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基于高通量测序技术的玄参对大鼠有效性和安全性研究
编辑人员丨6小时前
目的 研究玄参干预对大鼠基因表达谱的影响,探讨玄参干预对大鼠的潜在保护和毒性作用及其机制.方法 将20只雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分为玄参组和空白组,每组10只.玄参组大鼠给予玄参提取物1350 mg· kg-1灌胃,空白组灌胃给予等容积0.9%氯化钠溶液,均为1次/d,连续15 d.分别于灌胃15 d后,检测肝脏组织的基因表达谱,通过时间序列趋势分析软件(Short Time-Series Expression Miner,STEM)筛选具有趋势表达的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并对其进行基因本体论(Gene Ontology,GO)功能注释和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析.结果 玄参组筛选76个DEGs,其中28个上调,48个下调,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05).KEGG通路分析结果显示,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、无翅型小鼠乳腺肿瘤病毒整合位点(Wingless-Type MMTV Integration Site Family,Wnt)、转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)、非受体酪氨酸激酶家族-信号转导子和转录激活子(Janus Kinase-Signal Transducer and Ac-tivator of Transcription,Jak-STAT)、核因子激活的 B 细胞的 κ-轻链增强(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、Toll 样受体(Toll-like receptor)、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)、催产 素(Oxyto-cin)、神经生长因子受体(TNFRSF16)相关蛋白 1[nerve growth factor receptor(TNFRSF16)associatedprotein 1,Ngfrap1]和神经营养因子受体相关死亡结构域(neurotrophin receptor associated death domain,Neurotrophin)这9条信号通路,包含Mecom、Amhr2、Pias2、Ticam2、Cyp7a1、Ngfrap1和Nfatc4这7个靶基因.经查阅文献,Mecom可能为表征玄参对大鼠潜在保护作用的靶基因,而另外6种则可能为表征玄参对大鼠潜在毒性作用的靶基因.结论 玄参作用的两重性,既可对机体产生预防和治疗作用,也会产生潜在的不良反应.
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编辑人员丨6小时前
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PTK7在口腔鳞癌中的表达分析及其生物学功能研究
编辑人员丨6小时前
目的 探讨PTK7 在口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达水平、潜在的生物学功能及其临床意义.方法 采用实时荧光PCR(quantitive real-time polymerase chain reaction,qPCR)和Western blot检测PTK7 在OSCC细胞系和口腔鳞癌组织标本中的表达情况,利用siRNA干扰技术下调PTK7 在HN6 和Cal27 细胞系中的表达,通过CCK-8实验、平板克隆实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测PTK7 下调后其对OSCC细胞系增殖、迁移、侵袭的影响;同时采用免疫组织化学染色法检测 75 例口腔鳞癌组织中PTK7 蛋白的表达水平,分析其相关的临床意义.结果 qPCR及Western blot结果显示PTK7 基因及其编码蛋白在口腔鳞癌细胞系HN6 和Cal27 中高表达,并在 6 例新鲜口腔鳞癌标本中的表达高于其配对的癌旁正常组织;下调PTK7 的表达可抑制OSCC细胞增殖、迁移和侵袭功能;在 75 例口腔鳞癌组织中,PTK7 的表达水平与OSCC患者的发病年龄、吸烟情况、病理分化程度等相关,其差异有统计学意义(P<0.05).Kaplan-Meier生存分析发现,高表达PTK7的OSCC患者的预后较差.结论 PTK7 是口腔鳞癌发生发展过程的潜在癌基因,其表达水平影响OSCC细胞的生物学功能,临床上可根据PTK7 表达水平了解口腔鳞癌的特性,PTK7 可作为口腔鳞癌预后判定的独立指标.
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编辑人员丨6小时前
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虫草素对786-O和ACHN肾癌细胞系增殖、迁移和凋亡机制探究
编辑人员丨6小时前
探究肾癌细胞系经虫草素给药刺激后,细胞凋亡及迁移的机制.体外培养肾癌786-O细胞系和肾癌ACHN细胞系,采用MTT法、细胞迁移实验、HE染色、免疫荧光染色及蛋白免疫印记法;检验不同浓度虫草素处理肾癌细胞系增殖抑制率、细胞迁移情况、细胞形态变化和细胞核形态差异,检验凋亡相关基因蛋白表达情况,探究虫草素诱导肾癌细胞的凋亡机制.随着浓度剂量提高,虫草素能够显著促进肾癌细胞系凋亡,抑制迁移.形态学研究表明,HE染色观察发现癌细胞数量明显降低,并且细胞核明显变大.免疫荧光染色发现MMP-2、MMP-9和BCL-2蛋白表达显著降低,Bax、Casepase-3和Casepase-7蛋白表达显著增加,肾癌细胞可通过AKT/mTOR信号通路诱导肾癌细胞凋亡.
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编辑人员丨6小时前
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基于Notch与Wnt/β-catenin通路探讨黄芪甲苷对人成纤维细胞间质转化的作用
编辑人员丨6小时前
目的 基于Notch与Wnt/β-catenin通路,探讨黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)对类风湿关节炎相关间质性肺病(rheumatoid arthritis associated interstitial lung disease,RA-ILD)体外模型的作用机制.方法 用 Luminex 检测法对RA-ILD模型鼠支气管肺泡灌洗液中细胞因子进行检测,筛选出关键细胞因子;共培养人髓系白血病单核细胞(human myeloid leukemia mononuclear cells,THP-1)与正常人肺成纤维细胞(normal human lung fibroblast,NHLF)两种细胞系,加入关键细胞因子模拟RA-ILD体外模型,给予不同干预措施.通过RT-PCR、Western blot、COIP、EdU、ELISA以及双荧光素酶报告基因活性检测方法观察Snail、ZEB-1及E-Cadherin的启动子活性及mRNA表达、Notch通路中的关键蛋白表达、β-catenin的核转位水平、NHLF细胞增殖速率、Col Ⅰ、Col Ⅲ及Fibronectin的分泌水平以及β-catenin与NICD、β-catenin与LEF、NICD与CSL的相互作用.结果 使用细胞因子处理NHLF细胞后,Snail、ZEB-1的启动子活性及mRNA表达明显增高,Notch通路中的关键蛋白表达水平显著上调,β-catenin的核转位明显增加,EdU阳性细胞明显增加;细胞上清中Col Ⅰ、Col Ⅲ及Fibronectin分泌水平显著上调,同时β-catenin与NICD、β-catenin与LEF、NICD与CSL的蛋白结合明显增加;使用Notch抑制剂DAPT和Jagged1 shRNA时结果与上述结论相反;AS-Ⅳ能够通过抑制Jagged1进而下调Notch及β-catenin信号通路的过度活化,抑制β-catenin与NICD、β-catenin与LEF、NICD与CSL的 蛋白结合,能够剂量依赖性地抑制Snail及ZEB-1并上调E-Cadherin的启动子活性、mRNA和蛋白表达水平,抑制NHLF细胞的过度增殖及Col Ⅰ、Col Ⅲ、Fibronectin的分泌.结论 AS-Ⅳ可能通过抑制Notch和Wnt/β-catenin信号通路,抑制NHLF细胞增殖,减少ECM过度沉积,从而减缓RA-ILD肺间质纤维化进展.
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编辑人员丨6小时前
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IKBKB基因敲除对胃癌细胞NLRC5、NF-κB表达以及生物学功能的影响
编辑人员丨6小时前
目的:探究 IKBKB 基因在胃癌细胞中的表达水平与 NLRC5、NF-κB 的作用关系,明确其对胃癌细胞生物学功能影响.方法:采用 pLenti-IKBKB-sgRNA 基因敲除质粒直接对人胃癌 SGC-7901 细胞系进行转染,应用免疫印迹试验(western blot,WB)检测单克隆细胞株中IKBKB 基因敲除的效果,以及 NLRC5、NF-κB 的表达水平.划痕实验和Transwell 迁移实验检测单克隆细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期.成瘤实验观察单克隆细胞对瘤体生长的影响.在临床胃癌组织和癌旁组织中采用免疫组化染色评估NLRC5、NF-κB、IKBKB 的表达状态.明确 IKBKB 与 NLRC5、NF-κB 的相关性以及临床诊断价值.结果:敲除 IKBKB 基因后人胃癌 SGC-7901 细胞中 NLRC5、NF-κB 的表达水平显著降低,细胞迁移和侵袭能力减弱.细胞发生 G1 期阻滞,降低了 SGC-79013 细胞增殖能力,细胞总凋亡率显著上升.IKBKB 敲除后 NLRC5、NF-κB 表达水平下调影响瘤体的生长发育.NLRC5、NF-κB、IKBKB 在胃癌组织中表达水平高于癌旁组织,NLRC5、NF-κB 与 IKBKB 的表达水平呈正相关.IKBKB、NLRC5、NF-κB 三者联合诊断胃癌 AUC 为 0.921(0.876~0.967).结论:IKBKB 在胃癌细胞与NLRC5、NF-κB 存在相关作用关系,协同促进胃癌的发生和发展.
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编辑人员丨6小时前
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干扰素调节因子3促结直肠癌细胞增殖与侵袭相关探索
编辑人员丨6小时前
目的·分析结直肠癌中干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)表达水平与临床病理特征及患者预后的关系,观察IRF3过表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭能力的影响及其相关蛋白通路.方法·下载癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据,分析IRF3表达水平与恶性肿瘤患者(肾癌、结直肠癌、肝癌、前列腺癌)预后的关系.采用免疫组织化学法检测10例结直肠癌或肾癌患者的癌组织与癌旁正常组织切片中IRF3表达水平的差异.针对IRF3蛋白的C端残基位点进行改造,构建拟磷酸化IRF3-5D(396/398/402/404/405-D)高表达的HEK-293T细胞.分别在细胞培养12、24 h时,采用TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)抑制剂进行处理,并采用蛋白质印迹法检测细胞IRF3、p-IRF3(Ser386)蛋白表达水平.采用RNA测序技术探索IRF3-5D高表达与肿瘤相关蛋白表达水平的相关性.构建野生型IRF3(IRF3-WT)和IRF3-5D过表达的结直肠癌细胞CT26、COLON26,采用细胞计数法、细胞划痕试验和克隆形成试验检测细胞增殖及迁移能力.结果·TCGA数据分析提示癌组织中IRF3蛋白表达水平与患者的不良预后呈正相关.癌症患者病理组织免疫组织化学法显示,结直肠癌、肾癌组织中IRF3的表达水平显著上调,且蛋白表达集中于细胞核内.TBK1抑制剂分别在细胞培养12、24 h时间点作用后,HEK-293T细胞p-IRF3(Ser386)蛋白表达减弱.RNA测序和蛋白质印迹法结果显示,多个与癌症预后不良相关的蛋白[IRF9、细胞程序性死亡-配体1(programmed cell death 1-ligand 1,PD-L1)等]表达水平在IRF3-5D高表达的条件下显著上调.结直肠癌细胞中过表达IRF3-5D,可导致癌细胞的增殖、迁移能力显著上调.结论·结直肠癌中IRF3表达水平与患者不良预后呈正相关.IRF3-5D蛋白在结直肠癌细胞内高表达后,促进癌细胞恶性生物学行为.此外,IRF3-5D依赖于TBK1介导的IRF3活化激活通路,并上调多个肿瘤相关蛋白的表达水平.
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编辑人员丨6小时前
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BCOR突变通过PI3K/Akt/mTOR通路介导MDS细胞生物学行为改变的机制研究
编辑人员丨6小时前
目的 探讨 BCOR(BCL6 co-repressor)基因突变介导骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)细胞生物学行为的分子机制.方法 通过构建 BCORP483L过表达慢病毒以及空载体病毒,转染 K562 细胞,采用集落形成实验检测BCOR突变对细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期,Western blot 法和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法检测细胞焦亡和PI3K/Akt/mTOR通路分子水平,采用转录组测序技术(RNA-sequencing,RNA-Seq)检测分析 BCORP483L突变对下游靶基因表达的影响.结果 BCORP483L突变显著地抑制细胞克隆形成能力,促进细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞和细胞焦亡水平增加.RNA-Seq 分析发现,BCORP483L突变后 K562 内与细胞凋亡、G2M 周期检查点、慢性髓系白血病、细胞衰老、细胞内炎性反应相关的基因以及原癌基因 MYC 目标基因表达上调.Western blot法实验进一步证实,BCORP483L突变细胞的 PI3K/Akt/mTOR 通路明显受到抑制.结论 BCOR 突变导致细胞 PI3K/Akt/mTOR通路受到抑制,进而导致细胞凋亡增加、增殖受抑.BCOR突变能通过上调细胞衰老相关基因以及原癌基因 MYC 目标基因表达,提高细胞内炎性反应水平,从而促进 MDS疾病进展.
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编辑人员丨6小时前
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3D生物打印构建HGFs和HUVECs共培养体系促进HUVECs成血管
编辑人员丨6小时前
目的:构建人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养体系,促进HUVECs成血管.方法:取HGFs和HUVECs培养传代至3~5代进行实验.通过慢病毒转染用红色荧光蛋白标记HUVECs.构建HGFs和HUVECs 二维共培养体系,将HGFs与HUVECs以不同比例(4∶1、1∶1、1∶4)共培养,荧光显微镜下观察血管网络形成情况.配制5%甲基丙烯酰化明胶(GelMA)30胶,构建HGFs和HUVECs三维共培养体系,激光共聚焦显微镜下观察血管网络的形成情况.对HUVECs形成的血管网络进行定量分析.将HUVECs从三维共培养系统中分离出来,评估单独培养和共培养一定时间后HUVECs的增殖、迁移和小管形成效果以及相关血管生成基因的表达水平.结果:二维共培养时,当HGFs和HUVECs以比例1∶1共培养时血管网络形成的效果最佳.三维共培养时,HGFs可以促进HUVECs血管生成.HGFs和HUVECs共培养组的增殖、迁移和小管形成效果更好,相关血管生成基因的表达水平远远高于HUVECs单独三维培养组.结论:HGFs和HUVECs共培养能够引导和促进HUVECs出芽及迁移.
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编辑人员丨6小时前
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TGF-β超家族信号在复发性流产中的研究进展
编辑人员丨6小时前
复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)是一种复杂的妊娠并发症,在育龄夫妇中发生率逐年升高,严重危害全世界女性的生殖健康.RSA的病因复杂,目前研究认为与基因表达异常、免疫失调、内分泌改变等因素密切相关,而临床上尚缺乏 RSA早期诊断标志物和个体化的精准治疗策略.因此,探索 RSA发病的分子机制并寻找早期、高效的诊断和干预靶点具有重要的临床意义.研究认为 TGF-β超家族参与妊娠早期母体-胚胎界面多种细胞生物学活动,如细胞分化、增殖、黏附、侵袭和凋亡,与 RSA密切相关.本文对 TGF-β超家族相关分子和信号通路在 RSA 中影响滋养细胞侵袭和子宫内膜蜕膜化进行综述.
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编辑人员丨6小时前
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circ_0086414通过miR-498/PCK1轴对口腔鳞状细胞癌生物学行为的影响
编辑人员丨6小时前
目的 研究 circ_0086414 通过 miR-498/PCK1 轴对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinomas,OSCC)生物学行为的影响.方法 收集手术切除的OSCC组织及配对的癌旁组织27对,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测组织中 circ_0086414 和 PCK1 的表达.将 SJG-1 细胞分为 pcDNA 组、pcDNA circ_0086414 组、miR-498 NC 组、miR-498 mimic 组、OE-NC 组、OE-PCK1 组、miR-498 NC+pcDNA 组、miR-498 NC+pcDNA circ_0086414 组、miR-498 mimic+pcDNA 组、miR-498 mimic+pcDNA circ_0086414 组,细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK8)法检测SJG-1细胞增殖,流式细胞术检测SJG-1细胞凋亡,Transwell实验检测SJG-1细胞侵袭;蛋白免疫印迹(Western blot,WB)实验检测上皮间质转化情况,双荧光素酶报告基因检测circ_0086414和miR-498及miR-498和PCK1的关系.结果 与癌旁组织比较,OSCC组织中circ_0086414相对表达明显降低(P<0.001);与人正常口腔角质细胞HOK比较,人OSCC细胞系HEK293T、SJG-1、SCC-15、HSC-2中circ_0086414相对表达显著降低(P<0.001);与pcDNA组比较,pcDNAcirc_0086414组SJG-1细胞增殖能力明显降低,凋亡率明显升高,侵袭能力明显减少,N-cadherin表达水平显著减少,E-cadherin表达水平明显升高(均P<0.001);与miR-498 NC组比较,miR-498mimic组SJG-1细胞增殖能力明显升高,凋亡率显著降低,侵袭能力明显增加,N-cadherin表达水平显著增加,E-cadherin表达水平明显减少(均P<0.001);与miR-498 NC+pcDNA组比较,miR-498 NC+pcDNAcirc_0086414组SJG-1细胞增殖能力明显降低,凋亡率明显升高,侵袭能力明显降低,N-cadherin表达水平明显降低,E-cadherin表达水平明显升高,miR-498 mimic+pcDNA组SJG-1细胞增殖能力明显升高,凋亡率明显降低,细胞侵袭能力明显升高,N-cadherin表达水平明显升高,E-cadherin表达水平明显降低(均P<0.001),与 miR-498 mimic+pcDNA 组比较,miR-498 mimic+pcDNAcirc_0086414 组的 SJG-1 细胞增殖能力明显降低,凋亡率明显升高,侵袭能力明显降低,N-cadherin表达水平明显降低,E-cadherin的表达水平明显升高(均P<0.001);与OE-NC组比较,OE-PCK1组SJG-1细胞增殖能力明显降低,凋亡率明显升高,细胞侵袭能力明显减少,N-cadherin表达水平显著减少,E-cadherin表达水平明显升高,PCK1的相对表达量明显升高(均P<0.001).结论 circ_0086414在OSCC细胞和组织中的表达下调,过表达circ_0086414抑制OSCC细胞的恶性行为.通过调控miR-498/PCK1轴刺激细胞凋亡,为探索OSCC诊断和治疗的生物标志物提供有意义的实验依据,为OSCC的治疗提供新的诊疗思路.
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编辑人员丨6小时前