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微小核糖核酸-589-5p对喉癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制
编辑人员丨1周前
目的:探讨微小核糖核酸-589-5p(miR-589-5p)对喉癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:喉癌细胞系(TU177、TU686和AMC-HN-8)及人正常支气管上皮细胞(16HBE)购自美国典型培养物保藏中心。将miR-NC、miR-589-5p、si-NC和si-FGD4转染至TU686细胞(分别标记为miR-NC组、miR-589-5p组、si-NC组和si-FGD4组);miR-589-5p与pcDNA、miR-589-5p与pcDNA-FGD4共转染至TU686细胞(分别标记为miR-589-5p+pcDNA组和miR-589-5p+pcDNA-FGD4组)。溴化-3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基四氮唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-589-5p和FYVE、RhoGEF和PH域包含4(FYVE,RhoGEF And PH domain containing 4,FGD4)基因信使核糖核酸(mRNA)表达水平;蛋白质印迹法检测FGD4、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)、p21、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(bax)蛋白表达。两组间比较行 t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK检验。 结果:miR-589-5p组喉癌细胞凋亡率[(31.77±3.26)%比(18.82±1.27)%、miR-589-5p(0.74±0.06比0.31±0.02)、p21(0.78±0.05比0.37±0.02)和bax(0.68±0.04比0.31±0.03)表达水平显著高于miR-NC组,细胞活性(0.47±0.03比0.79±0.06)、Cyclin D1(0.25±0.02比0.66±0.04)及bcl-2(0.18±0.02比0.59±0.03)表达水平显著低于miR-NC组,差异有统计学意义( t=18.891、8.276、12.452、21.439、11.766、19.231、10.545, P<0.05)。转染miR-589-5p组喉癌细胞FGD4基因mRNA(0.41±0.03比0.72±0.05)及蛋白表达(0.25±0.02比0.45±0.03)显著低于miR-NC组细胞,差异有统计学意义( t=21.133、15.509, P<0.05);转染anti-miR-589-5p组喉癌细胞FGD4基因mRNA(0.81±0.07比0.56±0.05)及蛋白表达(0.51±0.04比0.32±0.03)显著高于anti-miR-NC组细胞,差异有统计学意义( t=15.024、20.235, P<0.05)。miR-589-5p+pcDNA-FGD4组细胞活性(0.79±0.06比0.62±0.04)、FGD4(0.68±0.04比0.31±0.03)、Cyclin D1(0.66±0.04比0.28±0.03)和bcl-2(0.61±0.04比0.34±0.03)表达水平显著高于miR-589-5p+pcDNA组细胞,细胞凋亡率[(20.17±2.44)%比(33.14±3.02)%]、p21(0.41±0.03比0.67±0.5)和bax(0.38±0.06比0.59±0.04)表达水平显著低于miR-589-5p+pcDNA组细胞,差异有统计学意义( t=9.465、15.133、12.307、11.731、18.235、15.133、21.347, P<0.05)。 结论:miR-589-5p通过下调FGD4基因表达调控喉癌细胞的增殖和凋亡。
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编辑人员丨1周前
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miRNA-589-5p调控氧糖剥夺人脑微血管内皮细胞损伤的机制
编辑人员丨3周前
目的 微小核糖核酸-589-5p(miRNA-589-5p)、组蛋白去乙酰化酶(HDAC)3对氧糖剥夺人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响,并探索其潜在的作用机制.方法 HBMEC细胞分为对照组、氧糖剥夺组;运用脂质体法将氧糖剥夺+miRNA-con组(转染miRNA-con)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p组(转染miRNA-589-5p的模拟物序列)、氧糖剥夺+miRNA-si-con组(转染 miRNA-si-con)、氧糖剥夺+si-HDAC3 组(转染 si-HDAC3)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p+pcDNA 组(共转染 miRNA-589-5p的模拟物序列和 pcDNA)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p+pcDNA-HDAC3 组(共转染 miRNA-589-5p mimics 和 pcDNA-HDAC3)转染至HBMEC,并行氧糖剥夺处理;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western印迹检测细胞中miRNA-589-5p、HDAC3 mRNA表达和HDAC3、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2、核因子2相关因子(NRF)2、血红素氧合酶(HO)-1蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH);膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)试剂盒检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测细胞荧光活性.结果 与对照组相比,氧糖剥夺组细胞miRNA-589-5p表达水平明显降低,HDAC3表达、LDH、细胞凋亡率、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达、NRF2/HO-1信号通路关键基因NRF2核蛋白/PCNA、HO-1蛋白表达均显著降低(P<0.05);过表达miRNA-589-5p或沉默HDAC3均可明显抑制氧糖剥夺对HBMEC细胞上述指标的调控.双荧光素酶报告实验显示,miRNA-589-5p明显抑制野生型HDAC3细胞的荧光活性,并负向调控HDAC3的蛋白表达.过表达HDAC3部分逆转过表达miRNA-589-5p对氧糖剥夺诱导HBMEC细胞的LDH、凋亡的抑制和NRF2/HO-1信号通路的激活作用.结论 miRNA-589-5p抑制氧糖剥夺对HBMEC细胞的损伤,其作用机制与靶向HDAC3,激活NRF2/HO-1信号通路有关.
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编辑人员丨3周前
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类风湿关节炎活动期患者血浆外泌体miRNAs差异表达筛选与生物信息学分析及验证
编辑人员丨3周前
目的 筛选类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)活动期患者和健康体检者血浆外泌体(exosomes)中差异表达的微小核糖核酸(microRNAs,miRNAs),并进行生物信息学分析,以探讨血浆外泌体miRNAs在RA致病中的作用及其潜在临床应用价值.方法 选取 2023 年 01~04 月就诊于苏州大学附属第二医院风湿免疫科的 39 例RA患者作为研究对象,同时选取 39 例健康体检者作为正常对照.利用Illumina高通量测序技术检测血浆外泌体中miRNAs的表达水平,以log2(Fold Change)绝对值>1 和P值<0.05 为条件获得差异表达的miRNAs.按照P值从小到大的顺序挑选6条miRNAs进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time fluorescence PCR,qRT-PCR)验证.结果 与对照组相比,RA患者血浆外泌体中存在22条异常表达的miRNAs,4条上调,18条下调.其中,miR-30b-5p,miR-144-3p,miR-20a-5p,miR-223-5p,miR-425-3p和miR-589-5p的水平变化显著.GO和KEGG富集分析结果显示,差异表达的miRNAs可能通过调节转化生长因子-β(TGF-β)和PI3K/AKT信号通路参与疾病进展,涉及Th17 细胞分化、细胞间相互作用和蛋白磷酸化等生物学过程.qRT-PCR验证结果显示,与对照组相比,RA患者血浆外泌体miR-144-3p和miR-425-3p的表达水平明显降低,差异具有统计学意义(t=3.617,3.595,均P<0.001),而miR-30b-5p,miR-223-5p,miR-589-5p和miR-20a-5p的表达差异均无统计学意义(t=1.956,1.331,1.662,1.861,均P>0.05).结论 RA患者血浆外泌体的miRNAs表达谱发生改变,可能通过TGF-β等信号通路参与疾病进展,外泌体miR-144-3p和miR-425-3p是RA疾病诊断的潜在血清学标志物.
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编辑人员丨3周前