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一氧化氮在外源性硫化氢抑制大鼠结肠动力中的作用
编辑人员丨6天前
目的:探讨一氧化氮(NO)在外源性硫化氢(H 2S)抑制大鼠结肠动力中的作用。 方法:免疫组化检测H 2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)在成年Wistar大鼠近端结肠的分布;制备近端结肠纵行肌(LM)和环形肌条(CM),通过恒温浴槽实验观察NO相关工具药干预后外源性H 2S供体硫氢化钠(NaHS)对LM和CM收缩活动的影响;通过膜片钳实验检测不同浓度NaHS对平滑肌细胞L型钙通道电流(I Ca,L)的影响。 结果:H 2S合成酶CBS和CSE在近端结肠肌间神经丛、黏膜层及环纵平滑肌细胞均表达。河豚毒素孵育肌条后NaHS以浓度依赖的方式抑制LM和CM自发性收缩活动,LM最大抑制的半数有效浓度(IC 50)为917.6 μmol/L(95% CI:776.3~1 085 μmol/L, n=6),CM的IC 50为730.4 μmol/L(95% CI:592.2~900.8 μmol/L, n=6)。NO供体硝普钠(SNP)预处理肌条后加入NaHS(3×10 -4~6×10 -4mol/L),LM及CM收缩幅度呈现双向变化,其中低浓度NaHS使LM收缩幅度从(0.679±0.181)g增加至(0.840±0.400)g( n=8, P<0.01),使CM收缩幅度从(0.378±0.140)g增加至(1.176.±0.056)g( n=8, P<0.01)。sGC抑制剂可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂(sGC)ODQ孵育组NaHS的IC 50高于对照组( P<0.05),而NO合成酶抑制剂L-NNA、NO前体L-精氨酸、环磷酸鸟苷(cGMP)竞争性拮抗剂PET-cGMP预处理肌条前后NaHS的IC 50差异无统计学意义( P>0.05)。NaHS(100 μmol/L)使L型钙通道峰电流密度增加[(-4.29±0.29)比(-3.77±0.27)pA/pF, P<0.01];而NaHS(300 μmol/L)使峰电流降低至(-2.96±0.34)pA/pF( P<0.05),并使电流-电压曲线右移。 结论:外源性H 2S对大鼠结肠动力可能具有双重调节作用,其中对结肠平滑肌的抑制作用不依赖NO;L型钙通道在H 2S对结肠动力的双重调节作用中发挥重要作用。
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编辑人员丨6天前
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PAG双向调控NaHS诱导胃黏膜GES-1细胞凋亡
编辑人员丨6天前
目的:探讨H 2S诱导胃黏膜细胞(gastric mucosal epithelial cells,GES-1)凋亡的作用机制。 方法:在不同浓度的H 2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)抑制剂炔丙基甘氨酸(propargylglycine,PAG)的作用下,外源性H 2S供体NaHS(400 μmol/L)作用于胃黏膜细胞GES-1。通过AnnexinV-PE/7-AAD双标染色法利用MUSE细胞状态分析仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹检测Caspase-3表达。 结果:与对照组比较,NaHS组GES-1细胞凋亡率增高( P<0.001)、Caspase-3激活( P<0.001);与NaHS组比较,NaHS-PAG 100 μmol/L组的早期凋亡率降低( P<0.001),Caspase-3断裂带(相对分子质量约为17×10 3)表达降低( P<0.001);而NaHS-PAG 500 μmol/L组及NaHS-PAG 1 000 μmol/L组细胞晚期凋亡率都增高( P均<0.001),Caspase-3断裂带表达都增加( P= 0.003、 P<0.001),差异有统计学意义。 结论:PAG双向调控NaHS诱导胃黏膜细胞GES-1凋亡。
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编辑人员丨6天前
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脓毒症中同型半胱氨酸转硫代谢障碍的机制研究
编辑人员丨6天前
目的:探讨脓毒症患儿外周血同型半胱氨酸(Hcy)水平升高的临床意义及其可能机制。方法:回顾性分析2019年1月至2019年12月徐州市儿童医院PICU收治的51例脓毒症患儿(脓毒症组)的临床资料,并与同期住院的50例感染非脓毒症患儿(普通感染组)及50例健康体检儿童(健康对照组)的血浆Hcy水平进行比较;通过脂多糖诱导脓毒症小鼠模型检测Hcy代谢下游关键限速酶胱硫醚-β合酶(CBS)和胱硫醚-γ裂合酶(CSE)的水平,分析Hcy代谢障碍的可能机制。结果:脓毒症组患儿血浆Hcy水平为(12.62±5.46)μmol/L,显著高于普通感染组[(9.42±2.28)μmol/L]和健康对照组[(8.14±1.60)μmol/L],差异均有统计学意义( P<0.05);脓毒症组中12例发生急性肾损伤患儿血浆Hcy水平为(16.48±5.87)μmol/L,显著高于39例未发生急性肾损伤患儿[(11.62±4.74)μmol/L],差异有统计学意义( P<0.05);脓毒症组中6例发生急性肝衰竭患儿血浆Hcy水平为(18.35±7.10)μmol/L,显著高于45例未发生急性肝衰竭患儿[(11.84±4.78)μmol/L],差异有统计学意义( P<0.05)。脓毒症小鼠血清Hcy水平显著升高( P<0.01);脓毒症小鼠肝脏及肾脏组织中Hcy代谢的关键限速酶CBS和CSE的转录及蛋白表达水平均显著下调( P<0.05)。 结论:脓毒症患儿的外周血Hcy水平升高,在发生急性肾损伤和急性肝衰竭患儿中升高更加明显;脓毒症时可能通过抑制Hcy转硫代谢的关键酶CBS及CSE表达导致Hcy转硫代谢发生障碍,从而引起血Hcy水平升高。
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编辑人员丨6天前
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应用生物信息学数据挖掘探究胱硫醚β-合成酶和胱硫醚γ-裂解酶基因表达在肝癌不良预后中的预测价值
编辑人员丨6天前
目的:探究肝癌和胱硫醚β-合成酶(cystathionine β-synthase, CBS)基因及胱硫醚γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CTH)基因的关系。方法:通过挖掘GEO(gene expression omnibus)与TCGA(the cancer genome atlas)数据库,对肝癌的临床特征与CBS及CTH基因表达进行了相关性分析。并通过对肝癌细胞系进行免疫印迹验证。结果:CBS及CTH在肿瘤中的表达较非肿瘤明显降低( P < 0.05)。Cox回归结果显示CBS是肝细胞癌不良预后的独立危险因素( HR = 0.65, P = 0.02)。针对CBS基因对不同肿瘤分期进行单因素 logistics回归分析,发现肝癌TNM分期II期比I期( P =0.01, OR=0.50)、III期比I期( P =0.03, OR=0.56)、T分期T2期比T1期( P <0.01, OR=0.43)、T3期比T1期( P = 0.02, OR=0.54)CBS基因显著降低。肝癌TNM分期III期比I期( P = 0.01, OR=0.50), Edmondson分期II期比I期( P =0.03, OR=0.48), III期比I期( P <0.01, OR=0.30), IV期比I期( P = 0.03, OR=0.22)CTH基因表达显著降低。GSEA富集分析结果显示,与肝癌细胞CTH与CBS基因表达相关性最高的信号通路为细胞色素P450(FDR Q < 0.01,FWER P < 0.01)。免疫印迹结果显示,与人肝永生化细胞系HL-7702相比,HLE和Hep3B细胞等肝细胞癌细胞系中CTH下游蛋白CSE表达降低。 结论:肿瘤组织中的CBS及CTH基因表达低于正常组织。CBS基因是肝细胞癌不良预后的独立危险因素。与CBS及CTH基因关系最为密切的是信号通路为细胞色素P450通路。
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编辑人员丨6天前
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硫化氢通过调控NLRP3炎症复合体对抗对比剂诱导的急性肾损伤
编辑人员丨6天前
目的:探讨对比剂诱导的急性肾损伤(contrast-induced acute kidney injury,CIAKI)中内源性硫化氢水平是否发生变化,补充硫化氢是否可下调Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎症复合体从而保护肾小管上皮细胞对抗对比剂所致的肾损伤。方法:24只体重180~220 g清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠按随机数字表法分为对照组、CIAKI组(碘普罗胺2.9 g/kg)及CIAKI+NaHS组(NaHS 4 mg/kg处理3 d后予碘普罗胺2.9 g/kg)组,每组8只。对肾组织进行全转录组测序及生物信息学分析,HE、PAS染色观察肾组织病理改变,TUNEL法检测肾小管上皮细胞损伤情况,免疫荧光染色检测肾组织炎症复合体NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain,ASC)、caspase-1的表达。在人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中探讨硫化氢在对比剂(碘普罗胺200 mgI/ml)诱导的细胞损伤中的作用,CCK-8法测定细胞存活率。结果:与对照组相比,CIAKI组大鼠内源性硫化氢合成酶相关基因胱硫醚-β-合成酶( CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶( CSE)和3-巯基丙酮酸硫转移酶( 3- MST)水平下降(均 P<0.05)。 CBS、 CSE和 3- MST基因表达水平与肾功能临床生化指标血肌酐、尿素氮和胱抑素C水平呈负相关(均 P<0.05)。与CIAKI组比较,CIAKI+NaHS组大鼠血肌酐、尿素氮及胱抑素C水平较低,肾脏病理改善,肾小管上皮细胞焦亡减少,肾组织炎症复合体NLRP3、ASC、caspase-1的水平较低(均 P<0.05)。在HK-2细胞中,对比剂+NaHS组细胞存活率高于对比剂组;应用CBS抑制剂减少内源性硫化氢水平,对比剂诱导的HK-2细胞存活率进一步降低( P<0.05)。 结论:内源性硫化氢系统受损是CIAKI发病的关键环节,上调硫化氢水平可改善CIAKI大鼠的肾损伤,其保护机制与调节NLRP3炎症复合体相关。
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编辑人员丨6天前
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PAG双向调节H 2S诱导GES-1细胞免疫反应
编辑人员丨6天前
目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H 2S)诱导胃黏膜上皮细胞-1(gastric mucosal epithelial-1,GES-1)的免疫反应机制。 方法:分别设立对照组、炔丙基甘氨酸(propargylglycine, PAG)浓度组(PAG分别为100 μmol/L,PAG 500 μmol/L,PAG 1000 μmol/L)和NaHS(NaHS 400 μmol/L)作用组(NaHS组,NaHS-PAG 100 μmol/L组,NaHS-PAG 500 μmol/L组,NaHS-PAG 1000 μmol/L组)。在不同浓度H 2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)抑制剂PAG(100 μmol/L,500 μmol/L,1000 μmol/L)作用下,通过添加400 μmol/L外源性NaHS作用于胃黏膜细胞GES-1进行研究。Calcein/PI细胞活性与细胞毒性实验检测NaHS对GES-1细胞膜渗透性的影响;酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞内的CSE的活性及H 2S、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-18含量;DCF(DCFH-DA)/ Hoechst33342双标染色检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平。 结果:Calcein/PI细胞活性与细胞毒性实验结果显示,PAG和NaHS不破坏GES-1细胞膜完整性,PAG 500 μmol/L、PAG 1000 μmol/L及NaHS 400 μmol/L抑制细胞增殖,抑制率分别为(48.11±2.29)%、(60.87±2.42)%、(59.83±2.3)%。100 μmol/LPAG阻碍了NaHS的增殖抑制作用,抑制率为(47.80±2.65)%,PAG 500 μmol/L和PAG1000 μmol/L促进了NaHS的增殖抑制作用,抑制率分别为(65.16±1.02)%、(70.90%±1.30)%; ELISA结果显示,NaHS作用GES-1细胞后,与对照组相比,细胞内CSE的活性明显增高[U/mL:(23.33±0.77)比(6.55±1.84)]、H 2S含量[μmol/L:(13.27±0.83)比(1.39±0.29)],炎性因子IL-1β水平增加[ μg/L:(3.48±0.26)比(0.77±0.11)],IL-18水平降低[ng/L:(1.15±0.36)比(3.19±0.90)],差异均有统计学意义( P值分别为0.00,0.00,0.00,0.02),镜下观察显示ROS含量增加。PAG 100 μmol/L弱化NaHS的作用,差异均具有统计学意义( P值均<0.05),而PAG 500 μmol/L和PAG 1000 μmol/L增强NaHS的作用,差异均具有统计学意义( P值均<0.05)。此外,IL-18表达与IL-1β的表达呈负相关( r=-0.49, P<0.05)。 结论:PAG双向调节H 2S诱导胃黏膜细胞GES-1免疫反应。
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编辑人员丨6天前
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硫氢化钠增加高糖高脂条件下小鼠心房肌细胞系HL-1谷胱甘肽合成
编辑人员丨2024/2/3
目的 研究硫氢化钠(NaHS)是否通过调节谷胱甘肽(GSH)的合成,降低活性氧自由基(ROS)产生,改善小鼠 2 型糖尿病心肌病(DCM).方法 将小鼠心房肌细胞系HL-1 分为对照组、高葡萄糖(HG:40 mmol/L)和棕榈酸(Pal:500 μmol/L)处理组;以及硫氢化钠(NaHS,100 μmol/L)、DL-炔丙基甘氨酸[PPG,胱硫醚 γ裂解酶(CSE)抑制剂,1 mmol/L]和 N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,ROS抑制剂,5 mmol/L)处理 72h组.Western blot检测CSE和谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达;二氢乙锭(DHE)和二氯氟甲烷(DCFH)检测ROS含量;免疫共沉淀检测核因子红细胞系2 相关因子2(Nrf2)泛素化水平及Nrf2 与肌肉特异性环指蛋白1(Murf1)的相互作用.结果 与对照组比高糖高脂处理HL-1 细胞后CSE、溶质载体家族 7 成员 11(SLC7A11)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基C(GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基M(GCLM)、谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达水平下降,而NaHS能恢复其表达.高糖高脂组ROS含量高于NaHS组.与NaSH组比高糖高脂条件下Murf1 与Nrf2 的相互作用增加,Nrf2 泛素化水平明显增加.结论 硫氢化钠减轻Nrf2 的泛素化,增加GSH合成关键酶的表达.
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编辑人员丨2024/2/3
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硫化氢对糖尿病大鼠皮肤创面自噬和血管形成的影响
编辑人员丨2024/1/20
目的:探讨硫化氢(H2S)对糖尿病(DM)大鼠皮肤创面自噬及血管形成的影响及机制.方法:健康8周龄雄性SD大鼠36只,随机选取12只作为正常对照(control)组,余大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,将建模成功24只大鼠随机分为糖尿病模型(DM)组和NaHS(H2S供体)干预(DM+NaHS)组,每组12只.手术切除各组大鼠背部皮肤建立皮肤创伤模型,DM+NaHS组大鼠每日腹腔注射NaHS(56 μmol/kg),DM组和control组大鼠每日腹腔注射等量生理盐水,连续注射21 d.手术第0、7、14、21天检测皮肤创面愈合情况.手术第21天,取皮肤创面组织,应用H2S荧光探针C-7Az检测皮肤组织H2S含量;HE染色观察创面组织形态学变化及血管形成情况;免疫荧光染色检测创面组织CD31表达;采用CD31和beclin-1免疫荧光双重染色检测血管内皮细胞自噬情况;Western blot检测创面组织胱硫醚γ-裂解酶(CSE)、CD31、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、beclin-1、P62、Bcl-2、Bax、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB/Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达;碘化丙啶(PI)及cas-pase-3免疫荧光染色检测创面组织细胞凋亡,通过CD31和TUNEL荧光双重染色检测创面组织血管内皮细胞凋亡情况.结果:与DM组相比,DM+NaHS组皮肤创面愈合率、H2S含量及CSE蛋白表达显著升高(P<0.01),但低于control组水平(P<0.01).HE染色显示,DM组创面表层薄,毛细血管少,创面宽;DM+NaHS组创面表层增厚,可见大量毛细血管,创面宽度减小.与DM组相比,DM+NaHS组创面组织CD31表达显著增加(P<0.01),caspase-3和PI荧光强度显著降低(P<0.01),CD31+/beclin-1+和CD31+/TUNEL+阳性细胞显著减少(P<0.01).Western blot结果显示,与DM组相比,DM+NaHS组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、beclin-1和Bax表达水平降低(P<0.01),P62和Bcl-2表达升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR比值均显著升高(P<0.01).结论:H2S可促进糖尿病大鼠皮肤创面愈合,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制血管内皮细胞自噬及凋亡,促进血管生成有关.
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编辑人员丨2024/1/20
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内源性H2S/CSE和NO/iNOS体系与哮喘的关系研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨内源性硫化氢(H2S)/胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和一氧化氮(NO)/诱导型一氧化氮合酶(iNOS)体系与支气管哮喘(哮喘)发生关系.方法 雄性SD大鼠随机分为对照组、 哮喘组和特异性免疫治疗组,每组10只.采用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立大鼠哮喘模型,并通过OVA雾化吸入法进行特异性免疫治疗.试验结束后比较各组大鼠血浆中H2S、NO含量和肺组织中iNOS活性及CSE mRNA表达.结果 与对照组比较,哮喘组大鼠血浆H2S含量和肺组织CSE mRNA表达水平均降低(P<0.05),哮喘组大鼠血浆NO含量和肺组织iNOS活性均升高(P<0.05);特异性免疫治疗组大鼠血浆NO及H2S含量、 肺组织iNOS活性与对照组差异均无统计学意义(P>0.05),CSE mRNA表达水平低于对照组(P<0.05).H2S含量与iNOS活性呈负相关(r=-0.517,P=0.027),NO含量与CSE mRNA表达水平亦呈负相关(r=-0.619,P=0.011)结论 哮喘的发生与内源性H2S/CSE和NO/iNOS体系失衡相关,特异性免疫治疗可通过调节这两种体系抑制哮喘的发展.
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编辑人员丨2023/8/6
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Graves病内源性硫化氢的水平变化意义及其生成机制
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨内源性硫化氢(H2S)在Graves病(GD)患者中的水平变化及其作用,并初步探索其生成机制.方法 选择未经药物治疗GD患者20例(未治疗组)、药物治疗后缓解GD患者20例(治疗缓解组)和单纯性甲状腺结节患者20例(对照组),通过分光光度计法测定血清中H2S浓度;同时每组中选取8例患者,取其甲状腺组织,采用RT-PCR技术检测胱硫醚-β-合成酶(CBS) mRNA、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE) mRNA水平.结果 未治疗组与对照组相比,血清中H2S浓度下降(P<0.05),治疗缓解组与未治疗组相比,血清中H2S浓度增加(P<0.05).对照组中可见CBS mRNA表达,而未治疗组甲状腺组织中可见CBS mRNA减少,治疗缓解组甲状腺组织中CBSmRNA增加(P均<0.05),未见CSE mRNA表达.结论 GD患者内源性H2S水平降低,其在GD发病过程中可能起着抑炎作用,在甲状腺组织中催化H2S合成的酶主要是CBS,而不是CSE.
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编辑人员丨2023/8/6