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苦参碱调节RhoA-ROCK信号通路对冠心病模型大鼠Th17/Treg细胞平衡的影响
编辑人员丨2天前
目的 探讨苦参碱(Matrine)对冠心病(coronary heart disease,CHD)大鼠辅助T细胞 17(helper T cell 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)细胞平衡及Ras同源基因家族成员A(RhoA)-Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)信号通路的影响.方法 建立冠心病模型,将实验大鼠分为对照组、模型组、苦参碱低剂量(50 mg·kg-1)组、苦参碱高剂量(200 mg·kg-1)组及苦参碱高剂量(200 mg·kg-1)+LPA组(10 mg·kg-1).超声心动图进行大鼠心功能检测;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法进行白细胞介素 17(IL-17)、转化生长因子β(TGF-β)水平检测;流式细胞术检测Th17、Treg数量及Th17/Treg比值;免疫组化进行内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素 1(ET-1)蛋白表达水平检测;Masson染色进行大鼠心肌组织的病理形态变化观察;TTC染色检测各组大鼠心肌梗死情况;TUNEL染色进行心肌组织中细胞凋亡情况检测;试剂盒检测RhoA活性;Western Blot法进行半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)、Bcl-2 相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2 蛋白表达水平检测.结果 与对照组比较,模型组心肌组织有大量蓝色胶原纤维沉积,左室舒张末期容积(left ventricular end-diastolic volume,LVEDV)、左室收缩末期容积(left ventricular end-systolic volume,LVESV)、IL-17、Th17、Th17/Treg、ET-1、心肌梗死面积、细胞凋亡率、TUNEL阳性率、Bax、Caspase-3、RhoA活性、RhoA、ROCK1、ROCK2 表达水平明显升高,左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室缩短分数(left ventricular shortening fraction,LVFS)、TGF-β、Treg、eNOS、Bcl-2 表达水平明显降低(P<0.05).与模型组比较,Matrine-L组、苦参碱高剂量组心肌组织蓝色胶原纤维逐渐减少,LVEDV、LVESV、IL-17、Th17、Th17/Treg、ET-1、心肌梗死面积、细胞凋亡率、TUNEL 阳性率、Bax、Caspase-3、RhoA 活性、RhoA、ROCK1、ROCK2 表达水平依次明显降低,LVEF、LVFS、TGF-β、Treg、eNOS、Bcl-2 表达水平依次明显升高(P<0.05).与苦参碱高剂量组比较,苦参碱高剂量+LPA组心肌组织蓝色胶原纤维增多,LVEDV、LVESV、IL-17、Th17、Th17/Treg、ET-1、心肌梗死面积、细胞凋亡率、TUNEL 阳性率、Bax、Caspase-3、RhoA 活性、RhoA、ROCK1、ROCK2 表达水平明显升高,LVEF、LVFS、TGF-β、Treg、eNOS、Bcl-2 表达水平明显降低(P<0.05).结论 苦参碱通过抑制 RhoA-ROCK信号通路调节Th17/Treg细胞平衡,改善冠心病大鼠心肌损伤.
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编辑人员丨2天前
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石菖蒲抗血管性痴呆的药理机制研究进展
编辑人员丨2天前
血管性痴呆是我国乃至全世界最主要的痴呆类型之一,其发病机制复杂,临床治疗尚无特效药,严重影响人类生活及健康.研究发现石菖蒲是中医治疗血管性痴呆最高频的核心中药,具有开窍豁痰、醒神益智、化湿开胃的功效,防治血管性痴呆具有确切优势.石菖蒲的化学成分复杂,其主要有效成分α-细辛醚、β-细辛醚因其广泛的药理活性成为研究热点.石菖蒲及其活性成分可在调节血脑屏障通透性,促进药物通过血脑屏障;清除自由基与提高抗氧化物质以抗氧化应激;调节炎症因子以抗炎;清除β-淀粉样蛋白以调节神经可塑性;调节神经递质以保护胆碱能神经;减少细胞凋亡保护海马神经元等方面发挥抗血管性痴呆的作用.本文对石菖蒲抗血管性痴呆的药理机制进行综述,为石菖蒲的运用提供理论依据及循证支持.
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编辑人员丨2天前
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浸润性乳腺癌中EphA2基因启动子区DNA低甲基化及与细胞焦亡的相关性
编辑人员丨2天前
目的:探讨浸润性乳腺癌中肝配蛋白A型受体2(ephrin A receptor 2,EphA2)表达及其启动子区DNA低甲基化与细胞焦亡发生的相关性.方法:应用免疫荧光技术和蛋白质印迹法检测42例乳腺癌患者正常乳腺组织、癌旁组织和癌组织中EphA2的表达情况;采用免疫荧光技术和蛋白质印迹法检验细胞焦亡相关蛋白核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)的表达水平;采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase 1和炎性细胞因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达水平;应用巢氏甲基化特异性 PCR(nested methylation-specific PCR,nMS-PCR)检验EphA2基因启动子区DNA甲基化水平;采用蛋白质印迹法测验DNA甲基转移酶 1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)和 DNA 甲基转移酶 3a(DNA methyltransferase 3a,DNMT3a)蛋白表达水平;应用Pearson相关系数分别对患者癌组织中EphA2的蛋白表达和甲基化水平与NLRP3、Caspase 1、IL-1β、DNMT1和DNMT3a进行相关性分析.结果:与正常乳腺组织及癌旁组织相比,乳腺癌组中EphA2蛋白表达水平明显升高(P均<0.01),NLRP3、Caspase 1和IL-1β的蛋白表达水平明显降低(P均<0.05);同时与正常乳腺组织及癌旁组织相比,乳腺癌组织中EphA2基因启动子区DNA甲基化水平明显降低(P均<0.05),DNMT3a蛋白表达明显降低(P<0.01,P<0.05),而DNMT1蛋白表达的差异未有统计学意义;Pearson相关性分析结果显示,EphA2蛋白与NLRP3 蛋白(r=-0.651 2,P<0.05)、Caspase 1 蛋白(r=-0.571 2,P<0.05)、IL-1 蛋白(r=-0.654 6,P<0.05)和 DNMT3a 蛋白(r=-0.537 4,P<0.05)的表达水平均呈负相关性;而EphA2基因的甲基化水平与 NLRP3 蛋白(r=0.634 1,P=0.026 8)、Caspase 1 蛋白(r=0.672 8,P=0.016 5)、IL-1β 蛋白(r=0.694 0,P=0.012 3)和 DNMT3a 蛋白(r=0.687 1,P=0.013 6)的表达水平呈正相关性.结论:乳腺癌组织中EphA2蛋白的表达水平上调并与细胞焦亡呈负相关性;DNMT3a可能参与了 EphA2基因启动子区发生DNA低甲基化的过程.
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编辑人员丨2天前
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幽门螺杆菌感染所致人脐静脉内皮细胞功能异常及炎性反应的作用机制研究
编辑人员丨2天前
目的 探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)通过激活转录激活因子3(STAT3)/核转录因子κB(NF-κB)通路对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖、迁移、凋亡及炎性反应的影响.方法 将HUVEC分为对照组(未感染Hp)和Hp感染组(Hp感染复数=25),通过倒置显微镜观察感染Hp的HUVEC形态变化;细胞计数试剂盒8细胞增殖实验和平板克隆实验检测2组HUVEC增殖能力,Transwell实验和划痕愈合实验检测HUVEC的迁移能力,流式细胞术检测HUVEC的凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应检测2组HUVEC中Hp细胞毒素相关基因A、白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)信使核糖核酸表达情况;Western blot检测HUVEC细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、原癌基因(C-Myc)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、B 淋巴细胞瘤 2 基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、STAT3/NF-κB信号通路蛋白表达情况.结果 与对照组比较,Hp组细胞增殖、纵向、横向迁移能力明显降低,CyclinD1、PCNA、C-Myc、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,Bax、磷酸化STAT3/STAT3、磷酸化NF-κB P65/NF-κB-P65蛋白表达量和HUVEC凋亡率升高(P<0.05,P<0.01),炎性因子 IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α mRNA 水平升高(2.71±0.05 vs 1.06±0.41,1.42±0.02 vs 0.92± 0.11,2.50±0.29 vs 1.00±0.10,5.34±0.57 vs 1.00±0.16,P<0.01).结论 Hp 通过激活 STAT3/NF-κB 通路抑制HUVEC增殖、迁移,并诱导其凋亡和炎性反应的发生.
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编辑人员丨2天前
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克洛己新干混悬剂对LPS诱导支气管上皮细胞炎症反应的作用
编辑人员丨2天前
目的 探讨克洛己新干混悬剂对脂多糖(LPS)诱导支气管上皮细胞炎症反应的作用及其潜在机制.方法 将处于对数生长期的人支气管上皮细胞系BEAS-2B分为对照组(无干预)、LPS组(给予25 μg/ml LPS)、克洛己新干混悬剂组(给予1 mg/ml克洛己新干混悬剂)和LPS+克洛己新干混悬剂组(分别给予25 μg/ml LPS和1 mg/ml克洛己新干混悬剂).分别采用CCK-8法观察细胞活性变化;流式细胞术测定细胞凋亡水平;Western印迹检测Toll样受体(TLR)4、下游丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及核转录因子(NF)-κB的蛋白水平变化;DCFH-DA法检测细胞内活性氧自由基(ROS)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞中肿瘤坏死因子(TNF)-α及白细胞介素(IL)-1β的蛋白水平.结果 LPS处理显著抑制BEAS-2B细胞活性,促进细胞发生凋亡,激活TLR4/MAPK/NF-κB信号通路的活化(均P<0.05),还可显著增加细胞内ROS、TNF-α及IL-1β水平(均P<0.05).同时给予细胞克洛己新干混悬剂治疗可显著逆转上述变化(均P<0.05),并可抑制TLR4/MAPK/NF-κB信号通路的激活(均P<0.05).结论 克洛己新干混悬剂可能通过抑制TLR4/MAPK/NF-κB信号通路的激活,从而保护支气管上皮细胞减轻LPS诱导的炎症反应.
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编辑人员丨2天前
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沉默YTH结构域家族蛋白2改善血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠原代心肌细胞肥大与凋亡
编辑人员丨2天前
目的 探讨YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠原代心肌细胞肥大和凋亡的影响.方法 为探讨AngⅡ刺激下YTHDF2的表达水平,将细胞分为正常组和AngⅡ组.为探讨沉默YTHDF2对心肌细胞肥大与凋亡的影响,将细胞分为4组,空白组[转染阴性对照小干扰RNA(siRNA)+PBS]、siYTHDF2 组[转染 YTHDF2 siRNA(siYTHDF2)+PBS]、模型 组(siRNA+Ang Ⅱ)和实验 组(siYTHDF2+Ang Ⅱ).用 Western blot和逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测YTHDF2基因表达水平,RT-qPCR检测心肌肥厚相关基因心房钠尿肽(ANP)、B型钠尿肽(BNP)和β肌球蛋白重链(β-MHC)及心肌细胞凋亡相关基因Bax、B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)mRNA的表达水平,免疫荧光染色观察心肌细胞表面积,原位末端标记法染色观察心肌细胞凋亡情况,免疫沉淀反应验证YTHDF2和Bcl-2的结合关系.结果 AngⅡ组YTHDF2蛋白表达及mRNA水平显著高于正常组(1.49±0.03 vs 0.97±0.09,1.50±0.08 vs 1.00±0.07,P<0.05).与空白组比较,模型组心肌细胞表面积增大,细胞凋亡率升高,ANP、BNP、β-MHC、Bax mRNA表达明显升高,Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.05).与模型组比较,实验组心肌细胞表面积减小,细胞凋亡率降低,ANP、BNP、β-MHC、Bax mRNA表达明显降低,Bcl-2 mRNA表达明显升高(P<0.05).结论 沉默YTHDF2可以缓解AngⅡ诱导的大鼠原代心肌细胞肥大与凋亡,YTHDF2通过与Bcl-2相结合抑制其表达水平.
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编辑人员丨2天前
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白藜芦醇减轻大鼠胰岛β细胞瘤细胞低氧损伤
编辑人员丨2天前
目的 研究白藜芦醇减轻大鼠胰岛β细胞瘤细胞(INS-1)低氧损伤的作用.方法 将INS-1 细胞分为三组,即常氧对照组(control)、低氧组(hypoxia)、低氧及白藜芦醇组(hypoxia+RSV);采用正常培养方法培养常氧对照组,用CCK8 检测不同低氧时间(6、12、24、48 h)的细胞增殖情况,选择合适的时间条件构建低氧模型并用于下一步研究;再以不同浓度的白藜芦醇(8、10、12、15 μmol/L)提前干预 12 h,并进行前期设定的低氧条件处理,用CCK8 检测合适的浓度条件,构建白藜芦醇干预模型并用于下一步研究.以组织活性氧试剂盒及线粒体超氧化物试剂盒检测氧化应激水平;线粒体膜电位及ATP水平检测线粒体功能;流式细胞仪分析检测凋亡;胰岛素定量检测试剂盒检测胰岛素分泌量;实时定量反转录检测Sirt1、Pdx1、Glut2的表达水平;蛋白免疫印迹检测相应蛋白水平.结果 与常氧对照组相比,低氧组细胞增殖降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.01),线粒体功能降低(P<0.05),胰岛素分泌减少(P<0.05),Sirt1、Pdx1、Glut2基因及其相应蛋白表达水平降低(P<0.05).而白藜芦醇干预可以明显减轻低氧应激损伤(P<0.05),促进增殖(P<0.05),逆转凋亡(P<0.01),改善线粒体功能(P<0.05),促进胰岛素分泌(P<0.05),促进Sirt1、Pdx1、Glut2基因及其相应蛋白表达水平(P<0.05).结论 白藜芦醇可以保护低氧造成的INS-1 细胞氧化应激损伤,改善线粒体功能,抗凋亡,并促进胰岛素功能性基因表达,促进胰岛素分泌.[营养学报,2024,46(1):69-74]
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编辑人员丨2天前
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基于啮齿类动物模型的推拿治疗神经病理性疼痛机制研究进展
编辑人员丨2天前
神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)的机制被认为是多因素的.近年大量研究发现,啮齿类动物模型是临床前NP较理想的模型,而推拿通过多种分子机制作用于NP的发展.本文基于慢性压迫性损伤和脊神经结扎的两种啮齿类动物模型,从推拿调节星形胶质细胞和M1型小胶质细胞,以减少神经炎症,抑制细胞外信号调节激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的激活,并减少Ca2+离子通道的表达,从而降低损伤敏感神经元的过度兴奋性,以及抑制促炎症因子白细胞介素-1β/18/6和炎症介质囊泡谷氨酸转运蛋白2、NOD样受体蛋白3炎症小体、长链非编码RNA BANCR的分泌,减少伤害感受器三磷酸腺苷受体P2X3和压电型机械敏感离子通道组件2的表达,调节疼痛回路中γ-氨基丁酸能传递方面.笔者总结分析推拿在神经病理性疼痛中缓解神经炎症、抑制神经元凋亡、促进突触重塑的分子机制,以期为进一步临床应用及研究提供理论参考.
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编辑人员丨2天前
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灵芝提取物通过miR-143-3p对Aβ25~35诱导的神经细胞损伤的影响
编辑人员丨2天前
目的 探讨灵芝提取物对β淀粉样蛋白(Aβ)25~35诱导的神经细胞损伤的影响及其可能的作用机制.方法 采用Aβ25~35诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞PC12建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,不同浓度的灵芝提取物处理PC12细胞,an-ti-miR-NC、anti-miR-143-3p 分别转染至 PC12 细胞后进行Aβ25~35处理 24 h,miR-NC、miR-143-3p mimics 分别转染至 PC12 细胞后加入10 mg/L灵芝提取物与Aβ25~35处理24 h;采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用试剂盒检测丙二醛(MDA)的水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性;采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-143-3p表达量.结果 Aβ25~35作用条件下,灵芝提取物可明显降低细胞凋亡率、MDA水平、miR-143-3p表达量(P<0.05),明显升高细胞活力和SOD、CAT的活性,且呈剂量依赖性(P<0.05);转染anti-miR-143-3p后Aβ25~35诱导的PC12细胞活力和SOD、CAT活性明显升高,细胞凋亡率及MDA水平明显降低(P<0.05);转染miR-143-3p mimics可明显逆转灵芝提取物对Aβ25~35诱导的PC12细胞增殖、凋亡及氧化应激的作用.结论 灵芝提取物可通过抑制miR-143-3p表达减轻Aβ25~35诱导的PC12细胞损伤.
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编辑人员丨2天前
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人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对肝纤维化小鼠模型的治疗作用及其机制分析
编辑人员丨2天前
目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对肝纤维化小鼠的治疗作用及其机制.方法 选取18只SPF级6周龄C57BL/6小鼠,使用随机数字表法随机分为3组,分别为对照组、CCl4模型组(CCl4组)和hUC-MSC治疗组(MSC组),每组6只.CCl4组和MSC组腹腔注射CCl4溶液构建小鼠肝纤维化模型,对照组同时注射相同剂量玉米油,MSC组在注射CCl4的过程经尾静脉注射hUC-MSC.于第8周末采取小鼠血清,处死小鼠,取小鼠肝脏固定.使用酶联免疫吸附法测定炎症因子水平,自动生化检测仪检测肝功能相关指标,HE染色、Masson染色、天狼星红染色及α-SMA免疫荧光用于评估肝纤维化情况;TGF-β刺激的肝星状细胞(HSC)分别在有无几丁质酶3样蛋白1(CHI3L1)添加的培养基中与hUC-MSC共培养,Western Blot试验检测蛋白表达水平.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Dunnett-t检验.结果 Masson染色、天狼星红染色提示CCl4组小鼠纤维化较对照组明显(P值均<0.05),MSC组小鼠纤维化较CCl4组减轻(P值均<0.05).CCl4组IL-1β、IL-6、AST、ALT和ALP水平较对照组明显升高(P值均<0.05),MSC组IL-6、AST、ALT及ALP水平较CCl4组明显降低(P值均<0.05).CCl4组CHI3L1和α-SMA的表达均高于对照组和MSC组(P值均<0.05).细胞培养实验显示,MSC+ HSC组Bax表达高于HSC组和MSC+CHI3L1组(P值均<0.05),提示CHI3L1逆转了MSC对活化的HSC的促凋亡作用.结论 hUC-MSC治疗可以改善小鼠肝纤维化,其作用机制可能与抑制CHI3L1从而促进HSC的凋亡相关.
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编辑人员丨2天前