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特异性短肽二聚体 125I-SWL2在SD大鼠中的药代动力学及在荷非小细胞肺癌裸鼠中的生物分布
编辑人员丨4天前
肺癌已成为国内发病率和致死率均排首位的恶性肿瘤 [1]。靶向免疫治疗是近年的研究热点 [2]。酪氨酸受体激酶家族被认为在肿瘤细胞的粘附、迁移、增殖及肿瘤新生血管形成过程中起着关键作用 [3],尤其肝配蛋白A型受体2(ephrin type-A receptor 2, EphA2)及其配体,是目前该领域的焦点 [4]。前期研究发现, 99Tc m借助螯合剂联肼尼克酰胺(hydrazinonicotinamide, HYNIC)标记的SWLAYPGAVSYRK(SWL)—— 99Tc m-HYNIC-SWL,可作为非小细胞肺癌潜在的显像剂 [5],且有研究表明SWL-Ahx-k-SWL(SLW2)与EphA2的结合能力是SWL的13倍 [6],故本研究采用 125I对SWL2进行标记,探讨其药代动力学及活体生物分布,并验证活体显像的可行性。
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编辑人员丨4天前
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英夫利西单克隆抗体预防小鼠自身免疫性肝炎的作用机制
编辑人员丨4天前
目的:观察英夫利西单克隆抗体对自身免疫性肝炎(AIH)的预防效果并探讨其作用机制。方法:经鼠尾静脉注射刀豆蛋白A(Con-A)建立小鼠AIH模型。将40只小鼠随机分为预防组和对照组,每组20只。预防组Con-A注射前1 h经鼠尾静脉注射途径给予20 mg/kg英夫利西单克隆抗体,对照组注射200 μL PBS。分别于Con-A或PBS注射后3、8、12和24 h取血清,通过比色法检测血清AST、ALT水平。通过ELISA法检测血清细胞因子IL-6、IL-1β、IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-10和趋化因子配体10(CXCL10)水平。于Con-A或PBS注射后12 h取肝组织标本进行H-E染色,通过流式细胞术检测浸润至肝脏的淋巴细胞,通过实时荧光定量PCR检测T盒子转录因子( TBX21)、 GATA结合蛋白3( GATA3)、RAR相关孤儿受体C( RORC)和 CXCL10基因mRNA的表达水平。通过蛋白质印迹法检测肝脏CXCL10表达水平。统计学方法采用单因素方差分析和配对 t检验。 结果:预防组Con-A注射后8、12和24 h的血清ALT、AST、IL-1β、IFN-γ水平均低于对照组[(545.8±190.3) U/L比(865.8±237.7) U/L、(947.6±267.9) U/L比(1 448.0±403.5) U/L和(508.6±131.1) U/L比(976.6±207.6) U/L;(620.7±132.0) U/L比(952.9±106.8) U/L、(801.6±212.0) U/L比(1 424.8±236.0) U/L和(632.1±117.8) U/L比(1 008.3±187.5) U/L;(31.38±10.12) ng/L比(48.12±11.53) ng/L、(39.34±11.40) ng/L比(60.00±14.17) ng/L和(29.49±8.22) ng/L比(46.89±5.50) ng/L;(432.93±66.82) ng/L比(674.66±97.88) ng/L、(655.09±169.17) ng/L比(937.90±166.36) ng/L和(263.40±54.97) ng/L比(410.74±86.64) ng/L],差异均有统计学意义( t=2.350、2.308、4.263,4.374、4.860、3.806,2.440、2.541、3.939,4.560、2.660、3.210; P均<0.05)。预防组Con-A注射后3、8、12和24 h的血清IL-6水平均低于对照组[(1 075.79±303.77) ng/L比(1 914.48±317.80) ng/L、(1 945.97±271.85) ng/L比(2 100.80±378.42) ng/L、(1 578.60±504.54) ng/L比(2 525.40±406.55) ng/L和(1 020.64±280.03) ng/L比(1 582.00±311.96) ng/L],差异均有统计学意义( t=4.266、2.903、3.267、2.994, P均<0.05)。预防组Con-A注射后3 h的血清CXCL10水平和肝脏组织 CXCL10 mRNA相对表达量,以及Con-A注射后3和8 h肝脏组织中 T- bet mRNA相对表达量均低于对照组[(1 755.8±148.1) ng/L比(2 102.0±334.0) ng/L,7.20±3.00比27.60±1.90,6.94±2.29比15.20±3.48和9.38±3.48比18.17±4.48],差异均有统计学意义( t=2.356、2.623、4.427、3.673, P均<0.05)。预防组与对照组Con-A注射后3、8、12和24 h的血清IL-4、IL-17A和IL-10水平,以及 GATA3和 RORC mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义( P均>0.05)。 结论:英夫利西单克隆抗体在小鼠AIH模型中具有一定预防效果,其可能通过拮抗TNF-α减少肝脏CXCL10表达,使Th1和CD8 +T淋巴细胞向肝脏浸润减少,同时通过减少炎性因子对T淋巴细胞的活化来降低T淋巴细胞对肝细胞的损伤而发挥预防作用。
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编辑人员丨4天前
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微小RNA-211-5p靶向抑制促红细胞生成素肝细胞激酶受体及配体B2信号通路对脊髓神经损伤和功能影响研究
编辑人员丨4天前
目的:检测微小RNA(miR)-211-5p、促红细胞生成素肝细胞激酶受体B2(EphB2)及促红细胞生成素肝细胞激酶配体B2(ephrin B2)在脊髓损伤(SCI)后脊髓组织以及神经细胞中的表达,探讨其对SCI大鼠神经功能恢复的机制和效果。方法:2020年5月至2021年6月采用斯普拉格-道利(SD)大鼠和未受伤的PC12细胞进行前瞻性研究。SD大鼠分为假手术组和SCI组,每组各30只,在术后不同时间点(1、3、7、14、21和28 d)进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-211-5p和Eph/ephrin B2 mRNA的相对表达含量;另将SCI大鼠分为重组慢病毒载体LV-miR-211-5p组(A组)、空慢病毒载体LV-eGFP(B组)、0.9%氯化钠组(C组),每组15只,分别重组慢病毒载体、空慢病毒载体和0.9%氯化钠注射于脊髓损伤处头、尾侧,于术后1、7和14 d收集BBB评分,检测脊髓组织中的miR-211-5p和Eph/ephrin B2 mRNA的相对表达含量,另用免疫荧光染色法检测各组GAP-43和突触素的表达。另外用150 μmol/L过氧化氢(H 2O 2)建立PC12损伤细胞系模型,分别用流式细胞术、Western blot检测不同细胞系的凋亡率和凋亡相关蛋白和含量,双荧光素酶报告基因验证miR-211-5p是否靶向调控EphB2。 结果:动物实验结果显示,术后不同时间点,SCI组的miR-211-5p在损伤后1、3、7、14、21和28 d水平低于假手术组(0.70 ± 0.03比1.00 ± 0.10、0.60 ± 0.04比1.00 ± 0.05、0.45 ± 0.10比1.00 ± 0.12、0.30 ± 0.06比1.00 ± 0.15、0.20 ± 0.05比1.00 ± 0.13、0.10 ± 0.02比1.00 ± 0.07),EphB2和ephrinB2水平高于假手术组(1.10 ± 0.05比1.00 ± 0.01、1.80 ± 0.01比1.00 ± 0.08、2.30 ± 0.01比1.00 ± 0.10、2.60 ± 0.01比1.00 ± 0.05、2.80 ± 0.01比1.00 ± 0.06、3.00 ± 0.01比1.00 ± 0.07,1.20 ± 0.05比1.00 ± 0.02、1.60 ± 0.01比1.00 ± 0.03、2.10 ± 0.10比1.00 ± 0.01、2.40 ± 0.11比1.00 ± 0.09、2.70 ± 0.13比1.00 ± 0.05、2.90 ± 0.12比1.00 ± 0.03),差异均有统计学意义( P<0.05);术后14 d,A组BBB评分高于B组和C组[(14.0 ± 1.1)分比(8.0 ± 1.1)和(8.2 ± 1.2)分],miR-211-5p水平高于B组和C组(1.90 ± 0.10比0.40 ± 0.01和0.50 ± 0.02),Eph/ephrin B2水平低于B组和C组(0.70 ± 0.10比1.80 ± 0.04和1.90 ± 0.06,0.60 ± 0.03比2.00 ± 0.04和2.10 ± 0.05),差异均有统计学意义( P<0.05);免疫荧光染色示,术后14 d A组GAP-43和突触素含量均高于B组和C组( P<0.05)。细胞实验结果显示,过表达miR-211-5p能够抑制H 2O 2诱导的PC12细胞凋亡率和细胞凋亡相关基因Cleaved-caspase3的表达( P<0.05)。敲低miR-211-5p能够提高H 2O 2诱导的PC12细胞凋亡率和细胞凋亡相关基因Cleaved-caspase3的表达( P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实EphB2是miR-211-5p的靶基因,过表达EphB2可拮抗miR-211-5p对H 2O 2诱导的PC12后细胞凋亡抑制作用。 结论:miR-211-5p可通过抑制Eph/ephrin B2信号通路的表达而促进SCI的神经功能修复,提示把Eph/ephrin B2作为靶点,采用miR-211-5p抑制Eph/ephrin B2信号通路可能对SCI有保护作用。
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编辑人员丨4天前
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重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白治疗中毒性表皮坏死松解症的临床疗效观察
编辑人员丨4天前
目的:评价重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc)治疗由药物引起的中毒性表皮坏死松解症(TEN)的疗效及安全性。方法:2009—2018年于苏州大学附属第二医院等8个中心纳入22例TEN患者,男10例、女12例,年龄22 ~ 75岁。采用rhTNFR:Fc 25 mg/次皮下注射治疗,首剂加倍,每3天1次,连续治疗6 ~ 8次。治疗前及治疗后第4、7、10、13、16、19、22、25天评估患者药疹面积和严重程度指数(DASI)评分、DASI改善指数(DASI50、DASI75、DASI90);微量样本多指标流式蛋白定量技术检测外周血及疱液TNF-α水平。治疗过程中监测患者体温、皮疹变化及肝肾功能,记录不良事件。统计分析采用重复测量方差分析、配对 t检验及Pearson相关分析。 结果:22例患者中,未合并感染的20例在首次治疗后24 ~ 72 h体温停止升高,48 ~ 120 h恢复正常。22例首次治疗后24 ~ 48 h控制水疱新发,48 ~ 96 h皮肤颜色由鲜红色转为暗紫色,2周后皮损基本恢复正常。治疗2 ~ 4周,19例肝功能异常患者丙氨酸转氨酶及天冬氨酸转氨酶水平恢复正常。治疗4 ~ 13 d,7例肾功能异常者肌酐、尿素氮得到控制。治疗过程中,22例患者DASI评分逐渐下降( F = 532.81, P<0.01),从治疗前53.64 ± 8.67降至治疗25 d时的2.05 ± 1.21( t = 26.60, P < 0.001)。治疗第10天,22例(100%)改善达DASI50;治疗第19天,22例(100%)改善达DASI75;治疗第25天,20例(90.90%)改善达DASI90。22例患者外周血TNF-α水平随治疗时间的延长逐渐降低,从治疗前(33.95 ± 27.90)ng/L降至第25天时(2.38 ± 0.79)ng/L。治疗前15例患者疱液TNF-α水平为(111.99 ± 99.41)ng/L,疱液/外周血TNF-α比值1.83 ~ 28.21。治疗前,22例患者血清TNF-α水平与DASI评分无明显相关性( P = 0.10),15例患者疱液TNF-α水平与DASI评分呈正相关( r = 0.59, P = 0.02)。治疗过程中未发现各种急性不良反应。22例患者均完成治疗并痊愈出院,出院后随访6个月未见复发及各种并发症。 结论:rhTNFR:Fc是治疗由药物引起的TEN有效及安全的药物。
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编辑人员丨4天前
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受体相互作用蛋白3介导自身免疫性肝炎肝脏单核细胞来源巨噬细胞募集
编辑人员丨4天前
目的:探索受体相互作用蛋白3(RIP3)对自身免疫性肝炎(AIH)肝脏单核细胞来源巨噬细胞浸润的调控作用。方法:纳入2018年1至6月于天津医科大学总医院消化科行肝穿刺活组织病理学检查的AIH患者10例,同期选择年龄和性别均匹配且无肝功能异常的5例肝囊肿患者作为对照,应用免疫荧光染色观察AIH患者和对照者肝组织单核细胞来源巨噬细胞浸润情况。将Raw264.7巨噬细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+RIP3抑制剂GSK872(GSK872)组,采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测巨噬细胞 RIP3、混合谱系蛋白激酶样结构域( MLKL)、 TNF- α、 IL-6、 IL-1 β、细胞炎性小体Nod样蛋白3( NLRP3)、CC趋化因子配体( CCL)2和 CCL5的mRNA水平;将Raw264.7巨噬细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+地塞米松组,采用qPCR检测巨噬细胞 TNF- α、 NLRP3、 RIP3和 MLKL的mRNA水平。选择24只6周龄雌性C57BL/6小鼠建立急性AIH小鼠模型,并将其分为对照组、刀豆蛋白A(ConA)组、ConA+地塞米松组和ConA+GSK872组(每组6只),处死小鼠后收集外周血和肝组织,观察小鼠肝脏病理学表现,测定血清ALT和AST水平,采用qPCR检测 CCL2和CC趋化因子受体2( CCR2)的mRNA水平,采用流式细胞术分析小鼠肝脏巨噬细胞比例。统计学方法采用独立样本 t检验和单因素方差分析。 结果:AIH患者肝脏CD68阳性组织驻留巨噬细胞(库普弗细胞)和MAC387阳性单核细胞来源巨噬细胞比例均高于对照者[(0.84±0.21)%比(0.09±0.03)%、(0.79±0.13)%比(0.03±0.01)%],差异均有统计学意义( t=3.00、4.84, P均<0.05)。脂多糖组巨噬细胞内 RIP3、 MLKL、 TNF- α、 IL-6、 IL-1 β、 NLRP3、 CCL2、 CCL5的mRNA水平均高于对照组和脂多糖+GSK872组(1.64±0.16比1.07±0.07和0.63±0.11,10.45±1.37比1.10±0.33和1.51±0.63,5.43±0.59比0.94±0.06和2.59±0.45,204.20±30.73比1.26 ±0.19和111.40±11.62,20 848.00±362.00比1.09 ±0.26和10 940.00±566.60,7.47±1.17比1.09±0.09和3.79±0.89,68.03±5.15比1.14±0.19和14.09±2.62,5 935.12±96.20比1.43±0.46和673.50±49.10),差异均有统计学意义( t=3.11、5.21,6.65、6.55,7.57、3.96,6.60、3.06,8.83、4.08,5.46、2.56,12.97、10.16,25.34、14.99; P均<0.05)。脂多糖组巨噬细胞 TNF- α、 NLRP3、 RIP3和 MLKL的mRNA水平均高于对照组和脂多糖+地塞米松组(8.85±1.43比1.44±0.43和3.63±0.63,6.42±0.86比0.99±0.12和2.07±0.17,1.72±0.21比0.93±0.09和0.43±0.07,6.87±0.85比1.62±0.31和1.41±0.29),差异均有统计学意义( t=4.95、3.33,6.24、4.95,3.04、5.11,5.77、6.07; P均<0.05)。ConA组小鼠肝脏表现出明显的炎症细胞浸润和点状坏死。ConA组小鼠的血清ALT和AST水平均高于对照组、ConA+地塞米松组和ConA+GSK872组[(2 569.00±45.44)U/L比(49.38±9.07)、(103.00±14.07)和(759.30±34.99) U/L,(3 335.00±88.79)U/L比(108.50±18.10)、(460.00±97.40)和(1 573.85±36.06) U/L],且ConA+地塞米松组小鼠的血清ALT和AST水平均低于ConA+GSK872组,差异均有统计学意义( t=5.54、5.42、3.90、4.63、4.16、3.79、6.70、2.71, P均<0.05)。ConA组小鼠肝脏 CCL2和 CCR2的mRNA水平均高于对照组、ConA+地塞米松组和ConA+GSK872组(92.64±10.57比0.78±0.15、5.64±1.00和9.47±2.06,5.73±0.39比0.98±0.22、2.18±0.22和2.98±0.33),差异均有统计学意义( t=7.66、7.24、5.87、8.71、8.58、5.45, P均<0.01)。ConA组小鼠肝脏CD45 +CD11b +F4/80 +总巨噬细胞比例和CD45 +CD11b hiF4/80 lo浸润的单核巨噬细胞比例均高于对照组、ConA+地塞米松组和ConA+GSK872组(0.86±0.02比0.73±0.03、0.68±0.02和0.72±0.03,0.56±0.02比0.08±0.02、0.11±0.01和0.08±0.01),CD45 +CD11b loF4/80 hi肝脏驻留巨噬细胞(库普弗细胞)比例低于对照组、ConA+地塞米松组和GSK872组(0.24±0.03比0.58±0.04、0.52±0.07和0.56±0.07),差异均有统计学意义( t=4.27、5.90、3.89,18.70、19.87、20.52,7.35、3.82、3.87, P均<0.05)。 结论:AIH患者肝脏巨噬细胞数量增加。RIP3信号介导免疫性肝炎肝脏单核细胞来源巨噬细胞浸润并可能成为AIH的潜在治疗靶点。
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编辑人员丨4天前
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血液标志物对中晚期非小细胞肺癌患者免疫检查点抑制剂疗效的预测作用
编辑人员丨4天前
目的:研究血液标志物对中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者免疫检查点抑制剂(ICIs)疗效的预测作用。方法:本研究为队列研究,采用非随机抽样的方法选取2018年8月至2021年12月于西安交通大学第二附属医院接受ICIs(包括免疫单药和免疫联合其他药物)治疗的128例中晚期NSCLC患者为研究对象。收集患者的临床资料(性别、年龄、吸烟状况、临床分期、美国东部肿瘤协作组体力活动状态评分、病理类型、程序性死亡受体配体1表达情况、远处转移情况、治疗方案、免疫相关不良反应)和接受免疫治疗前的血液标志物资料,随访获得无进展生存期,随访日期截至2022年6月30日。采用Log-rank检验比较不同临床特征、不同范围血液标志物NSCLC患者的生存状态,通过Kaplan-Meier法估计生存曲线,后退剔除法多因素Cox回归模型分析接受ICIs治疗的中晚期NSCLC患者疗效的独立预测标志物。结果:截至随访终止,128例接受ICIs治疗的中晚期NSCLC患者的中位无进展生存期为7.8个月(95% CI:5.6~10.0),客观缓解率和疾病控制率分别为43.0%(55/128)和85.2%(109/128)。美国东部肿瘤协作组体力活动状态评分0~1分患者的生存状态优于≥2分患者( χ2=6.49, P=0.011),无肝转移患者的生存状态优于肝转移患者( χ2=43.47, P<0.001),无脑转移患者的生存状态优于脑转移患者( χ2=4.69, P=0.030),发生免疫相关不良反应患者的生存状态优于不发生患者( χ2=6.60, P=0.010)。癌胚抗原(CEA)≤5 μg/L患者的生存状态优于>5 μg/L患者( χ2=4.12, P=0.042),神经元特异性烯醇化酶≤16.3 μg/L患者的生存状态优于>16.3 μg/L患者( χ2=5.99, P=0.014),细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)≤3.3 μg/L患者的生存状态优于>3.3 μg/L患者( χ2=9.14, P=0.003),糖类抗原125≤25 kU/L患者的生存状态优于>25 kU/L患者( χ2=11.10, P=0.001),中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)≤3.45患者的生存状态优于>3.45患者( χ2=8.56, P=0.003),衍生的中性粒细胞/淋巴细胞比值≤2.12患者的生存状态优于>2.12患者( χ2=6.69, P=0.010),全身免疫炎症指数≤738患者的生存状态优于>738患者( χ2=6.42, P=0.011)。多因素Cox回归模型分析表明,肝转移( HR=7.090,95% CI:3.183~15.795)、治疗线数( HR=2.449,95% CI:1.369~4.381)、CEA( HR=2.123,95% CI:1.279~3.524)、CYFRA21-1( HR=2.573,95% CI:1.319~5.020)、NLR( HR=2.640,95% CI:1.589~4.387)是接受ICIs治疗的中晚期NSCLC患者疗效的独立预测标志物(均 P<0.05)。 结论:在中晚期NSCLC患者中,CEA、CYFRA21-1和NLR是ICIs疗效的独立预测标志物。
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编辑人员丨4天前
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泛素特异性蛋白酶7基因的泛癌分析及其在瘢痕溃疡癌变中的表达
编辑人员丨4天前
目的:探讨泛素特异性蛋白酶7(USP7)在瘢痕溃疡癌变过程中的生物学作用及其临床意义。方法:采用回顾性观察性研究结合生物信息学分析方法。从癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因表达综合数据库中获取USP7在肿瘤和/或其对应癌旁正常组织中的RNA表达谱数据,并将RNA测序数据进行log 2转化。通过多维度癌症基因集cBioPortal数据库分析 USP7基因变异情况,并分析其突变位点。通过TIMER 2.0数据库中“差异表达”模块获得TCGA数据库中肿瘤、癌旁正常组织USP7 mRNA表达情况。使用基因表达谱交互分析2(GEPIA2)数据库分析皮肤黑色素瘤(SKCM)、宫颈鳞状细胞癌(CESC)、肺鳞状细胞癌(LUSC)和头颈鳞状细胞癌(HNSC)中高表达USP7患者与低表达USP7患者的生存率并绘制Kaplan-Meier生存曲线。利用Sangerbox数据库分析USP7在泛癌中的表达与微卫星不稳定性(MSI)或肿瘤突变负担(TMB)的相关性。通过GEPIA2数据库中“相关性分析”模块,评估USP7在泛癌中的表达与5种DNA错配修复基因( MLH1、 MSH2、 MSH6、 PMS2和 EPCAM)表达水平和3种必需DNA甲基转移酶(DNMT)——DNMT1、DNMT3A、DNMT3B表达水平的相关性。通过TIMER 2.0数据库中“免疫-基因”模块分析USP7在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中表达及其与免疫细胞(B细胞、CD4 +T细胞、CD8 +T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞)浸润的相关性。利用GEPIA2数据库的“相似基因检测”模块获得与USP7表达模式相似且排名前100的蛋白集。将前述蛋白集与利用STRING数据库获得的与USP7有直接物理结合作用且排名前50的蛋白集进行交集分析。通过DAVID数据库对上述2个蛋白集进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)富集分析。收集2018年10月—2022年10月武汉大学附属同仁医院暨武汉市第三医院病理科有相应临床病理特征的正常皮肤、增生性瘢痕、瘢痕溃疡、瘢痕癌的术后标本,采用免疫组织化学法检测组织中USP7表达情况,样本数为6。对数据行Log-rank检验、单因素方差分析及Bonferroni检验。 结果:在泛癌中, USP7的主要基因变异类型为突变和扩增,变异频率(>6%)居前3位的肿瘤依次为膀胱尿路上皮癌、SKCM和子宫内膜癌。 USP7基因在泛癌中的主要突变为错义突变。在突变频率最高的SKCM中,主要突变类型是USP7_ICP0_bdg结构域的错义突变。USP7 mRNA在乳腺浸润癌、胆管癌、结肠癌、食管癌、HNSC、肾嫌色细胞癌、肝细胞肝癌、肺腺癌、LUSC、前列腺癌和胃癌肿瘤组织中的表达均明显高于其对应的癌旁正常组织( P<0.05),在多形成性胶质细胞瘤、肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌和甲状腺癌中的表达均明显低于其对应的癌旁正常组织( P<0.05);此外,USP7 mRNA在SKCM转移组织中的表达远高于其原发肿瘤组织( P<0.05)。生存曲线显示,在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中,高表达USP7患者与低表达USP7患者的存活率比较,差异均无统计学意义(Log-rank P>0.05,风险比分别为1.00、0.99、1.00、1.30)。USP7在结肠癌、结直肠癌、胸腺癌、甲状腺癌中的表达均与TMB呈显著负相关(Pearson相关系数分别为-0.26、-0.19、-0.19和-0.11, P<0.05);USP7在神经胶质瘤、CESC、肺腺癌、混合肾癌、LUSC中的表达均与MSI呈显著正相关(Pearson相关系数分别为0.22、0.14、0.15、0.08和0.14, P<0.05),在结肠癌、结直肠癌、乳腺浸润癌、前列腺癌、HNSC、甲状腺癌和弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达均与MSI呈显著负相关(Pearson相关系数分别为-0.31、-0.27、-0.13、-0.19、-0.16、-0.18和-0.53, P<0.05)。USP7在CESC中的表达与MSH2和MSH6的表达均呈明显正相关(Spearman相关系数分别为0.51和0.44, P<0.05),在HNSC中的表达与EPCAM、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2的表达均呈明显正相关(Spearman相关系数分别为0.39、0.14、0.49、0.54和0.41, P<0.05),在LUSC中的表达与EPCAM、MSH2、MSH6和PMS2的表达均呈明显正相关(Spearman相关系数分别为0.20、0.36、0.40和0.34, P<0.05),在SKCM中的表达与EPCAM、MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的表达均呈明显正相关(Spearman相关系数分别为0.11、0.33、0.42、0.55和0.34, P<0.05);USP7在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中的表达与DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达均呈显著正相关(Spearman相关系数分别为0.42、0.34和0.22,0.45、0.52和0.22,0.36、0.36和0.22,0.38、0.46和0.21, P<0.05)。USP7在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中的表达仅与CD4 +T细胞浸润呈显著正相关(Partial相关系数分别为0.14、0.22、0.13、0.16, P<0.05)。与USP7表达模式相似且排名前100的蛋白集中,排名前5的蛋白依次是C16orf72、BCLAF1、UBN、GSPT1、ERI2(Spearman相关系数分别为0.83、0.74、0.73、0.73和0.72, P值均<0.05)。与USP7有直接物理结合作用且排名前50的蛋白集与前述蛋白集的交集仅有1个蛋白,即为甲状腺激素受体相互作用因子12。KEGG富集分析显示,USP7相关基因涉及细胞周期、剪接体、细胞衰老和p53信号通路等。GO富集分析显示,USP7相关基因涉及转录调控、蛋白质泛素化、DNA修复和细胞质模式识别受体信号通路等。临床样本分析显示,USP7在增生性瘢痕(0.35±0.05)、瘢痕溃疡(0.43±0.04)和瘢痕癌(0.61±0.03)中的表达均明显高于正常皮肤(0.18±0.04), P<0.05。 结论:USP7可能为临床瘢痕溃疡癌变恶化的生物标志物。
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编辑人员丨4天前
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三氯化钆对Sprague Dawley大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响及作用机制
编辑人员丨4天前
目的:分析三氯化钆对Sprague Dawley(SD)大鼠肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)的影响和相关机制。方法:无特殊病原体雄性SD大鼠36只,8周龄,体质量200~250 g,简单随机化分为假手术组、模型组、三氯化钆组,每组12只。模型组制备HIRI模型,三氯化钆组制备HIRI模型前腹腔注射三氯化钆,假手术组仅开腹、关腹、解剖肝门。检测三组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)。PCR检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA相对表达。蛋白质电泳检测Toll样受体2/髓样分化因子88(MyD88)信号通路蛋白相对表达。免疫组化检测肝门部胆管上皮细胞Fas、Fas配体阳性百分比。结果:假手术组ALT、AST分别为(55±8)U/L、(92±22)U/L,低于模型组的(1 247±62)U/L、(1 117±60)U/L,三氯化钆组分别为(622±50)U/L、(552±41)U/L,低于模型组,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与假手术组比较,模型组TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA相对表达升高,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与模型组比较,三氯化钆组TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA相对表达降低,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。三氯化钆下调大鼠缺血再灌注肝组织中Toll样受体2/MyD88信号通路蛋白表达。模型组Fas阳性细胞百分比为(40.2±3.8)%、Fas配体阳性细胞百分比为(36.9±2.9)%,高于三氯化钆组的(29.7±2.3)%、(23.6±2.1)%,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:三氯化钆减轻肝脏缺血再灌注SD大鼠肝功能损伤、抑制肝组织炎症因子表达,可能通过下调Toll样受体2/MyD88信号通路相关蛋白表达发挥保护作用。
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编辑人员丨4天前
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乙型肝炎病毒X蛋白促进磷脂酶A 2受体表达加重足细胞焦亡的机制
编辑人员丨4天前
目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)诱导足细胞膜上M型磷脂酶A 2受体(PLA 2R)表达增加对乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)中足细胞焦亡的影响及其作用机制。 方法:采用转染HBx基因至人肾脏足细胞内的方法模拟HBV-GN发病过程,并将足细胞分为以下8组:正常对照+分泌型磷脂酶A 2-ⅠB(sPLA 2-ⅠB)组、空白质粒+sPLA 2-ⅠB组、HBx组、HBx+sPLA 2-ⅠB组、HBx+sPLA 2-ⅠB+PLA 2R对照siRNA组、HBx+sPLA 2-ⅠB+PLA 2R-siRNA组、HBx+sPLA 2-ⅠB+ROS对照siRNA组及HBx+sPLA 2-ⅠB+ROS-siRNA组。电镜下观察足细胞形态,荧光显微镜下利用免疫荧光染色观察足细胞膜上PLA 2R的表达,流式细胞术分析足细胞焦亡率及活性氧(ROS)表达,实时荧光定量PCR及Western 印迹测定PLA 2R、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素(IL)-1β及IL-18 mRNA及蛋白的表达情况。 结果:与正常对照组相比,体外转染HBx质粒后足细胞膜上M型PLA 2R表达增加(4.07±0.41比1.01±0.17, P<0.001),电镜及胱天蛋白酶荧光染料抑制物/碘化丙啶(FLICA/PI)双染细胞焦亡检测提示过表达的PLA 2R与其配体sPLA 2-ⅠB结合后足细胞损伤加重,焦亡程度增加(20.22%±0.36%比7.86%±0.28%, P<0.001),且PLA 2R过表达时ROS(4 324 515±222 764比12 920±46, P<0.001)、NLRP3(48.30±2.73比1.00±0.11, P<0.001)、ASC(4.02±0.84比1.01±0.15, P<0.001)、caspase-1(3.99±0.42比1.00±0.11, P<0.001)、IL-1β(9.08±0.75比1.00±0.09, P<0.001)及IL-18(19.20±0.70比1.00±0.02, P<0.001)表达水平增加。相反,加入PLA 2R-siRNA或ROS-siRNA敲低相关物质表达后,足细胞损伤减轻,焦亡程度下降,下游信号通路相关基因NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β及IL-18基因表达均减少(均 P<0.01)。 结论:HBx可能通过上调PLA 2R靶向ROS-NLRP3信号通路促进HBV-GN中足细胞焦亡。
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编辑人员丨4天前
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基于网络药理学的麦冬五味子联用方抗动脉粥样硬化机制研究
编辑人员丨4天前
目的:通过网络药理学挖掘和实验方法,考察麦冬五味子联用方抗动脉粥样硬化的作用,探讨其作用机制。方法:从TCMGeneDIT数据库系统中,挖掘麦冬、五味子靶点蛋白,构建麦冬-五味子多成分-蛋白网络,提取显著性差异的子网络中蛋白并进行信号通路映射。将ApoE-等位基因敲除小鼠按随机数字表法分成对照组,模型组,低、中、高剂量组和阿托伐他汀钙片组,每组6只。除对照组外,其余各组以H10540高脂饲料喂饲12周。第4周开始给药,阿托伐他汀钙片组灌胃阿托伐他汀钙片混悬液6 mg/kg,低、中、高剂量组灌胃麦冬五味子混煎液4.68、2.34、1.17 g/kg,1次/d,连续灌胃8周。采用油红染色观察动脉粥样硬化主动脉管壁病理学改变。采用Western blot法检测肝组织促分裂素原活化蛋白激酶p38(mitogen-activated protein kinases p38, p38)、ATP结合盒亚家族G成员1(ATP binding cassette subfamily G member 1, ABCG1)、Toll样受体4(toll-like receptor 4, TLR4)、热休克蛋白90α家族A成员1 (heat shock protein 90 alpha family class A member 1, HSP90AA1)、MMP-9和花生四烯酸5脂氧合酶(arachidonate 5-Lipoxygenase, ALOX5)蛋白表达,以及脑组织核因子E相关因子(nuclear factor related factor, Nrf2)和血红素加氧酶1(hemeoxygenase 1, HO-1)蛋白表达。结果:发现麦冬五味子联用方中有11个成分,与数据库中挖掘到的37个蛋白有匹配,构成48个结点、190条边界的成分-蛋白网络,提取显著性差异蛋白网络中 P<0.05的子网络1个。与模型组比较,低、中、高剂量组小鼠肝组织p-p38/p38 [(2.12±0.12)、(1.76±0.11)、(1.69±0.10)比(2.45±0.16)]、TLR4[(1.98±0.10)、(1.64±0.11)、(1.55±0.12)比(2.68±0.06)]、HSP90AA1[(1.79±0.10)、(1.66±0.09)、(1.59±0.11)比(2.06±0.07)]、MMP-9[(1.84±0.11)、(1.75±0.12)、(1.66±0.08)比(2.68±0.10)]蛋白表达降低( P<0.05),ABCG1[(0.53±0.08)、(0.78±0.09)、(0.81±0.10)比(0.45±0.04)]、ALOX5[(0.59±0.04)、(0.67±0.09)、(0.88±0.07)比(0.47±0.02)]蛋白表达升高( P<0.05),脑组织细胞质Nrf2[(1.62±0.12)、(1.32±0.09)、(1.14±0.06)比(2.12±0.08)]蛋白表达降低( P<0.05),细胞核中Nrf2[(1.12±0.09)、(1.61±0.07)、(1.68±0.11)比(1.07±0.08)]蛋白表达升高( P<0.05),HO-1[(1.16±0.09)、(1.73±0.11)、(1.82±0.08)比(1.05±0.04)]蛋白表达升高( P<0.05)。 结论:本研究采用网络药理学和分子生物学方法,阐释了麦冬五味子联用防治动脉粥样硬化的分子机制,并且在氧化应激诱导Nrf2途径上进行验证,为联用方的进一步研究提供参考。
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编辑人员丨4天前