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Wiskoot-Aldrich综合征蛋白家族成员3对乳腺癌细胞增殖、迁移侵袭及伪足形成的影响
编辑人员丨6天前
目的:观察Wiskoot-Aldrich综合征蛋白家族成员3(WASF3)对乳腺癌细胞增殖、迁移侵袭及伪足形成的影响。方法:利用免疫蛋白印迹(Western blot)法检测乳腺癌细胞(BT-549、HCC-1937、BT-474、MDA-MB-231、MCF-7、T-47D)及乳腺正常细胞(MCF-10A)中WASF3蛋白的表达量;获取WASF3互补脱氧核糖核苷酸(cDNA),构建过表达及干扰的重组载体SB-16-WASF3和pHB-U6-MCS-PGK-PURO-shWASF3(pHB-shWASF3)。重组干扰质粒经慢病毒包装,感染MDA-MB-231细胞,经抗性筛选建立WASF3基因静默的稳转细胞株。经实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot法验证WASF3的静默及过表达效率;通过克隆形成实验和迁移侵袭实验分别验证细胞克隆形成能力和迁移侵袭能力的变化;过表达载体SB-16-WASF3转染MDA-MB-231细胞,经WASF3抗体和鬼笔环肽(Phalloidin)双染色,观察WASF3过表达对细胞伪足形成的影响。采用单因素方差分析,组内进一步两两比较采用LSD- t检验,两两比较采用 t检验。 结果:Western blot结果显示,不同乳腺癌细胞WASF3蛋白的相对表达量分别为1.07±0.00、0.54±0.11、0.60±0.14、1.36±0.02、0.65±0.05和0.79±0.18,均高于乳腺正常细胞(0.38±0.01, t=134.864、21.289、24.883、55.397、8.892、37.363, P值均<0.05),差异均有统计学意义;且MDA-MB-231和BT-549细胞的表达量相对较高。细胞增殖实验显示WASF3静默组(pHB-shWASF3-1)在24、48、72、96、120 h的增值率均低于对照组pHB-shNegetive Control组(pHB-shNC)及空白对照(Control)(0.92±0.06比1.18±0.05比1.14±0.03、1.42±0.05比1.90±0.12比1.77±0.14、2.02±0.03比2.83±0.08比2.70±0.10、2.78±0.02比3.78±0.03比3.70±0.17、3.22±0.04比4.10±0.12比4.02±0.10, t24 h=7.983、 t48 h=9.024、 t72 h=23.491、 t96 h=66.348、 t120 h=17.114; t24 h=8.453、 t48 h=5.843、 t72 h=15.813、 t96 h=13.479、 t120 h=19.142, P值均<0.01),差异均有统计学意义,但后两组间差异无统计学意义。pHB-shWASF3-1组克隆形成率[(25.50±2.00)%]低于pHB-shNC组及Control组[(62.33±2.57)%、(64.17±3.21)%, F=204.754]。迁移实验结果显示pHB-shWASF3-1组穿过小室的细胞数低于pHB-shNC组和Control组[(212.33±14.01)个比(357.33±8.02)个比(364.33±9.07)个, F=193.200, P<0.01],差异均有统计学意义,但后两组间差异无统计学意义。侵袭实验结果显示pHB-shWASF3-1组穿过小室的细胞数低于pHB-shNC组和Control组[(151.33±5.51)个比(212.33±14.01)个比(215.00±6.08)个, F=44.269, P值均<0.01],差异均有统计学意义,但后两组间的差异无统计学意义。免疫荧光结果可见,WASF3过表达组的红色信号(WASF3染色)明显高于对照组,绿染的肌动蛋白(F-actin)在细胞边缘明显聚集,细胞伪足伸展更明显。 结论:WASF3在乳腺癌细胞中呈高表达,静默WASF3后可抑制乳腺癌细胞的增殖、克隆形成及迁移侵袭能力;过表达WASF3后可促进乳腺癌细胞F-action蛋白的堆积,促进细胞片状伪足的形成。
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编辑人员丨6天前
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SNARE蛋白在肿瘤发生发展中的研究进展
编辑人员丨6天前
可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感性因子附着蛋白受体(soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptors, SNAREs)是一组高度保守的膜相关蛋白,参与突触神经末梢的物质运输、膜融合和囊泡释放。近年研究表明,SNARE可以通过多种信号和转运途径参与肿瘤发生、发展等过程,包括细胞周期、自噬、凋亡、侵袭性伪足的形成、自分泌及旁分泌因子的运输、以及肿瘤免疫和化疗耐药等。敲除或过表达特定SNARE蛋白会导致细胞功能异常进而影响肿瘤的发生和发展。文章就SNARE蛋白的结构功能以及在肿瘤研究中的进展进行了综述。
可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感性因子附着蛋白受体 肿瘤 膜融合 Soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptors...不再出现此类内容
编辑人员丨6天前
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核转录因子E2F6通过β联蛋白信号通路调控恶性黑素瘤细胞增殖和转移的机制研究
编辑人员丨6天前
目的:研究核转录因子E2F6在人恶性黑素瘤组织和细胞系中的表达,及其对恶性黑素瘤细胞A375增殖、迁移和侵袭的影响。方法:收集重庆市中医院2012年1月至2017年12月皮肤科确诊的50例皮肤恶性黑素瘤和30例色素痣冻存组织及石蜡切片。通过qRT-PCR分析E2F6 mRNA在人恶性黑素瘤和色素痣组织及7株恶性黑素瘤细胞系(HM、A375、WM451、WM35、SK-MEL-1、Hs-695T、MDA-MB-435s)和色素痣细胞中的表达,免疫组化和Western印迹检测E2F6、β联蛋白在人恶性黑素瘤组织中的表达。采用脂质体转染法将E2F6抑制质粒和对照质粒转染至A375细胞,通过qRT-PCR和Western印迹验证E2F6基因的敲减效率。通过CCK8、软琼脂平板克隆实验、Transwell迁移和侵袭实验、3D细胞培养实验检测E2F6基因敲减对A375细胞增殖、迁移和侵袭的影响,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,通过Western印迹检测总β联蛋白、活化β联蛋白、c-Myc和细胞周期蛋白D1等水平。两组间比较采用 t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD- t检验;采用Pearson相关系数分析皮肤恶性黑素瘤中E2F6和β联蛋白表达的相关性。 结果:7株恶性黑素瘤细胞系E2F6 mRNA相对表达水平均高于色素痣细胞(均 P < 0.001)。qRT-PCR显示,皮肤恶性黑素瘤组织中E2F6 mRNA的相对表达(0.000 55 ± 0.000 17)高于色素痣组织(0.000 18 ± 0.000 09, t = 3.22, P < 0.001)。免疫组化、Western印迹显示,皮肤恶性黑素瘤组织中E2F6的相对表达水平高于色素痣组织(均 P < 0.001),而β联蛋白的相对表达水平低于色素痣组(均 P < 0.001)。相关性分析显示,恶性黑素瘤组织中E2F6蛋白与β联蛋白的表达呈负相关(免疫组化: r = -0.56,Western印迹: r = -0.63,均 P < 0.01)。敲减A375细胞E2F6基因后,E2F6抑制组E2F6 mRNA、蛋白相对水平低于对照组( t = 3.38、2.76, P < 0.001)。CCK-8实验显示,继续培养后48 h,E2F6抑制组细胞增殖能力低于对照组( t = 4.58, P < 0.01);软琼脂平板实验显示,E2F6抑制组细胞相对克隆比低于对照组( t = 2.26, P<0.001);迁移实验显示,E2F6抑制组穿出小室细胞数(165 ± 23)低于对照组(376 ± 22, t = 3.14, P < 0.01);侵袭实验显示,E2F6抑制组穿出小室细胞数(96 ± 11)低于对照组(315 ± 31, t = 2.12, P < 0.01);3D细胞培养实验显示,E2F6抑制组细胞形态发生明显变化,侵袭性伪足消失。流式细胞仪检测显示,E2F6抑制组G0-G1期细胞比例、细胞凋亡率均高于对照组(均 P < 0.001)。Western印迹显示,E2F6抑制组β联蛋白水平、活化β联蛋白水平及其下游靶基因蛋白c-Myc、细胞周期蛋白D1水平均低于对照组( P < 0.001),P21蛋白水平高于对照组( P<0.001);E2F6抑制组上皮-间质转化相关分子波形蛋白、神经钙黏着蛋白水平低于对照组( P < 0.001),而上皮钙黏着蛋白水平高于对照组( P < 0.001)。 结论:核转录因子E2F6在恶性黑素瘤中高表达,敲减A375细胞E2F6基因可能通过拮抗β联蛋白信号抑制细胞增殖、迁移和侵袭。
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编辑人员丨6天前
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M2型肿瘤相关巨噬细胞参与胃癌细胞转移及免疫逃逸的机制研究
编辑人员丨2023/10/21
目的 探究M2型肿瘤相关巨噬细胞(TAM)通过调控胃癌细胞程序性死亡配体-1(PD-L1)表达影响肿瘤细胞转移和免疫抑制因子分泌的机制.方法 人单核细胞株THP-1经佛波酯(PMA)和白细胞介素-4(IL-4)诱导建立M2型TAM模型,免疫荧光染色检测M2型TAM表面标记物CD206的表达.将人胃癌细胞系MKN-45分为对照组(未经转染的MKN-45细胞)、siPD-L1组(将siPD-L1转染至MKN-45细胞)、M2组(在Transwell小室上室接种M2型TAM,下室接种MKN-45细胞)和siPD-L1+M2组(在Transwell小室上室接种M2型TAM,下室接种转染siPD-L1的MKN-45细胞).RT-qPCR检测转染效果;免疫荧光染色和流式细胞术检测各组MKN-45细胞PD-L1的表达;划痕实验检测各组MKN-45细胞划痕愈合率;Transwell实验检测各组MKN-45细胞迁移与侵袭;ELISA测定各组MKN-45细胞培养液上清中血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)和白细胞介素-6(IL-6)水平.结果 THP-1细胞经PMA与IL-4诱导后,细胞贴壁生长,形态多样且伸出伪足,细胞内CD206荧光染色强度明显增加,说明M2型TAM构建成功.转染siPD-L1的MKN-45细胞内PD-L1相对表达量降低,表示转染成功.与对照组比较,M2组的MKN-45细胞内PD-L1荧光强度增强,细胞表面PD-L1表达升高,划痕愈合率、细胞迁移及侵袭数目升高/增加,VEGF、TGF-β和IL-6含量也增加,差异均有统计学意义(P<0.05).与M2组比较,siPD-L1+M2组的MKN-45细胞内PD-L1荧光强度减弱,细胞表面PD-L1表达降低,划痕愈合率、细胞迁移及侵袭数目降低/减少,VEGF、TGF-β和IL-6水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 M2型TAM能够促进胃癌细胞迁移与侵袭,并增加免疫抑制因子分泌,从而促进肿瘤细胞转移及免疫逃逸,该作用可能与调控PD-L1表达有关.
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编辑人员丨2023/10/21
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侵袭性伪足在泌尿系统恶性肿瘤侵袭性生长中的作用及研究进展
编辑人员丨2023/8/6
侵袭性伪足指的是恶性肿瘤细胞膜形成的一种向外凸起的、具有降解细胞外基质能力的的细胞-细胞外基质接触性结构.侵袭性伪足在癌细胞侵袭正常组织、造成局部或远隔转移的过程中起到关键作用.近年来随着研究的深入,侵袭性伪足的各个关键成分逐渐被发现,如何调控这些关键成分从而抑制恶性肿瘤侵袭受到了广泛关注.本文就近年来泌尿系统恶性肿瘤中侵袭性伪足的研究进展进行综述.
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编辑人员丨2023/8/6
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CTTN基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞侵袭能力的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨CTTN基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞侵袭能力的影响.方法 将非小细胞肺癌A549细胞随机分为观察组与对照组,两组均采用Lipofectamine 2000脂质体转染法分别转染CTTN小干扰RNA (siRNA)、阴性siRNA.作用48 h,采用Western blotting法检测两组皮层肌动蛋白(Cortactin)相对表达量;以红色荧光Tritc-鬼笔环肽标记的F-actin和绿色荧光Dyligt488标记的Cortactin共定位黄色荧光的侵袭性伪足,采用激光共聚焦显微镜观察并计算侵袭性伪足百分率;采用Transwell小室试验检测两组细胞侵袭能力(以穿过基底膜的细胞数表示).结果 观察组与对照组Cortactin相对表达量分别为0.17 ±0.02、0.79 ±0.15,侵袭性伪足百分率分别为(22.37 ±4.8)%、(71.46 ±8.9)%,穿过基底膜的细胞数分别为(51 ±10)、(220 ±27)个,两组比较P均<0.05.结论 沉默CTTN基因可通过减少非小细胞肺癌A549细胞侵袭性伪足的产生而降低其细胞侵袭能力.
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编辑人员丨2023/8/6
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miR-106b对人肝癌细胞HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨miR-106b对人肝癌细胞HepG2迁移和侵袭能力的影响.方法 分别用阴性对照(NC组)、miR-106b模拟物(miR-106b组)和miR-106b抑制物(miR-106b-in组)转染HepG2细胞,实时PCR检测三组HepG2细胞miR-106b的表达,划痕实验、Transwell实验、3D培养实验检测三组HepG2细胞的迁移及侵袭能力的差异.结果 实时PCR显示miR-106b组细胞miR-106b相对表达量为(17.83±1.66),miR-106b-in组为(0.32± 0.07),差异有统计学意义(P<0.05);NC组细胞24 h及48 h划痕修复率分别为(47±3)%、(71±6)%,miR-106b组分别为(65±5)%、(99±1)%,miR-106b-in组分别为(38±3)%、(56±4)%,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);Transwell侵袭实验显示,NC组的穿室细胞数为(58±10)个,miR-106b组为(116±19)个,miR-106b-in组为(38±6)个,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);3D培养实验显示,20个200倍视野下,miR-106b组无伪足的球形细胞数为(3±1)个,明显少于NC组的(7±2)个及miR-106b-in组的(11±2)个,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-106b能明显增强HepG2细胞的迁移和侵袭能力.
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编辑人员丨2023/8/6
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基于量子点标记探针技术的肝癌细胞体外生长模式研究
编辑人员丨2023/8/6
[目的]建立肝癌细胞体外三维培养模型,模拟在体肿瘤微环境,在体外研究肝癌细胞侵袭转移的生物学行为特点.[方法]基于Matrigel制作三维基质模型,跟踪观察不同培养时间的细胞形态并三维重建,同时利用荧光量子点标记分子探针实时监测HCCLM9的形态学以及动力学特征.[结果]在该三维培养模型中,HCCLM9细胞呈现出典型的肿瘤侵袭多步骤特征,包括:克服衰老,局灶性增生活跃,优势克隆侵袭.HCCLM9细胞在接种后不同时态,细胞及细胞间展现出不同形态,呈现出血管拟态及不规则克隆,同时伸出伪足,促进细胞变形,并向四周浸润生长,证明肝癌细胞具备自身变形能力.[结论]本研究成功建立体外人肝癌细胞培养三维模型,表达MT1-MMP的伪足以及血管形成在肝癌侵袭转移过程中起关键作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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LTBP4过表达对舌鳞状细胞癌细胞侵袭能力的影响及机制
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨人潜伏转化生长因子β结合蛋白4(LTBP4)在舌鳞状细胞癌发生、发展中的作用.方法 将体外培养舌鳞状细胞癌TCA8113细胞分为对照组与LTBP4组,分别感染CON与LTBP4腺病毒.感染48 h,采用Transwell小室测定两组侵袭能力,基质胶降解实验测定基质降解能力,免疫荧光法检测侵袭性伪足出现的细胞比例,Western blotting法测定E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指E盒结合蛋白1(ZEB1)、锌指蛋白(Slug)蛋白表达.结果 LTBP4组侵袭细胞数为(139 ±32)个、基质胶降解面积为(412.4 ±72.1)μm2、侵袭性伪足出现的细胞比例为(7.23 ±3.12)%,对照组分别为(343 ±49)个、(1123 ±82.3)μm2、(18.24 ±2.31)%,组间比较P均<0.01.与对照组比较,LTBP4组E-cadherin蛋白表达升高,Vimentin、ZEB1、Slug蛋白表达降低,组间比较P均<0.05.结论 LTBP4过表达可抑制舌鳞状细胞癌细胞侵袭;调控上皮细胞-间充质转化(EMT)信号通路,抑制细胞外基质降解与侵袭性伪足形成可能是其作用机制.
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编辑人员丨2023/8/6
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胰岛素受体酪氨酸激酶底物生物学功能的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
胰岛素受体酪氨酸激酶底物(IRTKS)是逆向-二重-两性蛋白-RVS超家族成员之一,广泛表达于机体各组织、细胞中.该蛋白能够促进肌动蛋白装配参与板状伪足的形成,并与多种肿瘤相关基因产物相互作用,抑制肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭;IRTKS作为胰岛素受体适配器,参与调控IR-IRS1-PI3 K-AKT信号通路,最终实现对血糖水平的调节;IRTKS还可抑制抗RNA病毒免疫反应,并且与IRSp53共同调节正常的胚胎和胎盘发育;IRTKS在肠出血性大肠杆菌的致病机制中参与形成细菌定植的肌动蛋白底座,促进黏附/脱落损伤.
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编辑人员丨2023/8/6