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驻景丸加减方含药血清对过氧化氢诱导的人RPE细胞上皮-间质转化的抑制作用及其机制
编辑人员丨4天前
目的:研究驻景丸加减方含药血清对过氧化氢(H 2O 2)诱导的人视网膜色素上皮(ARPE)-19细胞上皮-间质转化(EMT)的作用及其机制。 方法:选取2月龄SPF级雌性SD大鼠30只,采用随机数字表法将其随机分为空白对照组和驻景丸加减方组,每组15只,分别给予生理盐水和驻景丸加减方连续灌胃7 d,以制备空白血清和含药血清。采用SD大鼠制备驻景丸加减方含药血清。将ARPE-19细胞分为正常对照组,模型对照组,空白血清组,2.5%、5.0%、10.0%含药血清组,SB216763组和SB216763+含药血清组;其中前2个组均于正常培养基中培养,后6个组分别于含空白大鼠血清培养基、相应浓度含药血清培养基、10 μmol/L GSK-3抑制剂SB216763培养基以及10 μmol/L SB216763+10.0%的含药血清培养基中培养;正常对照组常规培养,其他各组先常规培养24 h,后加入终浓度200 μmol/L的H 2O 2继续培养24 h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活性;Transwell法检测细胞迁移能力;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)含量;硫化巴比妥酸法检测细胞内丙二醛(MDA)含量;Western blot法检测细胞中Nrf2通路相关蛋白核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)和EMT相关蛋白转化生长因子β2(TGF-β2)、蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、snail家族锌指转录因子1(SNAIL1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。 结果:空白血清组、2.5%、5.0%、10.0%组细胞存活率总体比较差异无统计学意义( F=0.163, P>0.05)。正常对照组、模型对照组、2.5%含药血清组、5.0%含药血清组、10.0%含药血清组细胞存活率分别为(100.50±5.91)%、(60.87±4.30)%、(73.27±4.46)%、(80.73±5.67)%和(89.90±4.97)%,正常对照组、模型对照组、空白血清组、2.5%含药血清组、5.0%含药血清组和10.0%含药血清组细胞迁移数分别为(84.67±8.33)、(222.33±13.58)、(215.67±10.02)、(174.67±10.60)、(143.67±8.02)和(107.67±6.66)个/视野,总体比较差异均有统计学意义( F=26.628、99.289,均 P<0.01)。模型对照组细胞内ROS和MDA含量较正常对照组显著增加,差异均有统计学意义(均 P<0.01);各含药血清组细胞内ROS和MDA含量均较模型对照组显著减少,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。模型对照组细胞内SNAIL1、α-SMA、TGF-β2、p-AKT及p-GSK-3β蛋白相对表达量明显多于正常对照组和各浓度含药血清组,E-cadherin蛋白相对表达量明显少于正常对照组和各浓度含药血清组,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与正常对照组比,模型对照组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低,细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均 P<0.05);与模型对照组比,各含药血清组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低,细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。与模型对照组相比,SB216763组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低,细胞核Nrf2蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均 P<0.05);与SB216763组相比,SB216763+含药血清组细胞质Nrf2、SNAIL1和α-SMA蛋白相对表达量降低,细胞核Nrf2和E-cadherin蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:驻景丸加减方含药血清抑制H 2O 2诱导的ARPE-19细胞EMT,可能与AKT/GSK-3β通路的抑制及Nrf2信号通路的激活有关。
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编辑人员丨4天前
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薯蓣皂苷通过GSK3β/Nrf2/HO-1通路改善尿酸诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的作用及机制研究
编辑人员丨2周前
目的 探讨薯蓣皂苷(dioscin)对尿酸(uric acid,UA)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激损伤的影响及分子机制.方法 将HK-2 细胞分为正常组、模型组(尿酸刺激造模)、条件对照组(尿酸+DMSO)和薯蓣皂苷组(尿酸+薯蓣皂苷).通过尿酸诱导HK-2 细胞氧化应激损伤模型;采用CCK-8 法检测细胞活力,流式细胞技术检测细胞活性氧(ROS)水平,Real-time PCR法检测糖原合成激酶 3(GSK3β)、核转录因子红系 2 相关因子 2(Nrf2)和血红素加氧酶 1(HO-1)在mRNA水平的表达,Western Blot法检测GSK3β、磷酸化糖原合成激酶 3(p-GSK3β)、Nrf2 及HO-1 在蛋白水平的表达.结果 经尿酸刺激后,HK-2 细胞的活力明显下降,ROS水平明显升高(均P<0.001).经薯蓣皂苷治疗后,HK-2 细胞的活力增加,ROS水平明显降低(均P<0.001).在蛋白及mRNA水平上,尿酸刺激后Nrf2 和HO-1 的表达均下降,薯蓣皂苷干预后Nrf2 和HO-1 表达均明显增加(均P<0.001).在蛋白水平上,模型组细胞p-GSK3β/GSK3β比值较正常组明显下降,经薯蓣皂苷干预后p-GSK3β/GSK3β比值升高(均P<0.001).结论 薯蓣皂苷可能是通过促进GSK3β的磷酸化,激活Nrf2/HO-1 通路,从而缓解尿酸诱导的HK-2 细胞氧化应激损伤.
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编辑人员丨2周前
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中药多糖治疗阿尔茨海默病的机制研究进展
编辑人员丨2023/10/28
阿尔茨海默病是当前老龄社会所面临的重大健康挑战,临床只能应用相关药物缓解症状,无法根治.中药多糖在改善阿尔茨海默病方面具有一定潜力.在阿尔茨海默病的防治中,多糖发挥作用的途径可能有:① 抗氧化应激:激活Keap1/Nrf2通路及Wnt/β连环蛋白通路来降低促氧化酶体的表达;② 抑制细胞凋亡:抑制NF-κB和p38 MAPK活化并激活PI3K/Akt通路、下调Bax/Bcl-2比值;③抗神经毒性:上调Nrf2/HO-1信号通路和Nrf2-ARE通路,抗Aβ毒性;④ 抗炎症反应:抑制NLRP3的活化从而抑制NLRP3/ASC/胱天蛋白酶1炎症级联途径的形成等;⑤抑制线粒体功能障碍:调节GSK-3β通路阻断Ca2+内流,抑制mPTP的开放,升高线粒体中细胞色素含量,抑制胞质细胞色素c的释放;⑥ 激活细胞自噬:通过PI3K/AKT/mTOR途径激活自噬并改善自噬体的形成,促进LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化等;⑦抗Tau蛋白磷酸化:上调AKT和mTOR的磷酸化,并激活PTEN/AKT/mTOR通路发挥作用等.因此,中药多糖在AD治疗中具有良好的应用前景.
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编辑人员丨2023/10/28
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红景天苷抗衰老和抗氧化药理机制研究新进展
编辑人员丨2023/8/6
红景天是珍稀野生药材,红景天苷作为红景天的主要有效成分,具有显著的抗衰老和抗氧化的药理作用.经查阅并总结近3年国内外相关文献,发现前人研究主要集中在神经系统、心血管系统和皮肤等方面,具体药理机制涉及PI3K/Akt/GSK-3β、PI3K/Akt/Nrf2/HO-1、SIRT1/NF-κB、cAMP/PKA/CREB、NOX2/ROS/MAPKs及自噬等方面.因此,本综述对试图更深入研究红景天苷药理机制、利用通路靶点研发新药的研究人员有重要意义.
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编辑人员丨2023/8/6
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积雪草酸通过激活Nrf2抗氧化通路抑制自发性高血压大鼠心肌纤维化
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨积雪草酸(asiatic acid,AA)对自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats,SHRs)心肌纤维化的拮抗作用及其可能的分子机制.方法 动物分为4组:对照组(Wky)、SHRs组、SHRs+AA组(SHRs+AA 20 mg-1·kg-1·d-1)、AA组(Wky+AA 20 mg-1·kg-1·d-1),每组10只.天狼星红染色法观察胶原蛋白沉积水平;比色法测定各组氧化应激水平;Western blot法测定相关蛋白表达.结果 AA能有效减少心肌胶原蛋白沉积,以及PAI-1、CTGF、Collagen I、FN的表达,提高血清中SOD、T-AOC活性,并降低MDA含量,增强心肌组织Akt、GSK-3β 磷酸化,抑制Fyn核转位;提高Nrf2活性,并增加NQO1、HO-1蛋白表达.结论 AA能有效抑制SHRs心肌纤维化,其机制可能通过激活Nrf2诱导的抗氧化通路,上调心肌组织抗氧化活性,进而减少氧化应激产物形成.
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编辑人员丨2023/8/6
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通络生骨胶囊对骨关节炎的治疗作用及其分子机制研究
编辑人员丨2023/8/5
目的:利用碘乙酸诱的SD大鼠骨关节炎模型,研究通络生骨胶囊对骨关节炎(OA)的治疗作用;利用IL-1β诱导的人软骨细胞(SW1353)损伤模型,研究通络生骨胶囊对软骨细胞保护作用的分子机制.方法:SD大鼠膝关节注射碘乙酸(3 mg/只)诱导形成OA模型,造模3d后分为对照组、模型组和不同浓度的通络生骨溶液组(0.5、1、2 g/kg).给药3周后检测血清中IL-1β的含量,膝关节软骨细胞中MMP-13的mRNA表达水平以及c-Fos蛋白表达水平.检测经通络生骨胶囊(1、5、10、50、100 μg/mL)处理48 h后的IL-1β(20 ng/mL)损伤SW1353细胞8h后的细胞活率;荧光定量PCR法检测Wnt4a、β-catenin、GSK-3β、MMP-13、ADAMTS4、Nrf2、GCLC和NQO-1的mRNA表达水平,Western-Blot的方法检测β-catenin和MMP-13的蛋白含量.结果:不同浓度(0.5、1、2 g/kg)的通络生骨胶囊溶液均可以有效降低碘乙酸诱导的IL-1β含量,抑制软骨细胞中的MMP-13和c-Fos的表达,呈剂量效应关系.在IL-1β刺激的SW1353损伤模型中,不同浓度(10、50、100 μg/mL)的通络生骨胶囊溶液均能显著增强细胞活率,抑制IL-1β诱导的Wnt4a、β-catenin、MMP-13、ADAMTS4和GSK-3β的mRNA表达水平上调作用,增强IL-1β抑制的Nrf2、GCLC和NQO-1的mRNA表达水平.结论:通络生骨胶囊可以通过降低IL-1β等炎症因子的分泌,抑制IL-1β诱导的Wnt/β-catenin信号通路的活化、降低MMP-13、ADAMTS4等基质金属蛋白酶的分泌,增强Nrf2/HO-1信号通路,并从多方面提高软骨组织的抗损伤能力.
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编辑人员丨2023/8/5
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定心方Ⅰ号方通过调控GSK3β/Nrf2/HO-1通路防治大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 探究定心方Ⅰ号方(Dingxin Recipe Ⅰ,DXR Ⅰ)防治大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)的机制.方法 将36只大鼠随机分为假手术组,MIRI模型组,胺碘酮组,定心方Ⅰ号方低、中、高剂量组.假手术组、MIRI模型组及胺碘酮组给予生理盐水灌胃,定心方Ⅰ号方各组大鼠分别给予不同剂量的定心方Ⅰ号方灌胃,连续灌胃7d.在末次给药2h后,采取结扎左前降支30 min后再复灌1h的方法复制大鼠缺血再灌注模型.胺碘酮组大鼠术前10 min尾静脉注射5 mg·kg-1盐酸胺碘酮注射液.复制模型成功后取材,HE染色检测心脏组织病理形态学变化,采用相关试剂盒检测血清肌酸激酶同工酶(Creatine kinase isoenzymes,CK-MB)、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)、大鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(Rat Cardiac Troponin Ⅰ,cTn-Ⅰ)、还原型谷胱甘肽(Reduced glutathione,GSH)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD),Western Blot法检测心脏组织中糖原合成酶激酶-3 (synthase kinase-3β,GSK3β)、磷酸化糖原合成酶激酶-3(Phosphorylated synthase kinase-3β,p-GSK3β)、转录因子NF-E2相关因子(Nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf-2)、血红素氧合酶(Heme oxygenase-1,HO-1)、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X Protein,Bax)等蛋白的表达水平.结果 HE染色结果显示,与假手术组比较,MIRI模型组心肌细胞出现了水肿和坏死,伴有局部出血和中性粒细胞浸润,而不同浓度的定心方Ⅰ号方可改善上述病理变化;相关检测试剂盒测定结果显示,与假手术组比较,MIRI模型组中的CK-MB、LDH、cTn-Ⅰ和MDA浓度明显升高(P<0.O1),GSH和SOD活性明显下降(P<0.01),而定心方Ⅰ号方中、高剂量组可不同程度地抑制CK-MB、LDH、cTn-Ⅰ和MDA的表达(P<0.05,P<0.01),升高GSH和SOD活性(P< 0.05,P<0.01);Western Blot结果显示,与MIRI模型组比较,不同浓度的定心方Ⅰ号方均可以抑制p-GSK3和Bax蛋白表达(P< 0.05,P<0.01),且中、高剂量组均可促进Nrf-2、HO-1和Bcl-2蛋白的表达(P< 0.05,P<0.01).结论 定心方Ⅰ号方可以缓解心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制GSK3β磷酸化,激活Nrf2/HO-1通路,进而抑制氧化应激有关.
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编辑人员丨2023/8/5
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α7-nAChR/PI3 K/AKT/GSK-3β通路在慢性睡眠剥夺后的保护作用及其机制研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 观察α7-nAChR/PI3K/AKT/GSK-3β通路在慢性睡眠剥夺后的保护作用,并探讨其作用机制.方法 成年C57BL/6J小鼠随机分为3组:对照(CC)组、慢性睡眠剥夺(SD)组、慢性睡眠剥夺后腹腔注射α7-nAChR激动剂-PHA-543613(SD+PHA-543613)组.采用Western-blot印迹检测各组小鼠海马组织α7-nAChR及p-AKT、p-GSK-3β、Nrf-2、HO-1蛋白表达变化;使用实时荧光定量PCR检测各组小鼠海马组织α7-nAChR mRNA水平及炎性因子与抑炎因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ、MCP-1、Arg-1、CD206、TGF-β、YM-1mRNA表达水平;采用免疫荧光染色法观察各组小鼠海马组织星形胶质细胞、小胶质细胞表面α7-nAChR的表达变化;通过水迷宫评估小鼠的行为学.结果 慢性睡眠剥夺7 d后,SD组海马组织的α7-nAChR蛋白、mRNA的表达明显低于CC组(P=0.001,P=0.038),SD组海马组织p-AKT蛋白表达显著低于CC组(P=0.019),p-GSK-3β 蛋白表达量高于CC组(P=0.011);慢性睡眠剥夺后腹腔注射α7-nAChR激动剂-PHA-543613后海马组织星形胶质细胞表面α7-nAChR的表达高于SD组(P=0.027),p-AKT、p-GSK-3β 的蛋白表达也明显高于SD组(P=0.047,P=0.017);腹腔注射 α7-nAChR激动剂-PHA-543613后,SD+PHA-543613组海马组织Nrf-2、HO-1蛋白表达量和抑炎因子CD206、TGF-β的mRNA表达量与SD组相比明显增多(P=0.020,P=0.016,P<0.01,P<0.01),而促炎因子TNF-α、MCP-1的mR-NA表达量与SD组相比显著下降(均P<0.01).腹腔注射α7-nAChR激动剂-PHA-543613后小鼠的逃避潜伏期与SD组相比缩短,处于目标象限时间延长、穿越平台次数增多(P=0.000,P=0.000,P=0.001).结论 慢性睡眠剥夺后刺激α7-nAChR通过激活PI3K/AKT/GSK-3β减轻神经炎症和氧化应激.
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编辑人员丨2023/8/5
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Erastin调节GSK-3β/NRF2通路抑制卵巢癌细胞增殖的实验研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨铁死亡诱导剂Erastin对人卵巢癌SKOV3、A2780细胞增殖的影响及可能的作用机制.方法 CCK-8、克隆形成实验检测不同浓度Erastin对SKOV3、A2780细胞增殖活性的抑制作用;活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)检测Erastin对SKOV3、A2780细胞过氧化反应的影响;Western blotting检测糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、核因子E2相关因子2(NRF2)和血红素氧合酶-1(HO-1)的表达;采用小干扰RNA(siRNA)敲低GSK-3β蛋白表达,检测SKOV3细胞增殖活性和抗氧化反应能力.结果 5、10、20μmol/L Erastin处理24 h对SKOV3和A2780细胞的增殖活性均有抑制作用(P<0.05),其中10μmol/L处理组抑制细胞生长的能力较明显,后续实验选用10μmol/L Erastin.与空白对照组比较,10μmol/L Erastin处理24h后,SKOV3、A2780细胞的ROS和MDA生成比例明显增加(P<0.001).与空白对照组相比,10μmol/L Erastin处理SKOV3、A2780细胞24h显著增加GSK-3β蛋白的表达;敲低GSK-3β表达后,与si-NC组比较,10μmol/L Erastin处理组细胞增殖活性显著增加(P<0.05),NRF2、HO-1蛋白表达显著增加(P<0.05).结论 铁死亡诱导剂Erastin通过GSK-3β/NRF2通路抑制卵巢癌细胞增殖,发挥其铁死亡作用,促进细胞死亡.
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编辑人员丨2023/8/5
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基于网络药理学和分子对接探讨黄芪甲苷治疗糖尿病视网膜病变的作用机制
编辑人员丨2023/8/5
目的:利用网络药理学和分子对接探讨黄芪甲苷治疗糖尿病视网膜病变的作用机制,为创新药物开发和作用机制研究提供依据.方法:利用成分靶点数据库(SwissTargetPrediction)和靶点数据库平台(Targetnet)筛选出黄芪甲苷的潜在靶点,在人类基因数据库(GeneCards)、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)和药物靶标数据库(TTD)中检索糖尿病视网膜病变的相关靶点.将黄芪甲苷潜在靶点和糖尿病视网膜病变相关靶点进行重合,交集靶点即为黄芪甲苷治疗糖尿病视网膜病变可能的作用靶点.随后进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络建立、基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.最后使用Autodock Vina软件进行分子对接分析.在此基础上,运用实验研究对发现的结合力最强的关键靶点信号传导通路进行了验证.结果:黄芪甲苷的作用靶点和糖尿病视网膜病变的交集靶点共56个,经过PPI网络分析获得排名前5位的关键靶点为蛋白激酶B1(Akt1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR)、非受体酪氨酸蛋白激酶(Src)、信号转导和转录激活因子3(STAT3).分子对接分析验证显示,黄芪甲苷与上述5个关键靶标受体的亲和力较强.实验研究表明,黄芪甲苷通过Akt/Nrf2/HO-1和Akt/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)信号通路的调控,抑制了高糖引起的视网膜色素上皮细胞的损伤.结论:黄芪甲苷的潜在靶点与糖尿病视网膜病变的相关靶点高度相关,表明黄芪甲苷具有多靶点、多途径治疗糖尿病视网膜病变的潜在作用.
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编辑人员丨2023/8/5