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胱硫醚-β-合成酶基因变异致青年脑梗死合并多发动脉血栓一例
编辑人员丨1周前
高同型半胱氨酸血症是青年脑梗死的独立危险因素。同型半胱氨酸代谢过程中关键酶的基因突变是高同型半胱氨酸血症的主要原因,胱硫醚-β-合成酶复合杂合变异致青年脑梗死,同时合并肺栓塞及下肢动脉血栓罕见报道。文中报道1例青年脑梗死患者,合并肺栓塞及下肢动脉血栓,病因筛查发现血同型半胱氨酸水平显著增高,基因检测胱硫醚-β-合成酶833T>C/1082C>T复合杂合变异,予叶酸、甲钴胺、维生素B 6以及抗凝治疗后,患者血同型半胱氨酸水平逐渐下降,随访1年,未见新发血栓事件,复查同型半胱氨酸在正常范围。
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编辑人员丨1周前
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Toll样受体4调节硫化氢引起腰椎间盘突出症模型鼠中枢痛敏的机制
编辑人员丨1周前
目的:探讨Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)调节硫化氢(H 2S)和内源性胱硫醚B合成酶(CBS)蛋白表达的作用以及其参与腰椎间突出症(LDH)中枢痛敏的机制。 方法:利用大鼠(购自苏州大学实验动物中心)构建腰椎间盘突出症模型(LDH)组和假手术(Sham)组;使用膜片钳技术检测脊髓胶质区(SG)神经元兴奋性的产生和传导;蛋白质印迹法(Western blot)实验测定不同组别之间脊髓背角(SC)中TLR4、NF-κB、CBS蛋白表达发生的差异性变化;通过给予大鼠有害的热或机械等异常性疼痛增加的刺激,观察其行为的变化,评估大鼠痛觉过敏是否增强。分析电生理数据时,选取sEPSCs时长4 min,并保证至少包含300个events,并且使用Clampfit 10.3分析软件分析其频率和振幅的大小。结果:造模后与Sham组(-30.86±3.55、4.34±0.64)比较,LDH组(-35.21±1.74、7.46±1.15)大鼠脊髓SG神经元的兴奋性和自发性兴奋性传递显著增强,差异有统计学意义( t=2.564, P<0.01; t=2.225, P<0.05)。在大鼠的脊髓背角中LDH组(0.41±0.02、0.40±0.03、4.61±0.33)比sham组(0.21±0.02、0.28±0.04、3.11±0.43)TLR4、NF-κB、CBS蛋白表达量显著上升,差异有统计学意义( t=7.071、2.400、2.767, P<0.05)。鞘内给予LDH组大鼠TLR4选择性抑制剂CL1095,与NC对照组(0.46±0.12、0.51±0.07)比较,CL1095组(0.21±0.11、0.18±0.11)NF-κB和CBS蛋白表达显著下调( t=10.07、2.531, P<0.05),并且与NC对照组(11.88±1.11、9.32±1.48)相比CL1095组(8.23±1.01、6.43±1.55)大鼠脊髓背角SG谷氨酸能神经元sEPSCs峰值振幅和频率缓解动物的病理性疼痛,差异均有统计学意义( t=4.334、2.437, P<0.05)。 结论:LDH诱导脊髓背角TLR4和NF-κB蛋白水平表达增高,进而激活下游CBS-H2S的表达,最终引发病理性疼痛。
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编辑人员丨1周前
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应用生物信息学数据挖掘探究胱硫醚β-合成酶和胱硫醚γ-裂解酶基因表达在肝癌不良预后中的预测价值
编辑人员丨1周前
目的:探究肝癌和胱硫醚β-合成酶(cystathionine β-synthase, CBS)基因及胱硫醚γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CTH)基因的关系。方法:通过挖掘GEO(gene expression omnibus)与TCGA(the cancer genome atlas)数据库,对肝癌的临床特征与CBS及CTH基因表达进行了相关性分析。并通过对肝癌细胞系进行免疫印迹验证。结果:CBS及CTH在肿瘤中的表达较非肿瘤明显降低( P < 0.05)。Cox回归结果显示CBS是肝细胞癌不良预后的独立危险因素( HR = 0.65, P = 0.02)。针对CBS基因对不同肿瘤分期进行单因素 logistics回归分析,发现肝癌TNM分期II期比I期( P =0.01, OR=0.50)、III期比I期( P =0.03, OR=0.56)、T分期T2期比T1期( P <0.01, OR=0.43)、T3期比T1期( P = 0.02, OR=0.54)CBS基因显著降低。肝癌TNM分期III期比I期( P = 0.01, OR=0.50), Edmondson分期II期比I期( P =0.03, OR=0.48), III期比I期( P <0.01, OR=0.30), IV期比I期( P = 0.03, OR=0.22)CTH基因表达显著降低。GSEA富集分析结果显示,与肝癌细胞CTH与CBS基因表达相关性最高的信号通路为细胞色素P450(FDR Q < 0.01,FWER P < 0.01)。免疫印迹结果显示,与人肝永生化细胞系HL-7702相比,HLE和Hep3B细胞等肝细胞癌细胞系中CTH下游蛋白CSE表达降低。 结论:肿瘤组织中的CBS及CTH基因表达低于正常组织。CBS基因是肝细胞癌不良预后的独立危险因素。与CBS及CTH基因关系最为密切的是信号通路为细胞色素P450通路。
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编辑人员丨1周前
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利用CRISPR/Cas9系统制备斑马鱼cbsb敲除模型
编辑人员丨3周前
目的 采用成簇的规律性间隔的短回文重复序列(CRISPR)/Cas9系统对斑马鱼胱硫醚-β-合成酶b基因(cbsb)进行编辑,并制备稳定的斑马鱼cbsb敲除品系.方法 使用ClustaIX软件分析斑马鱼cbsb编码蛋白(Cbsb)的保守结构域,利用生物信息学选取向导RNA(gRNA)靶点,体外合成并纯化gRNA和密码子优化的Cas9 mRNA,在刚受精的斑马鱼胚胎(1-cell期)中显微注射混合的gRNA和Cas9mRNA,提取受精后3 d的斑马鱼幼鱼基因组,通过PCR扩增并测序分析靶点的切割效率,通过基因组扩增和测序筛选并获得cbsb敲除的稳定品系.结果 斑马鱼Cbsb与人、小鼠胱硫醚-β-合成酶(CBS)高度同源.在斑马鱼Cbsb保守结构域的编码序列处设计4个靶点,其中4#靶点具有高效的切割效率,利用该靶点制备并筛选获得多个cbsb敲除斑马鱼,选取-3+13 bps和-228 bps移码突变的两种品系,进一步筛选获得稳定的cbsb敲除品系.结论 利用CRISPR/Cas9系统成功制备了两种斑马鱼cbsb敲除的稳定品系,为进一步在斑马鱼活体中研究Cbsb的功能奠定了基础.
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编辑人员丨3周前
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miR-144-3p参与高蛋氨酸饮食诱导Cbs+/-小鼠的肝细胞自噬
编辑人员丨2024/1/6
背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs+/-小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关.微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义.目的:探讨miR-144-3p在高蛋氨酸饮食诱导Cbs+/-小鼠肝细胞自噬中的关键作用.方法:①选取4周龄体质量相近的雄性胱硫醚β-合成酶基因正常(Cbs+/+)小鼠和单基因敲除(Cbs+/-)小鼠各10只,均饲以高蛋氨酸饮食,12周后处死,留取肝脏组织.②体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0 μmol/L同型半胱氨酸)、同型半胱氨酸组(100 μmol/L同型半胱氨酸)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、mimic-NC+同型半胱氨酸组(转染mimic-NC+100 μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p mimic组(转染miR-144-3p mimic)、miR-144-3p mimic+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p mimic+100 μmol/L同型半胱氨酸)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、inhibitor-NC+同型半胱氨酸组(转染inhibitor-NC+100 μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p inhibitor组(转染miR-144-3p inhibitor)、miR-144-3p inhibitor+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p inhibitor+100 μmol/L同型半胱氨酸).采用荧光定量PCR检测肝组织和肝细胞中miR-144-3p的表达水平;转染miR-144-3p模拟物或抑制剂后,采用荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-144-3p的转染效率及其对LC3B和p62蛋白表达的影响;酶联免疫法检测肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的表达情况;Pearson相关性分析肝细胞miR-144-3p表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶含量的相关性.结果与结论:①与Cbs+/+组比较,Cbs+/-组小鼠肝组织和同型半胱氨酸组肝细胞中miR-144-3p的表达水平降低(P<0.01);②转染miR-144-3p模拟物后,与mimic-NC比较,miR-144-3p mimic组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平降低,p62蛋白的表达水平升高(P<0.01);转染miR-144-3p inhibitor后,得到相反的结果(P<0.01);③与mimic-NC组相比,miR-144-3p mimic组肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的含量降低(P<0.01);与inhibitor-NC组比较,得到相反的结果(P<0.01);④肝细胞中miR-144-3p的表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.887 6)和门冬氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.829 9)的含量呈负相关;⑤结果表明,同型半胱氨酸通过抑制miR-144-3p的表达促进肝细胞的自噬,进而加重肝损伤.
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编辑人员丨2024/1/6
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基于CSE/H2S体系探讨葱白提取物对H2S催化酶及趋化因子CX3CL1的作用机制
编辑人员丨2023/12/30
目的 研究葱白提取物对动脉粥样硬化(AS)大鼠CX3C 趋化因子配体1(CX3CL1)、CX3C趋化因子受体 1(CX3CR1)、胱硫醚β合成酶(CBS)、3-巯基丙酮酸硫基转移酶(3MST)表达的影响及相互作用机制.方法 纯种健康雄性SD大鼠,SPF级,体重(200±20)g,共40只,随机选择10只作为正常组,另外30只制备大鼠AS模型,再随机分为模型组、葱白提取物组、辛伐他汀组,每组各10只.正常组以基础饲料喂养,模型组、葱白提取物组、辛伐他汀组均以高脂维生素D3饲料喂养.从第5周开始,葱白提取物组大鼠给予配置好的葱白提取物溶液10 mL/kg体质量灌胃,辛伐他汀组大鼠给予辛伐他汀混悬液10 mL/kg体质量灌胃;正常组和模型组均给予等容积生理盐水10 mL/kg体质量灌胃,共连续8周.在第12周时,留取大鼠血液,分离主动脉.采用生化检测、HE染色、Western blot、RT-PCR检测脂质代谢、H2S催化酶、趋化因子及基质金属蛋白酶表达.结果 与模型组比较,葱白提取物组及辛伐他汀组大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B浓度均降低(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇浓度升高(P<0.05).与模型组比较,葱白提取物组及辛伐他汀组斑块内部的胆固醇结晶较少,管腔狭窄程度较轻.与模型组比较,葱白提取物组和辛伐他汀组CX3CL1 mRNA、CX3CR1 mRNA、MMP7 mRNA、MMP9 mR-NA表达均下调.与模型组比较,葱白提取物组和辛伐他汀组大鼠主动脉组织中3MST、CBS蛋白相对表达量升高(P<0.05),而CX3CL1、CX3CR1蛋白相对表达量降低(P<0.05).结论 葱白提取物可通过调控内源性H2S生成体系,抑制CX3CL1、CX3CR1表达、降低 MMP7、MMP9活性,发挥抗动脉粥样硬化作用.
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编辑人员丨2023/12/30
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小型猪二尖瓣反流致心力衰竭模型构建及心肌硫化氢体系变化的研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:构建小型猪二尖瓣反流致心力衰竭模型,探究慢性心力衰竭过程中硫化氢(H2S)体系的变化.方法:12只8月龄中华小型猪随机分为对照组(n=6)与二尖瓣反流组(n=6),采用小切口非体外循环下二尖瓣腱索拉伤造成二尖瓣反流建立慢性心力衰竭模型.6个月后采用超声心动图、在体血流动力学和病理学方法评价动物左心室结构和功能的变化,采用分子生物学方法检测心脏重构分子Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)和H2S合成酶体系中胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)蛋白和mRNA表达.结果:术后6个月二尖瓣反流组动物与对照组相比,左心室收缩末期容积(LVESV)和左心室舒张末期容积(LVEDV)明显增加[(18.50±2.88)ml vs(10.50±0.99)ml,P<0.05;(87.50±12.12)ml vs(42.33±2.04)ml,P<0.01],左心室收缩末期压力明显降低[(86.66±5.60)mmHg vs(117.70±5.49)mmHg,1 mmHg=0.133 kPa,P<0.01],但左心室射血分数(LVEF)无明显变化[(78.67±1.87)%vs(75.33±1.87)%,P>0.05].病理学可见二尖瓣反流组动物二尖瓣后瓣腱索断裂,瓣叶卷曲增厚,边缘不规则增生,石蜡切片染色可见左心室心肌细胞损伤、心肌间胶原纤维明显增多.二尖瓣反流组与对照组比较,血浆H2S水平明显降低[(27.48±2.78)μmol/L vs(37.87±3.55)μmol/L,P=0.044],血清N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平明显升高[(2132.00±212.30)μg/L vs(456.70±40.79)μg/L,P<0.001].分子生物学手段检测二尖瓣反流组心肌组织与心脏重构相关的CollagenⅠ、CollagenⅢ水平明显上调,H2S合成相关的酶CSE、CBS明显下调.结论:H2S合成体系下调可能参与二尖瓣反流所致心肌重构和心力衰竭的发展过程.
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编辑人员丨2023/8/6
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胱硫醚-β-合成酶参与慢性压迫性损伤大鼠神经病理性痛的作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 评价胱硫醚-β-合成酶(CBS)在大鼠神经病理性痛形成中的作用.方法 SPF级健康雄性SD大鼠36只,180~200 g,5~6周龄,采用随机数字表法分为3组(n=12):神经病理性痛组(CCI组)、CBS抑制剂组(CCI+ AOAA组)及假手术组(Sham组);鞘内成功置管后第3天,建立大鼠CCI模型(坐骨神经缩窄性损伤法);术后1d开始连续鞘内注射14 d(每天1次):CCI+AOAA组鞘内注射AOAA(10 μg/kg)10 μL+生理盐水10 μL,Sham组和CCI组鞘内注射等量生理盐水,于术前1d和术后1、3、7、10和14 d测定热痛闽和机械痛阈.术后7、14d处死大鼠,取脊髓右侧L4~6背根神经节,检测CBS及NF-κB的表达.结果 CCI组与Sham组比较大鼠术后各时点热痛阈和机械痛阈明显下降(P<0.05),术后7和14d背根神经节NF-κB p65的表达明显升高(P<0.05);CCI+ AOAA组与CCI组比较,术后各时点热痛阈和机械痛阈升高(P<0.05),术后7和14d背根神经节NF-κB p65表达下调(P<0.05).结论 大鼠神经病理性痛形成与背根神经节CBS的上调,促进NF-κB活化有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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二甲双胍联合胰岛素对血清中同型半胱氨酸水平的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨二甲双胍联合胰岛素对血清中同型半胱氨酸(Hcy)水平的影响.方法 2型糖尿病(T2DM)患者100例;其中,A组29例接受二甲双胍500~2000mg/d治疗,B组36例接受二甲双胍500~2000mg/d联合胰岛素36~60IU/d治疗,C组35例接受胰岛素36~60IU/d治疗.治疗6个月,检测三组相关血生化指标,ELISA法检测胱硫醚-β-合成酶(CBS)水平.结果 A组病程较B组和C组短,HbA1c水平也低于B组和C组(P<0.05);A组FBG低于C组,而C肽高于C组(P<0.05).C组CBS水平低于A组和B组[(105.6±41.6) ng/L vs.(133.0±34.6)ng/L和(119.7±31.7) ng/L](P<0.05).C组Hcy水平高于A组和B组[(17.8±5.3)μmol/L vs.(9.0±3.2) μmol/L和(11.5±4.5)μmol/L](P<0.05).血清Hcy与CBS呈负相关(rs=-0.43,P<0.05).结论 外源性胰岛素可升高Hcy水平,这可能与其降低了血清CBS浓度有关,而其联合使用二甲双胍可以防止T2DM患者出现高Hcy血症.
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编辑人员丨2023/8/6
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TLR4/NF-κB信号通路对CBS+/-小鼠非酒精性脂肪性肝病的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的:探讨TLR4/NF-κB信号通路对胱硫醚β-合成酶(CBS)基因杂合敲除(CBS+/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病形成的影响.方法:随机选取4周龄CBS基因正常(CBS+/+)小鼠(n=6)及CBS+/-小鼠(n=6),均给予高蛋氨酸饮食12周.应用全自动生化分析仪检测小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及同型半胱氨酸(Hcy)水平;分离肝脏并计算肝指数(肝重/体重);ELISA法检测小鼠肝脏组织TC及TG含量变化;苏木精-伊红(HE)和油红O染色观察小鼠肝脏结构和脂质改变;RT-qPCR和Western blot检测小鼠肝组织中TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达;Pearson相关性分析评估小鼠肝脏中TLR4和NF-κB表达与TC和TG含量的相关性.结果:与CBS+/+组小鼠相比较,CBS+/-组小鼠血清Hcy水平升高(P<0.05),肝指数升高(P<0.05),肝组织及血清中TC和TG含量增加(P<0.05或P<0.01);HE和油红O染色结果表明CBS+/-组小鼠肝脏脂肪变性明显;TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01);TLR4和NF-κB分别与小鼠肝脏中TC和TG含量呈正相关.结论:TLR4/NF-κB信号通路在CBS+/-小鼠非酒精性脂肪性肝病的形成过程中发挥重要作用.
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编辑人员丨2023/8/5