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微小RNA-296在兔增生性瘢痕中的表达及对人成纤维细胞的作用
编辑人员丨1周前
目的:探讨微小RNA-296(miR-296)在兔增生性瘢痕中的表达及对人成纤维细胞(HFb)的作用。方法:采用实验研究方法。将12只雌雄不限成年新西兰长耳兔按完全随机法分为正常对照组和瘢痕组,每组6只。瘢痕组根据文献制作兔耳增生性瘢痕模型,正常对照组兔不行任何处理。于瘢痕组建模后60 d,采用苏木精-伊红染色法观察2组兔耳瘢痕/皮肤组织中成纤维细胞(Fb)生长与排列,采用实时荧光定量反转录PCR法检测2组兔耳瘢痕/皮肤组织中miR-296和转化生长因子β 1(TGF-β 1)的mRNA表达量,另对miR-296与TGF-β 1mRNA表达量的相关性进行Pearson回归分析。取2批HFb,第1批分为TGF-β 1野生型+miR-296阴性对照组和TGF-β 1野生型+miR-296模拟物组,第2批分为TGF-β 1突变型+miR-296阴性对照组和TGF-β 1突变型+miR-296模拟物组,分别转染对应的序列。转染后48 h,采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测每组细胞TGF-β 1的荧光素酶和肾荧光素酶的表达,以其比值反映基因表达水平。取2批HFb,每批细胞均分为miR-296阴性对照组和miR-296模拟物组,分别转染对应序列。第1批细胞转染后0(即刻)、12、24、36、48 h,采用噻唑蓝法检测细胞增殖情况。第2批细胞转染后24 h,采用蛋白质印迹法检测细胞中TGF-β 1和Ⅰ型胶原蛋白表达情况。细胞实验中样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、独立样本 t检验。 结果:瘢痕组建模后60 d,瘢痕组兔耳瘢痕组织中Fb过度增生且排列紊乱,正常对照组兔耳皮肤组织中Fb生长与排列无异常;瘢痕组兔耳瘢痕组织中miR-296的mRNA表达量(0.65±0.11)显著低于正常对照组兔耳皮肤组织(1.19±0.12, t=5.175, P<0.01),瘢痕组兔耳瘢痕组织中TGF-β 1的mRNA表达量(1.47±0.06)显著高于正常对照组兔耳皮肤组织(1.10±0.03, t=12.410, P<0.01)。Pearson回归分析显示,12只兔耳瘢痕/皮肤组织中miR-296和TGF-β 1的mRNA表达量呈明显负相关( F=7.278, P<0.05)。转染后48 h,TGF-β 1野生型+miR-296模拟物组细胞TGF-β 1的基因表达明显低于TGF-β 1野生型+miR-296阴性对照组( t=35.190, P<0.01),2个TGF-β 1突变型组TGF-β 1基因表达相近( P>0.05)。miR-296模拟物组细胞增殖能力在转染后12、24、36、48 h明显低于miR-296阴性对照组( t=3.275、11.980、10.460、17.260, P<0.05或 P<0.01)。转染后24 h,miR-296阴性对照组细胞TGF-β 1和Ⅰ型胶原的蛋白表达量均明显高于miR-296模拟物组( t=3.758、29.390, P<0.05或 P<0.01)。 结论:兔增生性瘢痕中miR-296表达下调,miR-296能够通过下调TGF-β 1的表达抑制HFb的增殖和Ⅰ型胶原蛋白的表达。
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编辑人员丨1周前
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微小RNA-296-3p靶向核蛋白1调控舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究
编辑人员丨1周前
目的:研究微小RNA-296-3p对舌鳞状细胞癌(简称舌鳞癌)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法:以正常口腔上皮黏膜角质细胞HOK为对照,实时定量聚合酶链反应法检测舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p和核蛋白1(NUPR1) mRNA的表达,蛋白印迹法检测NUPR1蛋白表达水平。CAL27细胞分为对照组(NC组)、miR-con组、miR-296-3p组、si-con组、si-NUPR1组、miR-296-3p+pcDNA组和miR-296-3p+pcDNA-NUPR1组,细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证CAL27细胞中miR-296-3p与NUPR1的调控关系。结果:与HOK细胞相比,在舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p的含量显著降低(0.54 ± 0.08、0.38 ± 0.05、0.59 ± 0.07比1.04 ± 0.12, t = 10.401、15.231、9.718, P均<0.05),NUPR1 mRNA (5.94 ± 0.40、4.48 ± 0.45、5.19 ± 0.48比0.94 ± 0.12, t = 35.918、22.803、25.769)和NUPR1蛋白(0.79 ± 0.09、0.54 ± 0.05、0.62 ± 0.08比0.28 ± 0.04, t = 15.535、12.182、11.404)表达量均显著升高( P均<0.05)。与NC组、miR-con组相比,miR-296-3p组CAL27细胞活性、迁移数、侵袭数及PCNA、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均降低( P均<0.05)。与NC组、si-con组相比,si-NUPR1组CAL27细胞活性、迁移数、侵袭数及PCNA、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均降低( P均<0.05)。miR-296-3p在CAL27细胞负调控NUPR1表达。与miR-296-3p+pcDNA组相比,miR-296-3p+pcDNA-NUPR1组CAL27细胞活性(138.34 ± 5.73比98.54 ± 5.89, t = 14.530)、迁移数(95.28 ± 7.56比67.92 ± 5.23, t = 8.929)、侵袭数(184.53 ± 17.57比101.26 ± 10.64, t = 12.162)及PCNA (0.68 ± 0.07比0.35 ± 0.06, t = 10.738)、MMP-2(0.43 ± 0.05比0.29 ± 0.04, t = 6.559)和MMP-9(0.58 ± 0.06比0.33 ± 0.08, t = 7.500)的蛋白表达均升高( P均<0.05)。 结论:miR-296-3p通过靶向负调控NUPR1表达抑制舌鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。
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编辑人员丨1周前
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微小RNA-296对三阴性乳腺癌增殖与凋亡的影响
编辑人员丨1周前
目的:检测微小RNA(miR)-296在三阴性乳腺癌(TNBC)组织及细胞株中的表达,探讨miR-296对TNBC细胞增殖,凋亡的影响及其机制。方法:TNBC细胞株人乳腺癌细胞-231(MDA-MB-231),人乳腺癌细胞-453(MDA-MB-453)及人正常乳腺上皮细胞(MCF10A)购自中国科学院上海细胞生物学研究所,miR-296的过表达及干扰质粒分别转染至细胞株中,细胞分组为MDA-MB-231、MDA-MB-231-mimics、MDA-MB-231-anti-sh296及MDA-MB-453、MDA-MB-453-mimics、MDA-MB-453-anti-sh296;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-296在各组细胞中的相对表达量;使用LipofectamineTM 2000脂质体转染miR-296至细胞中,Real-time PCR证实转染成功后;通过细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)检测对细胞生存率的影响;通过集落形成实验检测细胞的增殖能力;流式细胞实验检测miR-296对细胞凋亡的影响。应用SPSS 16.0统计软件分析。结果:与癌旁组织比较,miR-296在TNBC组织中的含量明显降低(0.48±0.23比1.00±0.25, t=10.89, P<0.01)。miR-296在TNBC细胞株MDA-MB-231,MDA-MB-453中的表达明显低于正常乳腺上皮细胞MCF10A(0.19±0.08比1.00±0.26, t=8.36, P<0.01;0.46±0.19比1.00±0.26, t=4.68, P<0.01);与对照组比较,过表达miR-296后MDA-MB-231-mimics和MDA-MB-453-mimics细胞生存率低于转染前[(65.81±10.49)%比(99.39±22.58)%, t=3.82, P<0.01],[(73.17±11.81)%比(100.13±19.35)%, t=3.36, P<0.01];而给予干扰miR-296后细胞生存率较转染前升高;过表达miR-296后,细胞MDA-MB-231-mimics和MDA-MB-453-mimics的克隆相对值明显低于对照组(0.23±0.10比0.99±0.23, t=8.12, P<0.01),(0.43±0.16比1.01±0.20, t=6.44, P<0.01);而干扰miR-296后的克隆相对值明显高于对照组;过表达miR-296后,MDA-MB-231-mimics和MDA-MB-453-mimics细胞的凋亡百分数高于对照组[(25.76±2.83)%比(6.73±1.09)%, t=17.72, P<0.01],[(21.16±2.92)%比(5.56±0.87)%, t=14.47, P<0.01],干扰miR-296后细胞的凋亡百分数下降。过表达miR-296后,细胞MDA-MB-231-mimics和MDA-MB-453-的CX3趋化因子受体1(CX3CR1)的表达量低于对照组(0.36±0.14比1.00±0.20, t=7.45, P<0.01),0.43±0.10比1.00±0.16, t=8.48, P<0.01);而干扰miR-296后,细胞MDA-MB-231-sh-296和MDA-MB-453-sh-296的CX3CR1的表达量高于对照组(5.91±1.57比1.00±0.20, t=8.79, P<0.01),(4.89±1.08比1.00±0.16, t=10.03, P<0.01)。 结论:抑制miR-296的表达,可以通过靶向作用提高TNBC细胞的生存率,降低凋亡百分数,提示miR-296可能通过CX3CR1在TNBC中发挥抑癌作用。
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编辑人员丨1周前
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缺氧诱导因子1α通过调控miRNA-296-5p影响缺氧诱导的胰腺癌细胞迁移、侵袭
编辑人员丨1周前
目的:探讨miRNA-296-5p(miR-296-5p)对缺氧诱导的胰腺癌细胞迁移、侵袭的影响及其相关机制。方法:选择人胰腺癌细胞株PANC-1;收集上海市奉贤区中心医院和蚌埠医学院附属第一医院2010年1月至2014年12月55例胰腺癌患者手术切除的胰腺癌组织和10例癌旁正常胰腺组织。采用免疫组织化学及原位杂交法检测胰腺癌及癌旁正常胰腺组织芯片中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、miR-296-5p的表达水平,分析二者的相关性及其与患者临床病理特征的关系。PANC-1细胞分为缺氧组和常氧组,采用Transwell法测定两组细胞迁移与侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组细胞miR-296-5p及HIF-1α mRNA表达。转染小干扰RNA(siRNA)干扰HIF-1α的表达,将细胞分为PANC-1组(空白对照)、PANC-1-NC组(阴性对照)、PANC-1-siRNA组,检测miR-296-5p的表达;同时转染miR-296-5p激动剂和抑制剂,分为Agomir-miR-296-5p组(激动剂组)、Agomir-miR-296-5p-NC组(激动剂阴性对照组)、Antagomir-miR-296-5p组(抑制剂组)、Antagomir-miR-296-5p-NC组(抑制剂阴性对照组);Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力。采用荧光素酶报告基因系统验证miR-296-5p启动子区是否存在HIF-1α的结合位点。结果:胰腺癌组织HIF-1α高表达率高于癌旁正常胰腺组织[81.8%(45/55)比0(0/10), P<0.01];胰腺癌组织miR-296-5p高表达率低于癌旁正常胰腺组织[12.7%(7/55)比90.0%(9/10), χ2=27.23, P<0.01]。HIF-1α表达和miR-296-5p表达呈负相关( r=-0.53, P<0.01);miR-296-5p低表达与肿瘤长径、TNM分期、淋巴结转移均有关(均 P<0.05)。常氧组PANC-1侵袭细胞数为(15.3±2.1)个,缺氧组为(24.7±1.5)个,差异有统计学意义( t=0.26, P=0.003);常氧组PANC-1迁移细胞数为(20.7±3.8)个,缺氧组为(32.7±1.2)个,差异有统计学意义( t=5.25, P=0.006)。常氧组PANC-1细胞HIF-1α mRNA相对表达量为0.30±0.02,缺氧组为1.00±0.01,差异有统计学意义( t=56.45, P<0.01);常氧组PANC-1细胞miR-296-5p相对表达量为3.05±0.20,缺氧组为1.14±0.04,差异有统计学意义( t=16.05, P<0.01)。PANC-1组、PANC-1-NC组、PANC-1-siRNA组侵袭细胞数分别为(24.7±1.5)个、(25.7±1.5)个、(12.0±1.7)个,差异有统计学意义( F=68.13, P<0.01),PANC-1-siRNA组较PANC-1组细胞侵袭能力下降( t=9.50, P=0.001);迁移细胞数分别为(32.7±1.2)个、(37.0±1.0)个、(17.3±1.2)个,差异有统计学意义( F=262.09, P<0.01),PANC-1-siRNA组较PANC-1组细胞迁移能力下降( t=16.26, P<0.01)。Antagomir-miR-296-5p组与PANC-1组比较,细胞侵袭和迁移能力增强(均 P<0.05);Agomir-miR-296-5p组与PANC-1组比较,细胞侵袭和迁移能力减弱(均 P<0.05)。荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性结果显示,miR-296-5p存在与HIF-1α结合的靶点。 结论:HIF-1α通过负向调控miR-296-5p在缺氧诱导的胰腺癌细胞的侵袭、迁移中发挥重要作用。
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编辑人员丨1周前
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微小RNA-296-3p靶向Notch2对非小细胞肺癌迁移及侵袭的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨微小RNA(miR)-296-3p靶向Notch同源物2(Notch2)对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移及侵袭的影响。方法:收取南通市第一人民医院胸外科2022年4月至2023年3月间手术的50例,50~65岁间的肺腺癌患者的癌及癌旁组织,其中男30例,女20例,术后病理均无淋巴结及远处转移,应用荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测上述组织中miR-296-3p的表达。利用慢病毒构建miR-296-3p过表达的A549/miR-296-3p,对照组为A549/miRNA。利用Transwell实验检测miR-296-3p过表达对A549细胞迁移及侵袭的影响;通过蛋白质印迹法(Western blot)检测各组A549细胞中Notch2的表达。利用双荧光素酶报告实验验证Notch2是否为miR-296-3p的靶基因。组间数据比较采用 t检验。 结果:qRT-PCR结果提示,miR-296-3p在非小细胞肺癌癌旁组织中的表达水平(4.215±1.600)显著高于癌组织(1.931±0.700),差异有统计学意义( t=9.539, P<0.01)。在细胞层面,miR-296-3p在支气管上皮细胞BEAS-2B中的表达水平(1.018±0.075)显著高于在A549细胞(0.581±0.014),差异有统计学意义( t=9.842, P<0.01)。对照组A549/miRNA细胞中miR-296-3p的表达水平(0.846±0.047)显著低于A549/miR-296-3p组(2.266±0.073),差异有统计学意义( t=28.200, P<0.01)。Transwell迁移实验结果,A549/miRNA对照组每视野A549迁移细胞数为(242.560±7.550),显著高于A549/miR-296-3p组为(86.120±5.570),差异有统计学意义( t=28.800, P<0.01)。A549/miRNA对照组,每视野A549侵袭细胞数为(114.700±6.510),显著高于A549/miR-296-3p组为(48.000±3.610),差异有统计学意义( t=15.520, P<0.01)。生物信息学结果提示Notch2可能为miR-296-3p的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验证实。 结论:miR-296-3p通过调节靶基因Notch2蛋白的表达水平,而调节非小细胞肺癌的迁移及侵袭能力。
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编辑人员丨1周前
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长链非编码RNA锌指蛋白667反义RNA1通过下调微小RNA-296表达抑制胶质瘤细胞U87MG侵袭、转移
编辑人员丨1周前
目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)锌指蛋白667反义RNA1(ZNF667-AS1)下调微小RNA(miRNA,miR)-296对胶质瘤细胞U87MG侵袭、转移的影响。方法:双荧光素酶鉴定ZNF667-AS1与miR-296的靶向关系。实验分为对照组、空载体质粒组、sh-ZNF667-AS1组、sh-ZNF667-AS1+阴性对照组、sh-ZNF667-AS1+miR-296 mimic组。空载体质粒组转染pEGFPN1空载体,sh-ZNF667-AS1组转染pEGFPN1-sh-ZNF667-AS1,质粒转染成功后,在sh-ZNF667-AS1组基础上,sh-ZNF667-AS1+阴性对照组转染miR-296 mimic NC,sh-ZNF667-AS1+miR-296 mimic组转染miR-296 mimic。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中ZNF667-AS1、miR-296水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭和迁移;蛋白质免疫印迹实验检测细胞中迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白水平。多组间比较行单因素方差分析,进一步两两比较行SNK- q法。 结果:生物信息学软件(Starbase)分析显示ZNF667-AS1序列上存在miR-296潜在结合位点,且经荧光素酶实验验证,miR-296与ZNF667-AS1呈正相关( P<0.05)。0 h各组细胞吸光度( A450)值差异无统计学意义( F=1.071, P>0.05),12、24、36、48 h各组细胞 A450值比较,差异有统计学意义( F=17.238、93.997、48.271、60.646, P<0.05)。细胞处理48 h,对照组、空载体质粒组、sh-ZNF667-AS1组、sh-ZNF667-AS1+阴性对照组、sh-ZNF667-AS1+miR-296 mimic组中ZNF667-AS1水平分别为1.01±0.12、0.98±0.14、0.44±0.09、0.46±0.07、0.76±0.12;miR-296水平分别为1.01±0.14、1.02±0.13、0.39±0.06、0.42±0.05、0.72±0.09;侵袭细胞数量分别为(83.25±6.05)、(84.37±8.76)、(39.49±4.15)、(42.15±7.42)、(63.18±7.13)个;迁移细胞数量分别为(126.60±8.79)、(124.49±9.12)、(76.16±6.48)、(79.44±12.15)、(118.18±6.86)个,且差异有统计学意义( F=36.498、55.130、58.771、47.314, P<0.05)。 结论:降低ZNF667-AS1表达可下调miR-296表达抑制胶质瘤细胞U87MG侵袭、转移,而过表达miR-296可逆转上述过程。
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编辑人员丨1周前
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微RNA-296、血管内皮生长因子-B的表达与冠心病患者冠脉病变程度的关系
编辑人员丨3周前
目的 探讨微RNA-296(miR-296)、血管内皮生长因子-B(VEGF-B)的表达与冠心病(CHD)患者冠脉病变程度的关系.方法 选取2019年1月至2022年11月山东省聊城市第二人民医院收治的93例CHD患者,根据冠状动脉病变支数分为单支病变组38例、双支病变组33例、多支病变组22例,再根据Gensini积分将其分为冠状动脉狭窄(CAS)轻度组30例、中度组34例、重度组29例.采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-296,酶联免疫吸附试验检测血清VEGF-B.通过双萤光素酶报告基因验证miR-296与VEGF-B的关系.采用Pearson相关性分析CHD患者miR-296、VEGF-B表达的相关性,采用Spearman相关性分析CHD患者miR-296、VEGF-B表达与Gensini积分及冠脉病变支数的相关性.结果 多支病变组miR-296表达低于单支病变组和双支病变组,VEGF-B水平高于单支病变组和双支病变组,且双支病变组miR-296表达低于单支病变组,VEGF-B高于单支病变组,差异有统计学意义(P<0.05).重度组miR-296表达低于轻度组和中度组,VEGF-B水平高于轻度组和中度组,且中度组miR-296表达低于轻度组,VEGF-B水平高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05).双萤光素酶报告基因显示,VEGF-B是miR-296的靶点.Pearson相关性分析显示,CHD患者miR-296与VEGF-B表达呈负相关(r=-0.731,P<0.05).Spearman相关性分析显示,CHD患者miR-296表达与Gensini积分及病变支数呈负相关(rs=-0.719、0.638,P<0.05),VEGF-B 表达与 Gensini 积分及病变支数呈正相关(rs=0.727、0.698,P<0.05).结论 CHD患者miR-296低表达,VEGF-B高表达,两者与CAS病变程度密切相关.
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编辑人员丨3周前
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白术内酯Ⅲ对自发性高血压大鼠脑卒中的影响及机制研究
编辑人员丨2024/1/6
目的 探讨白术内酯Ⅲ(A Ⅲ)通过微小RNA-296-5p(miR-296-5p)对自发性高血压大鼠(SHR)脑卒中的作用及可能机制.方法 使SHR连续2个月自由饮用0.9%氯化钠溶液,然后给予1%氯化钠溶液喂养,构建SHR脑卒中模型.将模型大鼠分为模型组(Model组)、A Ⅲ低剂量组(A Ⅲ-L组)、A Ⅲ高剂量组(A Ⅲ-H组)、阳性药物尼莫地平组(Nim组)、miR-296-5p 激动剂组(miR-296-5p agomir 组)、agomir NC 组、A Ⅲ-H+miR-296-5p agomir 组、A Ⅲ-H+agomir NC 组,每组 12只.检测并记录大鼠神经症状评分、平均动脉压、存活时间、血小板黏附率变化,采用苏木素-伊红(HE)染色法检测大鼠脑组织海马CA1区病理变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测海马CA1区中miR-296-5p表达.结果 与NC组比较,Model组大鼠神经症状评分、平均动脉压、血小板黏附率、miR-296-5p表达升高,存活时间缩短,海马CA1区病理损伤严重,差异有统计学意义(P<0.05);与Model组比较,A Ⅲ-L组、A Ⅲ-H组、Nim组大鼠神经症状评分、平均动脉压、血小板黏附率、miR-296-5p表达降低,存活时间延长,海马CA1区病理损伤减轻,差异有统计学意义(P<0.05);与Model组、agomir NC组比较,miR-296-5p agomir组大鼠神经症状评分、平均动脉压、血小板黏附率、miR-296-5p表达升高,存活时间缩短,海马CA1区病理损伤加剧,差异有统计学意义(P<0.05);与A Ⅲ-H组、A Ⅲ-H+agomir NC组比较,A Ⅲ-H+miR-296-5p agomir组大鼠神经症状评分、平均动脉压、血小板黏附率、miR-296-5p表达升高,存活时间缩短,海马CA1区病理损伤严重,差异有统计学意义(P<0.05).结论 A Ⅲ可能通过抑制miR-296-5p表达对SHR脑卒中起到治疗作用.
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编辑人员丨2024/1/6
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CircFAT1调节miR-296-3p/MAPRE1轴对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和放疗敏感性的影响
编辑人员丨2023/11/4
目的 研究环状RNA脂肪非典型钙黏蛋白1(CircFAT1)调节miR-296-3p/微管关联蛋白RP/EB家族成员 1(MAPRE1)轴对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和放疗敏感性的影响.方法 以实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测鼻咽上皮细胞NP69、人鼻咽癌细胞株CNE2 及其放射线抵抗细胞CNE2-RR中CircFAT1、miR-296-3p、MAPRE1 表达.将体外培养的CNE2 细胞随机分为对照组、CircFAT1 敲低组、阴性对照组、CircFAT1 敲低+miR-296-3p inhibi-tor组,分组转染后以实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组CNE2 细胞CircFAT1、miR-296-3p、MAPRE1 表达;以CCK-8法、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(Edu)染色与流式细胞实验检测各组CNE2 细胞增殖、凋亡.将体外培养的CNE2-RR细胞随机分为对照组、放射组、放射+阴性对照组、放射+CircFAT1 敲低组、放射+CircFAT1 敲低+miR-296-3p inhibitor组,分组转染后以实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组CNE2-RR细胞CircFAT1、miR-296-3p、MAPRE1 表达;以CCK-8法、Edu染色与流式细胞实验检测各组CNE2-RR细胞增殖、凋亡.以双荧光素酶报告基因实验检测 CNE2-RR 中 CircFAT1 对 miR-296-3p 的靶向调节与 miR-296-3p 对 MAPRE1 的靶向调节.结果 与NP69 细胞相比,CNE2、CNE2-RR细胞CircFAT1 表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),miR-296-3p表达降低(P<0.05);与CNE2 细胞相比,CNE2-RR细胞CircFAT1 表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),miR-296-3p表达降低(P<0.05).与对照组相比,CircFAT1 敲低组CNE2 细胞CircFAT1 表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达、存活率、增殖率降低(P<0.05),miR-296-3p表达、凋亡率升高(P<0.05);阴性对照组CNE2 细胞各指标无明显变化(P>0.05),miR-296-3p inhibitor可逆转敲低CircFAT1 对CNE2 细胞各指标的影响.与对照组、放射组分别相比,放射+CircFAT1 敲低组CNE2-RR细胞CircFAT1 表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达、存活率、增殖率降低(P<0.05),miR-296-3p表达、凋亡率升高(P<0.05);放射组、放射+阴性对照组CNE2-RR细胞各指标无明显变化(P>0.05),miR-296-3p inhibitor可逆转敲低CircFAT1 对放射处理下CNE2-RR细胞各指标的影响.CircFAT1 可靶向下调CNE2-RR细胞miR-296-3p表达,而miR-296-3p可靶向下调CNE2-RR细胞MAPRE1 表达.结论 敲低CircFAT1 可通过上调miR-296-3p而降低MAPRE1 表达,从而抑制鼻咽癌细胞增殖,促进其凋亡并增强其放射敏感性.
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编辑人员丨2023/11/4
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miR-210在乳腺癌组织中表达的临床意义及其对三阴性乳腺癌细胞恶性行为的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探究微小RNA-210(miR-210)在乳腺癌组织中的表达及临床意义,并探究其在体外对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及转移能力的影响.方法 收集湖南省肿瘤医院病理科2013年12月至2015年9月乳腺癌组织及相应癌旁组织标本各82例,荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测组织及细胞中miR-210的表达水平,分析miR-210与患者临床资料及预后的关系.三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231转染含miR-210全长的载体作为实验组,转染空白载体作为对照组,CCK-8实验检测两组细胞增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞转移及侵袭能力.结果 qRT-PCR结果显示乳腺癌组织中miR-210的表达水平为0.198±0.014,显著高于癌旁组织的0.084±0.009,差异具有统计学意义(t=8.141,P<0.001);三阴性乳腺癌组织miR-210表达水平为0.254±0.026,显著高于非三阴性乳腺癌组织0.167±0.015,差异具有统计学意义(t=3.175,P=0.003).miR-210高表达、低表达两组患者TNM分期、分子分型差异有统计学意义(χ2=7.859,P=0.005;χ2=7.053,P=0.008);而miR-210高表达的患者4年生存率显著低于低表达患者(49.37%:76.80%),差异具有统计学意义(χ2=4.743,P=0.024).qRT-PCR结果显示,实验组细胞miR-210的表达水平为0.517±0.038,显著高于对照组细胞的0.284±0.022,差异具有统计学意义(t=9.280,P<0.001).CCK-8实验结果显示实验组细胞48、72及96 h时增殖能力显著高于对照组细胞(3.771±0.452:3.206±0.314;7.662±0.619:6.736±0.552;15.477±1.425:11.592±1.243),差异具有统计学意义(t=2.296,P=0.025;t=2.496,P=0.019;t=4.594,P=0.001).Transwell侵袭实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(107.8±13.0)个,显著高于对照组细胞的(74.4±10.9)个,差异具有统计学意义(t=3.732,P=0.001);迁移实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(136.5±18.5)个,显著高于对照组细胞的(87.4±15.7)个,差异具有统计学意义(t=4.256,P<0.001).结论 miR-210在乳腺癌组织中高表达,且与患者病情进展、肿瘤恶性程度及预后密切相关,体外miR-210可促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的恶性行为,是潜在的分子标志物及靶向治疗位点.
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编辑人员丨2023/8/6