作用机制.方法 HBMEC细胞分为对照组、氧糖剥夺组;运用脂质体法将氧糖剥夺+miRNA-con组(转染miRNA-con)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p组(转染miRNA-589-5p的模拟物序列)、氧糖剥夺+miRNA-si-con组(转染 miRNA-si-con)、氧糖剥夺+si-HDAC3 组(转染 si-HDAC3)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p+pcDNA 组(共转染 miRNA-589-5p的模拟物序列和 pcDNA)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p+pcDNA-HDAC3 组(共转染 miRNA-589-5p mimics 和 pcDNA-HDAC3)转染至HBMEC,并行氧糖剥夺处理;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western印迹检测细胞中miRNA-589-5p、HDAC3 mRNA表达和HDAC3、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2、核因子2相关因子(NRF)2、血红素氧合酶(HO)-1蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH);膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)试剂盒检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测细胞荧光活性.结果 与对照组相比,氧糖剥夺组细胞miRNA-589-5p表达水平明显降低,HDAC3表达、LDH、细胞凋亡率、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达、NRF2/HO-1信号通路关键基因NRF2核蛋白/PCNA、HO-1蛋白表达均显著降低(P<0.05);过表达miRNA-589-5p或沉默HDAC3均可明显抑制氧糖剥夺对HBMEC细胞上述指标的调控.双荧光素酶报告实验显示,miRNA-589-5p明显抑制野生型HDAC3细胞的荧光活性,并负向调控HDAC3的蛋白表达.过表达HDAC3部分逆转过表达miRNA-589-5p对氧糖剥夺诱导HBMEC细胞的LDH、凋亡的抑制和NRF2/HO-1信号通路的激活作用.结论 miRNA-589-5p抑制氧糖剥夺对HBMEC细胞的损伤,其作用机制与靶向HDAC3,激活NRF2/HO-1信号通路有关.
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编辑人员丨3天前
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2012-2022年广州地区抗-HIV阳性无偿献血者人群特征及趋势分析
编辑人员丨3天前
目的 调查2012-2022年广州地区无偿献血人群人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的人群信息,分析其特征及趋势,为制定有针对性的防治措施提供数据支持,探讨新形势下保障用血安全的措施.方法 采用2种酶联免疫吸附(ELISA)试剂和1种核酸检测(NAT)试剂对2012-2022年广州地区的无偿献血标本进行HIV抗原抗体检测和HIV RNA筛查,检出反应性的血液标本送至广州疾病预防控制中心进行抗-HIV确证实验(蛋白免疫印迹法),并对确证抗-HIV阳性的献血者进行人群特征分析.结果 2012-2022年广州地区无偿献血人群共3 351 596份献血者标本.抗-HIV确证阳性有708份,总阳性率为21.12/10万,抗-HIV阳性率整体呈下降趋势(P<0.05).其中:1)不同年龄段的抗-HIV阳性率由高到低依次是25~34岁组、35~44岁组、18~24岁组、≥45岁组(P<0.05);2)初次献血者抗-HIV阳性率(39.23/10万)显著高于重复献血者(10.78/10万)(P<0.05);3)男性献血者抗-HIV阳性率(30.45/10万)显著高于女性(3.46/10万)(P<0.05);4)个体献血者抗-HIV阳性率(32.18/10万)高于团体献血者(9.10/10万)(P<0.05).结论 2012-2022年广州地区无偿献血人群中,抗-HIV确证阳性率呈现逐年下降的趋势,与无偿献血及艾滋病预防系列政策落实呈显著正相关性.青年人群仍然是HIV高危人群集中区,应多渠道加强艾滋病预防知识的宣传教育.初次献血者的抗-HIV阳性率远高于重复献血者,建议进一步优化献血前的健康征询和体检过程,多措施筛查高危行为人群的献血行为.加强固定献血者的艾滋病预防等宣传教育,坚持从低危人群中招募献血者,并加强献血后保密性弃血途径告知工作.
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编辑人员丨3天前
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CRISPR/Cas系统在核酸检测中的应用和挑战
编辑人员丨3天前
成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关基因(Cas)系统是古菌和细菌适应性免疫系统,最初被发现用来进行基因编辑,近年其特异识别和切割特性以及可编程性使其在核酸和非核酸靶标检测中崭露头角.目前基于CRISPR/Cas系统的核酸检测系统主要与核酸扩增技术如PCR、链置换扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)和EXPAR等恒温扩增技术结合,以提高灵敏度;多项研究也在尝试开发基于CRISPR/Cas的无预扩增核酸检测系统;另外也有研究尝试通过生物祖体(包括适体、DNAzymes和抗原-抗体反应)特异性识别靶物质实现非核酸信号转换为核酸信号,实现基于CRISPR/Cas的蛋白质、小分子、细胞等非核酸物质的检测.但仍存在一些挑战,其中目标中痕量原始浓度的信号转换和放大是分析系统的关键挑战;其他挑战包括CRISPR/Cas存在一定背景活性,CRISPR RNA和单链DNA/单链RNA信号报告序列有降解风险等.随着技术的逐渐成熟,CRISPR/Cas系统将在生物靶标检测中发挥更大作用.本文就CRISPR/Cas系统在核酸检测这一领域的最新发展方向作一述评.
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编辑人员丨3天前
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中性粒细胞胞外诱捕网通过CCDC25促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用研究
编辑人员丨3天前
目的 探究中性粒细胞胞外捕获网(neutrophil extracellular traps,NETs)在骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及其相关机制.方法 纳入骨肉瘤患者和健康受试者各 20 例,通过ELISA检测血清中PAD4 和H3cit水平.提取两组人群外周血中性粒细胞,比较NETs形成差异.将NETs与骨肉瘤细胞MG63共孵育,期间加入DNA降解酶DNase Ⅰ,分为对照组、NETs组和NETs +DNase Ⅰ组.通过蛋白质印迹检测CCDC25 蛋白表达水平,CCK8 检测细胞增殖水平,Transwell 检测细胞迁移和侵袭水平.将 si-NC 和 si-CCDC25 转染至MG63,加入NETs共孵育,分为si-NC组和si-CCDC25 组,通过蛋白质印迹检测CCDC25 蛋白表达水平,CCK8 检测细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移和侵袭水平.结果 与健康受试者比较,骨肉瘤患者血清中 PAD4 和 H3cit 水平升高(P<0.05),NETs 形成能力增强.与对照组比较,NETs 组CCDC25 蛋白表达升高,细胞增殖、迁移和侵袭水平升高(P<0.05).与NETs组比较,NETs + DNase Ⅰ组CCDC25 蛋白表达降低,细胞增殖、迁移和侵袭水平降低(P<0.05).与 si-NC 组比较,si-CCDC25 组CCDC25 蛋白表达降低,细胞增殖、迁移和侵袭水平降低(P<0.05).结论 NETs通过释放的DNA激活骨肉瘤细胞CCDC25 表达,从而促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭.
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编辑人员丨3天前