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去泛素连接酶USP9X通过调控FOXM1介导糖酵解影响鼻咽癌细胞增殖的机制研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨去泛素连接酶USP9X(deubiquitin ligase 9X)是否通过调控叉头框蛋白M1(forkhead box M1,FOXM1)介导糖酵解从而影响鼻咽癌细胞的增殖能力.方法:采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测鼻咽癌组织和正常鼻黏膜组织以及鼻咽癌细胞中USP9X mRNA和蛋白的表达情况.通过病毒感染的方法将携带有特异性针对USP9X基因的shRNA(shUSP9X)和携带有USP9X全基因的重组质粒Flag-USP9X(过表达USP9X)分别转入鼻咽癌CNE2和HNE2细胞,采用CCK-8法检测沉默或过表达USP9X基因对鼻咽癌细胞增殖的影响,通过对细胞能量代谢和细胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR)的检测分析对鼻咽癌细胞糖酵解能力的影响.通过ubibrowser_v3/数据库、免疫共沉淀和ZDOCK软件分析USP9X与FOXM1蛋白的结合情况,并通过泛素化实验观察沉默USP9X对FOXM1蛋白泛素化水平的影响;随后进一步通过实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测对FOXM1 mRNA和蛋白表达的影响.最后,采用慢病毒感染的方法在沉默USP9X表达的CNE2细胞中同时转入重组载体Flag-FOXM1恢复FOXM1的表达,再通过CCK-8法、细胞能量代谢和ECAR检测分析上调FOXM1对CNE2细胞增殖和糖酵解能力的影响.结果:与正常鼻黏膜组织相比,鼻咽癌组织中USP9X mRNA和蛋白的表达水平均显著提高(P均<0.05).下调鼻咽癌CNE2细胞中USP9X的表达水平后,CCK-8法、细胞能量代谢检测和ECAR实验检测发现,CNE2细胞的增殖和糖酵解能力均被明显抑制(P均<0.05).相反,上调HNE2细胞中USP9X的表达水平后,HNE2细胞的增殖和糖酵解能力均被明显提高(P均<0.05).通过ubibrowser_v3/数据库、免疫共沉淀和ZDOCK软件证实,USP9X与FOXM1蛋白存在相互结合的关系,CNE2细胞中沉默USP9X表达水平可显著增加FOXM1的泛素化水平.在低表达USP9X的CNE2细胞中过表达FOXM1可恢复鼻咽癌细胞的增殖和糖酵解能力(P均<0.05).结论:去泛素连接酶USP9X通过抑制FOXM1泛素化降解进而提高鼻咽癌细胞的糖酵解能力,最终促进鼻咽癌细胞的增殖.USP9X可能是鼻咽癌治疗上一个潜在的新靶点.
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编辑人员丨5天前
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去线性泛素化酶OTULIN促进胃癌细胞的有氧糖酵解及增殖
编辑人员丨5天前
目的:检测去泛素化酶卵巢肿瘤(ovarian tumor,OUT)结构域线性链接 特异性(OUT domain deubiquitinase with linear linkage specificity,OTULIN)在胃癌组织中的表达情况,并探讨敲除OTULIN基因表达对胃癌MKN45和AGS细胞增殖的影响,及可能的作用机制.方法:采用免疫组织化学法检测73例胃癌组织与24例正常胃黏膜组织中OTULIN的表达水平,分析OTULIN表达与胃癌临床病理特征和患者预后的相关性.收集并分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus database,GEO)中的胃癌数据验证上述结论.采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建敲除OTULIN表达的胃癌MKN45和AGS细胞并用蛋白质印迹法检测基因敲除效率;采用CCK-8法和软琼脂克隆检测敲除OTULIN表达对MKN45和AGS细胞增殖的影响.蛋白免疫沉淀-质谱技术筛选OTULIN和线性泛素分子(INT-Ub.7KR)的共同互作蛋白,发现线性泛素化修饰底物蛋白.利用丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)活性试剂盒检测敲除OTULIN表达后糖酵解限速酶的活性变化,乳酸定量试剂盒检测乳酸生成情况.最后采用免疫共沉淀及蛋白质印迹法验证OTULIN对底物蛋白线性泛素化作用.结果:免疫组织化学法检测结果显示,OTULIN在胃癌组织中的表达水平明显高于正常胃黏膜组织(P=0.004 1),肿瘤组织中OTULIN高表达者生存期较短(P=0.007 7).TCGA和GEO数据库数据分析也显示胃癌组织OTULIN表达水平升高(P<0.05),且OTULIN高表达与患者不良预后相关(P=0.011).统计结果显示,OTULIN高表达与TNM分期晚密切相关(P=0.027 3),预测患者较短生存期(P=0.04).敲除OTULIN基因可显著抑制胃癌细胞的增殖能力(P均<0.001),降低胃癌细胞中PK活性和乳酸生成水平(P均<0.01).OTULIN可结合糖酵解途径的多个限速酶并下调它们的线性泛素化水平,包括丙酮酸激酶M1(pyruvate kinase M1,PKM1)和 PKM2 以及乳酸脱氢酶 A(lactate dehydrogenase A,LDHA)和 LDHB.结论:胃癌中OTULIN高表达可能是评估患者预后的一个新的生物标志物,OTULIN可能通过下调糖酵解限速酶的线性泛素化修饰,激活胃癌糖酵解途径,促进胃癌发展.
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编辑人员丨5天前
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USP11调控VEGF表达及血管形成促进肝癌细胞的侵袭和转移
编辑人员丨5天前
目的:探究去泛素化酶11(USP11)调控VEGF和血管形成促进肝癌细胞侵袭和转移能力的机制.方法:运用Real-time PCR实验检测USP11 对肝癌细胞中VEGF基因表达水平的影响;应用Elisa实验检测USP11 对肝癌细胞分泌VEGF蛋白的影响;利用对照组和USP11 敲低组肝癌细胞分泌上清分别处理血管内皮细胞HUVECs,运用Transwell基质胶实验检测血管内皮细胞的迁移能力;运用CCK-8 实验检测血管内皮细胞的增殖能力;运用小管形成实验检测血管内皮细胞的成管能力.结果:敲低USP11 可降低肝癌细胞中VEGF的基因表达水平(P<0.01),并抑制肝癌细胞分泌VEGF蛋白(P<0.001);与对照组相比,敲低USP11 的肝癌细胞分泌上清处理血管内皮细胞,血管内皮细胞的增殖能力减弱(P<0.01),成管能力也远低于对照组;两组肝癌细胞和血管内皮细胞共培养,基质胶实验表明,敲低USP11 组,血管内皮细胞的迁移能力降低(P<0.01).结论:USP11 可以增加VEGF的基因转录和蛋白表达水平,增强血管内皮细胞的增殖、迁移和成管能力,进而促进肝癌细胞的侵袭和转移.
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编辑人员丨5天前
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去泛素化酶ABRO1对李斯特菌感染单核巨噬细胞IL-1β释放的影响及其机制
编辑人员丨5天前
目的 观察去泛素化酶Abraxas兄弟蛋白(ABRO1)对李斯特菌(LM)感染的小鼠单核巨噬细胞J774A.1白细胞介素(IL)-1β释放的影响,并探讨相关机制.方法 培养J774A.1细胞,分别感染有李斯特菌溶血素O(LLO)的野生型LM菌株(野生型组)、敲除LLO的hly基因缺失(Δhly)LM菌株(基因缺失组)及Δhly株回补hly基因的LM菌株(回补株组),采用Western blotting法检测ABRO1蛋白,ELISA法检测细胞培养液上清中的IL-1β.将J774A.1细胞分为NI组(未感染LM菌株)、WT组(感染WT LM菌株)与Δhly组(感染Δhly LM菌株),各组分别转染NC siRNA、ABRO1 siRNA,采用ELISA法检测细胞培养液上清中的IL-1β,采用Western blotting法检测炎症小体相关分子Caspase-1、p20(Caspase-1活化形式)、IL-1β、p17.结果 随着感染时间延长,野生型组、回补株组ABRO1表达、IL-1β水平逐渐增高,在感染120 min达到最高、均高于基因缺失组(P均<0.05);基因缺失组不同时点ABRO1表达、IL-1β水平无明显变化.WT组转染ABRO1 siRNA的细胞培养液上清中IL-1β水平及p20、p17表达低于转染NC siRNA的细胞(P均<0.05);WT组转染NC siRNA的细胞培养液上清中IL-1β水平及p20、p17表达高于NI组(P均<0.05);Δhly组转染NC siRNA的细胞培养液上清中IL-1β水平及p20、p17表达低于WT组(P均<0.05).结论 李斯特菌感染的J774A.1细胞中ABRO1表达增高,下调ABRO1表达后,J774A.1细胞中IL-1β释放减少;LLO可能通过激活炎症小体从而促进LM感染诱导的IL-1β释放.
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编辑人员丨5天前
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脑胶质瘤组织去泛素化酶USP9X表达水平与病人生存预后的关系
编辑人员丨5天前
目的 探讨脑胶质瘤组织去泛素化酶USP9X表达水平与病人生存预后的关系.方法 选取2016年6月至2018年6月手术切除的108例脑胶质瘤组织标本和25例颅内减压术中切除的正常脑组织为对照,免疫组织化学染色法检测组织USP9X蛋白表达水平,根据染色强度评分和阳性细胞比例评分≥4分定为高表达.随访截止2023年5月,计算总体生存时间.结果 108例胶质瘤中,WHO分级Ⅱ级38例,Ⅲ级46例,Ⅳ级24例.WHO分级Ⅳ级(79.17%)、Ⅲ级(58.69%)、Ⅱ级(39.47%)脑胶质瘤组织USP9X高表达率均明显高于正常脑组织(24.00%,P<0.05),并且WHO分级越高,USP9X高表达率越高(P<0.05).随访期间,失访8例,死亡68例(高表达组51例,低表达组17例).多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示USP9X高表达是脑胶质瘤不良生存预后的独立危险因素(OR=2.173;95%CI 1.412~5.572;P<0.001),生存曲线分析显示USP9X高表达病人的中位总体生存期较低表达病人明显缩短(P<0.05).结论 脑胶质瘤组织USP9X呈高表达,与病人不良生存预后有关.
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编辑人员丨5天前
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组蛋白H2A去泛素化酶BAP1对恶性胶质瘤细胞发生发展的作用及临床应用价值研究
编辑人员丨5天前
目的 探索乳腺癌/卵巢癌易感基因1相关蛋白1(breast/ovarian cancer susceptibility gene 1 associated protein 1,BAP1)对人源恶性胶质瘤发生、发展的作用与BAP1 作为恶性胶质瘤临床诊断标志物的可行性.方法 基于基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)的子数据集GSE4290,GSE90598,分析BAP1 在正常组织及胶质瘤组织中的差异性表达情况;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析BAP1 对恶性胶质瘤的早期诊断价值;选取自主收集的非配对 28 例恶性胶质瘤患者的原发灶组织、5 例颅脑外伤患者内减压术切除的非瘤脑组织,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测BAP1 的表达水平;利用靶向BAP1 的特异性小干扰RNAs(small interfering RNAs,siRNAs)瞬时转染U251 细胞系,进一步检测其干涉效率;基于流式细胞仪分析BAP1 下调的U251 细胞系,其细胞周期、凋亡的变化情况.结果 生物信息学结果显示,BAP1 在恶性胶质瘤组织中的表达水平均低于正常脑组织(GSE4290:1 209±18.49 vs 1 476±53.90;GSE90598:5.19±0.10 vs 5.65±0.21),差异具有统计学意义(t=5.115,2.267,均P<0.05).ROC曲线显示,BAP1 可高效区分恶性胶质瘤组织与正常脑组织(GSE4290:AUC=0.78;GSE90598:AUC=0.75,均P<0.05).临床标本结果显示,BAP1 在恶性胶质瘤原发灶组织中的表达水平显著低于非瘤脑组织(0.27±0.04 vs 1.06±0.07),差异具有统计学意义(t=10.22,P<0.001).在U251 细胞系中下调BAP1 的表达,其细胞周期中S期细胞比例明显增多,由 17.59%分别增至 27.21%(siBAP1-1)和25.79%(siBAP1-2),差异具有统计学意义(t=6.576,6.642,均P<0.01),而细胞凋亡水平则有所下降,由10.17%分别降至2.70%(siBAP-1)和3.00%(siBAP-2),差异具有统计学意义(t=10.31,9.428,均P<0.01).结论 组蛋白H2A去泛素化酶BAP1 能够通过抑制恶性胶质瘤细胞周期快速进展并促进其凋亡,进而发挥肿瘤抑癌基因的功能,可作为潜在的恶性胶质瘤临床诊断标志物.
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编辑人员丨5天前
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泛素特异性蛋白酶11在中枢神经系统疾病中的作用研究进展
编辑人员丨5天前
泛素特异性蛋白酶11(USP11)是泛素特异性蛋白酶(USPs)家族成员之一,通过介导底物的去泛素化过程,抑制靶蛋白的泛素-蛋白酶体降解,进而参与细胞周期进程、DNA损伤修复、细胞死亡、自噬、信号传导、免疫炎症反应及大脑皮层发育等多种病理生理过程的调节。研究表明,USP11在中枢神经系统(CNS)疾病的发生发展进程中具有重要作用。本文围绕USP11的结构、功能及其在CNS疾病中的作用机制研究进展进行综述,以期为靶向USP11治疗相关疾病提供新的思路。
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编辑人员丨5天前
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去泛素化酶通过肿瘤坏死因子-α途径对小鼠心肌衰老的作用
编辑人员丨5天前
目的:探讨去泛素化酶(CYLD)在小鼠心肌细胞衰老中的作用及机制。方法:选取野生型FVB(WT)小鼠和CYLD过表达(CYLD +/+)小鼠构建自然衰老模型。2月龄雄性WT小鼠(WT-2M, n=10)和CYLD +/+小鼠(CYLD-2M, n=10)作为年轻组,普通饲养17.5月(WT-17.5M,CYLD-17.5M, n=10)作为年老组。小动物超声检测心功能[左室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)],蛋白免疫印迹检测心肌组织衰老相关蛋白p53、p21、p16表达水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测心肌组织衰老相关分泌表型(SASP) [细胞因子白介素-1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、趋化因子CXCL1(CXCL1)]转录水平。转录组测序检测CYLD调控心肌细胞衰老的信号通路,对肿瘤坏死因子α(TNF-α)通路行qPCR验证。 结果:与WT-17.5M小鼠比较,CYLD-17.5M小鼠心功能LVEF和LVFS值增高(均 P<0.05);p53、p21、p16蛋白表达水平减低(均 P<0.05),IL1B、MMP3、CXCL1转录水平也下降(均 P<0.05)。与WT-2M小鼠比较,WT-17.5M小鼠p53、p21、p16蛋白表达明显升高(均 P<0.01),IL1B、MMP3及CXCL1转录水平上调(均 P<0.01)。转录组测序发现WT-17.5M小鼠较WT-2M小鼠表达上调的信号通路64个,CYLD-17.5M小鼠较WT-17.5M小鼠表达下调的信号通路37个,二者共有的差异信号通路29个。选取TNF-α通路行qPCR验证,WT-17.5M较WT-2M小鼠TNF-α转录水平明显上调( P<0.05),且高于CYLD-17.5M小鼠( P<0.05)。 结论:CYLD对心肌自然衰老起保护作用,TNF-α通路介导可能是CYLD保护心肌衰老的作用机制之一。
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编辑人员丨5天前
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USP7在前列腺癌发病机制中的研究
编辑人员丨5天前
去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的产生使前列腺癌传统的内分泌疗法受到挑战,越来越多的研究转向从分子水平寻找合适的靶点来抑制癌症的进展。泛素特异性蛋白酶7(USP7)是一种重要的去泛素化酶,以翻译后修饰的方式调控关键蛋白的半衰期或亚细胞定位。近期的研究结果表明,USP7在前列腺癌细胞中显示出明显的促癌效应,但机制复杂,本文对USP7在前列腺癌中的作用机制进行综述。
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编辑人员丨5天前
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BICD1基因促进脑胶质瘤恶性进展的多组学研究
编辑人员丨5天前
目的:基于空间转录组、单细胞转录组和RNA转录组测序数据探讨BICD1基因促进脑胶质瘤恶性进展的分子机制。方法:基于空间转录组公共数据集分析BICD1基因在正常脑组织(样本"248_C")和胶质母细胞瘤组织(样本"275_T")中的空间分布特征。采用R语言软件包分析中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中单细胞测序数据(来源于14例患者的6 148个细胞),明确BICD1基因在胶质瘤不同细胞类型中的表达差异。基于CGGA数据库中693例脑胶质瘤患者的RNA测序数据,采用京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析及基因本体论分析BICD1基因相关基因的生物学功能。结果:BICD1基因在正常脑组织中表达广泛,在胶质母细胞瘤组织中特异性地表达于肿瘤干细胞与肿瘤细胞的分界处。根据单细胞测序数据进行的细胞分群分析表明,BICD1基因主要在星形胶质细胞中高表达。在Neftel分型中,BICD1基因高表达细胞主要分布在星形胶质细胞样细胞群和神经前体样细胞群中。BICD1基因表达水平相关差异基因的KEGG通路富集分析显示,BICD1基因高表达与细胞衰老( P=0.003)、癌症中的蛋白聚糖( P=0.004)等癌症相关生物学功能的聚集相关,与肌动蛋白细胞骨架的调节( P=0.010)等胞内运输过程的功能聚集相关;BICD1基因低表达与核糖体相关功能( P<0.001)及氧化磷酸化( P<0.001)等生物学过程的聚集相关。BICD1基因表达水平相关差异基因的生物学功能聚类分析显示,与BICD1基因表达水平相关性较强的生物学功能有细胞质翻译( P<0.001)、核糖体亚单位装配( P=0.001)、染色体分离调控( P=0.004)及染色体分离( P=0.004)等。BICD1基因的表达水平与多泛素修饰依赖性蛋白结合( P=0.046)、泛素-泛素连接酶活性( P=0.033)、蛋白质解聚负调控( P=0.010)、单泛素化蛋白质去泛素化( P=0.026)、肌动蛋白丝加帽( P=0.007)、肌动蛋白丝解聚( P=0.013)等生物学过程相关。 结论:BICD1蛋白可能在脑胶质瘤前体肿瘤细胞中参与蛋白泛素化降解及细胞骨架相关的胞内运输,调控细胞衰老和细胞分裂等生物学过程,在这些细胞的恶性转变过程中起到关键作用。
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编辑人员丨5天前