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木犀草素通过Nrf2/HO-1通路诱导耐多柔比星K562/ADR细胞发生铁死亡
编辑人员丨2天前
目的:研究木犀草素(luteolin,Lut)对人耐多柔比星(adriamycin,ADR)慢性髓系 白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)细胞K562/ADR增殖及铁死亡的影响,并探讨可能的作用机制.方法:用不同浓度的ADR处理K562细胞和K562/ADR细胞,采用CCK-8法检测K562细胞和K562/ADR细胞对ADR的敏感性;采用CCK-8法检测不同浓度Lut对K562/ADR细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)筛选出后续实验的药物浓度.不同浓度的Lut处理后,在倒置光学显微镜下观察细胞形态的变化;CCK-8法检测Lut对ADR的增敏作用,FCM法检测Lut对K562/ADR细胞凋亡的影响;随后再用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧(reactive oxygen specie,ROS)的含量,谷胱甘肽(glutathione,GSH)试剂盒检测各组细胞内GSH的含量;Fe2+比色法检测各组细胞内Fe2+的含量,蛋白质印迹法检测各组细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、核因子 E2 相关因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和血红素加氧-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白的表达量.CCK-8法检测铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)干预后Lut对K562/ADR细胞增殖、ROS含量、GSH含量、Fe2+含量及GPX4表达量的影响.结果:与Lut(0pmol/L)组相比,Lut可显著抑制K562/ADR细胞增殖(P<0.001),提高K562/ADR细胞对ADR的敏感性(P<0.05);Lut可明显提高K562/ADR细胞的凋亡率(P<0.001)以及细胞中ROS的含量(P<0.05),同时降低K562/ADR细胞内GSH并提高Fe2+的含量(P<0.001和P<0.01);与 Lut(0 μmol/L)组相比,细胞内 GPX4、Nrf2 和 HO-1蛋白的表达量随Lut浓度的升高而降低(P均<0.05);与Lut单药组相比,Fer-1干预后可部分逆转Lut对K562/ADR细胞增殖的抑制作用(P<0.05),K562/ADR细胞内ROS的含量降低(P<0.001),GSH的水平升高(P<0.001),Fe2+的含量降低(P<0.001),GPX4蛋白的表达水平显著升高(P<0.01).结论:Lut可通过铁死亡途径抑制K562/ADR细胞增殖,提高对ADR的敏感性,其机制可能与Nrf2/HO-1信号通路有关,这将为Lut通过铁死亡方式治疗白血病提供实验依据.
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编辑人员丨2天前
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蒲公英提取物对脑出血大鼠的治疗作用及机制研究
编辑人员丨2天前
目的 研究蒲公英提取物对自发性脑出血(ICH)大鼠的治疗作用及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响.方法 通过脑定位注射Ⅳ型胶原酶诱导建立48只ICH大鼠模型,随机分为模型组、蒲公英提取物组、Nrf2抑制剂(ML385)组和蒲公英提取物+ML385组,每组12只,另选12只大鼠作为假手术组.以药物分组处理后,进行大鼠神经功能损伤评分;检测大鼠血脑屏障功能、海马神经元细胞凋亡率、血清环氧化酶2(COX-2)、白细胞介素6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及脑组织过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧、丙二醛水平和Nrf2/HO-1信号通路蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、伊文思蓝渗出量、海马神经元细胞凋亡率、血清COX-2、IL-6、iNOS水平、脑组织活性氧、丙二醛水平显著升高(P<0.05),CAT、GSH-Px、Nrf2、HO-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05).与蒲公英提取物组比较,蒲公英提取物+ML385组大鼠神经功能评分[(2.54±0.23)分vs(1.43±0.19)分]、伊文思蓝渗出量[(22.15±3.61)ng/mg vs(6.54±1.24)ng/mg]、海马神经元细胞凋亡率[(31.97±5.26)%vs(3.51±0.94)%]、血清 COX-2[(5.82± 1.16)ng/ml vs(1.34±0.42)ng/ml]、IL-6[(1.47±0.31)ng/ml vs(0.43±0.14)ng/ml]、iNOS[(59.91±10.36)U/ml vs(13.94±3.78)U/ml]、脑组织活性氧[(4.70±0.45)U/kg vs(1.70±0.51)U/kg]、丙二醛水平[(3.72±0.52)nmol/mg vs(1.17±0.34)nmol/mg]显著升高(P<0.05),CAT[(2.54±0.59)U/mg vs(5.68±1.04)U/mg]、GSH-Px[(8.01±0.86)U/mgvs(16.97±3.03)U/mg]、Nrf2(0.67±0.13 vs 1.07±0.19)、HO-1(0.55±0.07 vs 0.86±0.10)蛋白表达水平显著降低(P<0.05).结论 蒲公英提取物可通过激活Nrf2/HO-1信号通路增强ICH大鼠抗氧化活性,阻止炎症和氧化应激反应进展,抑制海马神经元细胞凋亡,修复血脑屏障功能,改善大鼠神经功能.
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编辑人员丨2天前
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穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型PLA2R和IgG4表达的影响及其机制
编辑人员丨2天前
目的 分析穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型磷脂酶A2受体(Phospholipase A2 receptor,PLA2R)和免疫球蛋白G亚型4(Immunoglobulin G4,IgG4)表达影响及可能机制.方法 将40只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、贝那普利组(10 mg/kg)、低和高剂量穿山龙总皂苷组(80 mg/kg、160 mg/kg),每组各8只.除对照组,其余4组采用Border法制备膜性肾病模型,造模成功后,贝那普利组灌胃给予贝那普利10 mg/(kg·d),低和高剂量穿山龙总皂苷组分别灌胃给予穿山龙总皂苷80 mg/(kg·d)、160 mg/(kg·d),对照组、模型组灌胃给予10 ml/(kg·d)生理盐水.连续给药4周后,检测24 h尿蛋白、白蛋白、血肌酐、血尿素氮、尿酸水平,HE染色观察肾脏病理改变,蛋白免疫印迹法检测肾脏中M型PLA2R、IgG4、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphorylated phosphoinositide 3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶 B(Phosphorylated protein kinase B,p-AKT)、核因子 E2 相关因子 2(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶(Heme oxygenase-1,HO-1)表达水平.结果 与模型组比较,贝那普利组、高剂量穿山龙总皂苷组白蛋白水平明显升高,血肌酐、血尿素氮、尿酸水平明显降低,差异均有统计学意义(P>0.05).与模型组比较,贝那普利组、低剂量和高剂量穿山龙总皂苷组肾脏病理改变明显改善,24 h尿蛋白水平及肾脏中M型PLA2R、IgG4、p-PI3K、p-AKT表达水平明显降低,肾脏中Nrf2、HO-1表达水平明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠的肾脏具有保护作用,其机制可能与降低PLA2R、IgG4表达,抑制PI3K/AKT通路,激活Nrf2/HO-1通路相关.
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编辑人员丨2天前
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薯蓣皂苷通过GSK3β/Nrf2/HO-1通路改善尿酸诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的作用及机制研究
编辑人员丨2天前
目的 探讨薯蓣皂苷(dioscin)对尿酸(uric acid,UA)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激损伤的影响及分子机制.方法 将HK-2 细胞分为正常组、模型组(尿酸刺激造模)、条件对照组(尿酸+DMSO)和薯蓣皂苷组(尿酸+薯蓣皂苷).通过尿酸诱导HK-2 细胞氧化应激损伤模型;采用CCK-8 法检测细胞活力,流式细胞技术检测细胞活性氧(ROS)水平,Real-time PCR法检测糖原合成激酶 3(GSK3β)、核转录因子红系 2 相关因子 2(Nrf2)和血红素加氧酶 1(HO-1)在mRNA水平的表达,Western Blot法检测GSK3β、磷酸化糖原合成激酶 3(p-GSK3β)、Nrf2 及HO-1 在蛋白水平的表达.结果 经尿酸刺激后,HK-2 细胞的活力明显下降,ROS水平明显升高(均P<0.001).经薯蓣皂苷治疗后,HK-2 细胞的活力增加,ROS水平明显降低(均P<0.001).在蛋白及mRNA水平上,尿酸刺激后Nrf2 和HO-1 的表达均下降,薯蓣皂苷干预后Nrf2 和HO-1 表达均明显增加(均P<0.001).在蛋白水平上,模型组细胞p-GSK3β/GSK3β比值较正常组明显下降,经薯蓣皂苷干预后p-GSK3β/GSK3β比值升高(均P<0.001).结论 薯蓣皂苷可能是通过促进GSK3β的磷酸化,激活Nrf2/HO-1 通路,从而缓解尿酸诱导的HK-2 细胞氧化应激损伤.
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编辑人员丨2天前
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匹多莫德对支原体感染小鼠肺功能损伤的影响及其机制研究
编辑人员丨2天前
目的 观察匹多莫德对支原体感染(MPI)小鼠肺功能损伤的保护作用,并探讨其可能机制.方法 MPI小鼠随机分为MPI组和实验A、B、C组,每组10只;另取10只健康小鼠设为正常组.实验A、B、C组分别灌胃匹多莫德颗粒100、200和400 mg/kg,正常组、MPI组灌胃等量生理盐水,1次/d,持续3 d.采用小动物呼吸机检测肺功能,紫外分光光度法和细胞色素C还原法检测血清氧化应激指标,酶联免疫吸附试验检测血清免疫指标,苏木精-伊红染色观察肺组织病理变化,Western blotting检测肺组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达.结果 与正常组比较,MPI组每分钟通气量(MV)、潮气量(TV)、最大呼气量(MEV)均减少(P<0.05),血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、γ干扰素(IFN-γ)水平均降低(P<0.05),血清白细胞介素-4(IL-4)水平升高(P<0.05);与MPI组比较,实验A、B、C组MV、TV、MEV均增加(P<0.05),GSH-Px、SOD活性均增强(P<0.05),IFN-γ水平升高(P<0.05),IL-4水平降低(P<0.05);与实验A组比较,实验B、C组MV、TV、MEV均增加(P<0.05),GSH-Px、SOD活性均增强(P<0.05),IFN-γ水平升高(P<0.05),IL-4水平降低(P<0.05);与实验B组比较,实验C组MV、TV、MEV均增加(P<0.05),GSH-Px、SOD活性均增强(P<0.05),IFN-γ水平升高(P<0.05),IL-4水平降低(P<0.05).与正常组比较,MPI组肺组织Nrf2、HO-1蛋白相对表达量均降低(P<0.05);与MPI组比较,实验A、B、C组肺组织Nrf2、HO-1蛋白相对表达量均升高(P<0.05);与实验A组比较,实验B、C组肺组织Nrf2、HO-1蛋白相对表达量均升高(P<0.05);与实验B组比较,实验C组肺组织Nrf2、HO-1蛋白相对表达量均升高(P<0.05).结论 匹多莫德可能通过调节Nrf2/HO-1信号通路,改善MPI小鼠肺功能和免疫功能,减轻氧化应激损伤.
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编辑人员丨2天前
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芳樟精油通过调控Nrf2/HO-1通路和抑制炎症因子改善小鼠抑郁样行为的机制研究
编辑人员丨2天前
为探讨芳樟精油的抗抑郁作用及其对炎症因子和核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的调控机制,采用腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠抑郁模型,利用旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验进行行为学测试;通过Western blot和qRT-PCR方法检测小鼠海马组织中Nrf2/HO-1通路蛋白及基因表达水平变化,用酶联免疫吸附检测(ELISA)法检测血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β的含量变化,并通过Tunel染色检测小鼠脑组织细胞凋亡情况的变化;结果表明,与空白对照组相比,模型组小鼠旷场中心区运动距离、旷场中心的停留时间和中心区域的进入次数显著减少,高架十字迷宫实验中小鼠进入开臂的时间百分比(0T%)和进入开臂的次数百分比(0E%)显著减少,强迫游泳实验小鼠不动时间显著延长;而相较模型组,给予芳樟精油治疗后,小鼠在旷场实验中心区域运动距离显著增加,在旷场中心区域的停留时间显著增加,旷场中心区域的进入次数显著增加,高架十字迷宫小鼠进入开臂的OT%和OE%显著增加,强迫游泳实验中小鼠不动时间显著减少;此外,模型组小鼠的Nrf2、HO-1蛋白表达水平显著下降,TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子显著升高;给予芳樟精油治疗后能显著提高抑郁模型小鼠Nrf2、HO-1蛋白表达水平,并显著降低炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平.Tunel染色检测结果显示,给予芳樟精油治疗后,小鼠脑组织细胞凋亡率显著下降.综上所述,芳樟精油能有效改善小鼠的抑郁样行为,其机制可能与其参与调控Nrf2/HO-1信号通路,上调Nrf2、HO-1蛋白表达水平并阻止海马炎症损伤有关,这一发现为芳樟精油及芳香疗法在抑郁症中的治疗及应用提供了实证支持.
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编辑人员丨2天前
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不同剂量重组人脑利钠肽联合比索洛尔在老年急性心肌梗死患者PCI后的应用对比
编辑人员丨2天前
目的 比较不同剂量的重组人脑利钠肽(rhBNP)联合比索洛尔在老年急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后的应用价值.方法 选取2020年1月—2022年10月秦皇岛市第一医院收治的138例老年AMI患者进行前瞻性研究,按照随机数字表法分为三组,各46例.各组均行PCI和比索洛尔治疗,术前2 h,小剂量组给予1.5 μg/(kg·min)的rhBNP,中剂量组给予2.0 μg/(kg.min)的rhBNP,大剂量组给予3.0 μg/(kg·min)的rhBNP.比较各组治疗前后心功能[左室射血分数(LVEF)、心脏指数(CI)、每分钟搏出量(SV)、血浆脑钠肽(BNP)]、心电生理指标[窦性心搏RR间期标准差(SDNN)、相邻RR间期差值均方根(RMSSD)、低频段/高频段(LF/HF)]、肾功能[血肌酐(Scr)、β2-微球蛋白(β2-MG)、血尿素氮(BUN)]、核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)通路及治疗后不良反应、心血管不良事件的发生情况.结果 治疗72 h后,大剂量组LVEF、CI、SV、SDNN、RMSSD及Nrf2、HO-1蛋白水平均高于中剂量组和小剂量组(P<0.05),大剂量组的血浆BNP水平、LF/HF低于中剂量组和小剂量组(P<0.05);治疗72 h后,中剂量组和小剂量组的心功能、心电生理指标、Nrf2/HO-1信号通路的蛋白比较差异均无统计学意义(P>0.05).治疗前、治疗72 h后,各组血清Scr、β2-MG、BUN水平比较差异均无统计学意义(P>0.05),各组不良反应总发生率、心血管不良事件的总发生率比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 rhBNP联合比索洛尔应用于老年AMI患者PCI后疗效确切,大剂量rhBNP可显著改善心功能、心率变异性,可能与激活Nrf2/HO-1通路有关,且对肾功能损害、不良反应及心血管不良事件无明显影响.
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编辑人员丨2天前
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从瘀论治脂质代谢紊乱的药理作用机制研究进展
编辑人员丨2天前
瘀血贯穿于脂质代谢紊乱发展全过程,是其发生发展的促进因素.瘀血阻滞是脂质代谢紊乱重要病机.从瘀论治能有效治疗脂质代谢紊乱,其潜在药理作用机制包括抑制肠道脂质消化吸收、增加脂质排泄;限制肝脏和脂肪组织脂质合成,促进脂质氧化利用和白色脂肪棕色化,减轻脂质沉积;调控肝脏、巨噬细胞、脂肪细胞等脂质转运和血脂运输,减少细胞脂质含量.此外,从瘀论治还能通过以下途径改善包括肝脏、脂肪组织在内的脂质代谢:调节肠道微生物,改善肠道渗透性和恢复肠壁完整性;通过抑制核因子E2相关因子2(Nuclear erythroid 2-related factor 2,Nrf2)-血红素加氧酶-1(Heme oxygenase 1,HO-1)等途径而抗氧化;调节免疫细胞、抑制炎症细胞趋化和极化、控制核因子κB(Nuclear facto-κB,NF-κB)信号通路和 NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NOD-like receptor thermal protein domain associat-ed protein 3,NLRP3)炎症小体活化而改善炎症反应;通过改善自噬而影响氧化应激和炎症反应等病理生理过程.探讨有关从瘀论治脂质代谢紊乱的药理作用机制,这将有助于为临床推广应用从瘀论治脂质代谢紊乱提供新策略和科学依据.
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编辑人员丨2天前
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姜黄素通过下调HO-1/NQO1保护肝癌模型小鼠
编辑人员丨2天前
目的:观察姜黄素对N-亚硝基二乙胺(DEN)联合四氯化碳(CCl4)诱导的C57BL/6J小鼠肝癌模型的作用并探索其机制.方法:取14日龄雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射DEN(25 mg/kg),随机分成模型组和姜黄素(100、200和400 mg/kg)给药组,另取同龄雄性小鼠10只作为正常对照组.模型组和姜黄素给药组从第8周开始灌4(5 mL/kg),每周2次;同时,给药组开始灌胃姜黄素,正常对照组灌胃等体积的蒸馏水,每天1次,连续14周.给药结束后处死小鼠,检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性,观察肝组织病理学变化,检测血红素加氧酶1(HO-1)和NAD(P)H-醌氧化还原酶1(NQO1)的mRNA表达水平,以及HO-1、NQO1和Ki67蛋白表达水平.结果:与正常对照组比较,模型组小鼠体重显著降低(P<0.01),肝脏指数显著增加(P<0.01),血清ALT和AST活性显著升高(P<0.01),HO-1和NQO1的mRNA表达水平无显著差异(P>0.05),HO-1和NQO1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),Ki67阳性表达率显著增加(P<0.05).姜黄素治疗后,小鼠体重显著升高(P<0.01),肝脏指数无明显变化(P>0.05),癌结节数量显著减少(P<0.05或P<0.01),血清AST活性显著降低(P<0.01),HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),Ki67阳性表达率显著降低(P<0.05).结论:姜黄素对DEN联合CCl4诱导的肝癌模型C57BL/6J小鼠具有显著保护作用,其机制与抑制HO-1和NQO1表达有关.
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编辑人员丨2天前
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基于生物信息学对心肌缺血再灌注损伤关键基因的筛选及实验验证
编辑人员丨2天前
目的:运用生物信息学分析方法挖掘参与心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的关键基因.方法:首先,从数据库中下载大鼠MIRI相关数据集GSE122020、E-MEXP-2098和E-GEOD-4105.其次,一方面利用微阵列数据线性模型(limma)包筛选各数据集中的差异表达基因(DEGs),再用稳健排序整合(RRA)方法筛选稳健DEGs;另一方面,利用替代变量分析(SVA)包将各数据集合并为1个数据集,再利用limma包筛选合并DEGs;将2种渠道的DEGs取交集获取共同DEGs.接着,构建共同DEGs的蛋白相互作用(PPI)网络,利用最大邻域组件密度(DMNC)算法筛选关键基因,并绘制关键基因的受试者工作特征(ROC)曲线,以评价其诊断效能.然后,构建MIRI大鼠模型,检测关键基因的mRNA和蛋白表达情况;并对关键基因参与MIRI的研究开展文献回顾分析.最后,对关键基因开展基因集富集分析(GSEA),进一步揭示其介导MIRI可能的机制.结果:共鉴定出143个稳健DEGs,48个合并DEGs,两者取交集后,获得48个共同DEGs.在共同DEGs的PPI网络中,共筛选出了5个关键基因,即MYC原癌基因bHLH转录因子(MYC)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、血红素加氧酶1(HMOX1)、胱天蛋白酶3(CASP3)和尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR).这些关键基因的ROC曲线下面积均大于0.8.在MIRI大鼠心肌组织中MYC、PTGS2、CASP3和PLAUR的mRNA和蛋白高表达,而HMOX1的mRNA和蛋白表达无显著差异.回顾文献,5个关键基因中仅PLAUR未被报道参与MIRI.PLAUR的GSEA结果显示,PLAUR的功能富集主要集中在NOD样受体信号通路、P53信号通路、Toll样受体信号通路、细胞凋亡和脂肪酸代谢等途径.结论:MYC、PTGS2、CASP3、HMOX1和PLAUR参与了MIRI的病理过程.PLAUR为潜在的关键基因,其可能通过调控NOD样受体信号通路、P53信号通路、Toll样受体信号通路、细胞凋亡和脂肪酸代谢等途径介导MIRI,结果可为进一步探讨MIRI的分子机制和治疗靶点提供参考.
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编辑人员丨2天前