-
circRNA CCND1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响
编辑人员丨2天前
目的 探讨circRNA CCND1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响.方法 采用荧光原位杂交(FISH)实验及实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circRNA CCND1在HepG2细胞及L02细胞中的表达情况;进一步干扰及过表达circRNA CCND1后,通过qRT-PCR检测circRNA CCND1在HepG2细胞中的表达情况,CCK-8法和EDU法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移情况.结果 HepG2细胞circRNA CCND1相对表达量较LO2细胞高(P<0.05).Si-circRNA CCND1组circRNA CCND1相对表达量较Control组和Si-NC组下降(P<0.05),Oe-circRNA CCND1组较Control组和Oe-NC组升高(P<0.05).各组细胞培养0、24、48、72和96 h后细胞增殖活性比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);②各组细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);③各组细胞增殖活性变化趋势比较,差异有统计学意义(P<0.05).与Control组及Si-NC组比较,Si-circRNA CCND1组细胞凋亡率升高(P<0.05),G0/G1期比值升高(P<0.05),S及G2/M期比值下降(P<0.05);与Control组及Oe-NC组比较,Oe-circRNA CCND1组细胞凋亡率下降(P<0.05),G0/G1期比值下降(P<0.05),S及G2/M期比值升高(P<0.05).Si-circRNA CCND1组细胞侵袭数、细胞迁移数较Control组、Si-NC组少(P<0.05),Oe-circRNA CCND1组较Control组及Oe-NC组多(P<0.05).结论 circRNA CCND1能够促进人肝癌细胞HepG2细胞增殖、侵袭和迁移,抑制细胞凋亡.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2天前
-
基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路研究当归醇提物对多囊卵巢综合征大鼠的保护作用
编辑人员丨2天前
目的 使用来曲唑联合高脂饮食建立多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)大鼠模型,探讨当归醇提物(ethanol extract of Angelicae Sinensis Radix,EEA)对 PCOS大鼠的保护作用及其作用机制.方法 来曲唑联合高脂饮食诱导雌性SD大鼠建立PCOS模型,并用EEA干预.阴道涂片染色、HE染色、酶联免疫吸附法(ELISA)和生化指标检测评价EEA对PCOS大鼠的治疗作用,并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测EEA对Keap1/Nrf2/HO-1信号通路的影响.结果 阴道涂片和HE染色结果表明,EEA改善了 PCOS大鼠动情周期紊乱和卵巢组织病变,ELISA和生化指标检测结果表明EEA可以调节激素紊乱,改善血脂异常;且在模型组中Keap1蛋白和mRNA表达明显上调,Nrf2和HO-1蛋白和mRNA表达明显下调而经过EEA治疗后Keap1蛋白和mRNA表达明显下调,Nrf2和HO-1蛋白和mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01).结论 EEA可以减轻大鼠PCOS,其机制可能是通过促进Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,从而抑制氧化应激.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2天前
-
BCOR突变通过PI3K/Akt/mTOR通路介导MDS细胞生物学行为改变的机制研究
编辑人员丨2天前
目的 探讨 BCOR(BCL6 co-repressor)基因突变介导骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)细胞生物学行为的分子机制.方法 通过构建 BCORP483L过表达慢病毒以及空载体病毒,转染 K562 细胞,采用集落形成实验检测BCOR突变对细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期,Western blot 法和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法检测细胞焦亡和PI3K/Akt/mTOR通路分子水平,采用转录组测序技术(RNA-sequencing,RNA-Seq)检测分析 BCORP483L突变对下游靶基因表达的影响.结果 BCORP483L突变显著地抑制细胞克隆形成能力,促进细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞和细胞焦亡水平增加.RNA-Seq 分析发现,BCORP483L突变后 K562 内与细胞凋亡、G2M 周期检查点、慢性髓系白血病、细胞衰老、细胞内炎性反应相关的基因以及原癌基因 MYC 目标基因表达上调.Western blot法实验进一步证实,BCORP483L突变细胞的 PI3K/Akt/mTOR 通路明显受到抑制.结论 BCOR 突变导致细胞 PI3K/Akt/mTOR通路受到抑制,进而导致细胞凋亡增加、增殖受抑.BCOR突变能通过上调细胞衰老相关基因以及原癌基因 MYC 目标基因表达,提高细胞内炎性反应水平,从而促进 MDS疾病进展.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2天前
-
生物材料中铅快速检测方法的研究进展
编辑人员丨2天前
实验室常使用原子吸收分光光度法、原子吸收光谱法、原子荧光光谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、生物传感器法等测定生物材料中铅的含量,这些方法大多操作烦琐、检测周期长,也有的方法操作条件不稳定、对实验要求高,难以满足应急检测工作的需求.快速检测方法具有操作简便、快速、仪器便于携带的特点,适合突发事件中疑似铅中毒人员的初筛检测及污染现场的应急处理.本文对生物样品中铅的快速检测方法的研究进展进行综述.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2天前
-
双氢青蒿素通过调控MAPK/PI3K/Akt信号通路抗结直肠癌作用研究
编辑人员丨2天前
目的:探讨双氢青蒿素(DHA)在体内对人结直肠癌(RKO)细胞的抗癌活性及体外机制.方法:将40只SPF级雄性裸鼠建立RKO荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、顺铂组及DHA高剂量(200 mg/kg)、低剂量(100 mg/kg)组,每组10只;对比各组裸鼠体质量、肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率、血清肿瘤坏死因子(TNF-α)水平等;苏木素-伊红(HE)染色观察各组裸鼠肿瘤组织病理学变化;噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度(25、50、100 μmol/L)DHA干预0、24、48、72 h内对RKO细胞增殖的影响;流式细胞仪、Hoechst 33258检测(0、50、95、150 μmol/L)DHA干预48 h后对RKO细胞周期和细胞凋亡的影响;划痕实验观察95 μmol/L DHA干预对细胞迁移能力的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测DHA对细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达水平的影响;蛋白质印迹法(Western blot)检测DHA对细胞内Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax以及p38-丝裂原活化蛋白激酶(p38-MAPK)、p-p38-MAPK、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、基质金属蛋白酶(MMP-9)等表达水平的影响.结果:200 mg/kg DHA显著降低肿瘤体积和质量,降低血清TNF-α水平,抑瘤率为41.45%;DHA可随浓度的增加而增强对RKO细胞增殖的抑制作用;(50、95、150 μmol/L)DHA阻滞RKO细胞周期在G2/M期,且促进RKO细胞凋亡作用随DHA浓度增加而增强;95 μmoI/L DHA干预12、24 h后可显著降低RKO细胞迁移能力(P<0.01);95 μmol/L DHA可显著上调RKO细胞内Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平(P<0.01)以及Bax/Bcl-2 mRNA表达比值(P<0.05);95 μmol/L DHA可增加RKO细胞内剪切型Caspase-9(cleaved-Caspase-9)/Caspase-9、Bax/Bcl-2 蛋白表达(P<0.01),同时降低 MMP-9、p-P38 MAPK、p-PI3K、p-Akt及Akt蛋白表达水平(P<0.01).结论:DHA有较好的抑制结直肠癌作用,其机制可能为抑制MAPK/PI3K/Akt信号通路,触发RKO细胞内源性凋亡,阻止其增殖与迁移.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2天前
-
GM130通过14-3-3ζ对卵巢癌细胞增殖的影响及机制研究
编辑人员丨2天前
目的 探讨高尔基体基质蛋白 130(GM130)通过 14-3-3ζ对卵巢癌细胞增殖的影响及可能机制.方法 采用免疫组化法检测在 20 例正常卵巢上皮组织和 42 例卵巢上皮恶性肿瘤中GM130和 14-3-3ζ的表达,分析二者相关性.采用Western blot和RT-PCR法检测卵巢癌SKOV3/A2780 细胞株GM130 和 14-3-3ζ蛋白及其mRNA表达情况,筛选出高表达细胞株.采用免疫荧光染色法检测GM130与 14-3-3ζ在卵巢癌细胞中的共表达情况.将设计好的重组表达质粒shRNA-GM130 片段稳转进入卵巢癌细胞中,采用Western blot和RT-PCR筛选出降低GM130 的最佳片段.细胞分为三组:空白组(WT)、对照组(NC)、低表达组(313),采用CCK法和流式细胞术分别检测各组卵巢癌细胞生殖情况及周期变化情况,采用 Western blot 法检测各组 14-3-3ζ、GRASP65、P115 及增殖相关蛋白表达水平.结果 GM130 和 14-3-3ζ在卵巢恶性肿瘤组织中的表达水平高于正常卵巢组织(P<0.001).在卵巢恶性肿瘤组织中,GM130 和 14-3-3ζ呈正相关关系(r=0.873,P<0.001).GM130 蛋白及其mRNA在SKOV3 细胞中的表达量高于A2780 细胞(P<0.05),14-3-3ζ蛋白及其mRNA在SKOV3 细胞和A2780 细胞中比较差异无统计学意义(P>0.05).后续实验选用SKOV3 细胞.免疫荧光共定位染色显示,GM130 与 14-3-3ζ主要在胞质表达,前者近核膜部分呈堆叠样表达量较高,后者胞核中表达较少,二者可能存在共定位关系.转染 313 组片段后,对GM130 的抑制效果最好.转染质粒 313 组细胞增殖能力降低,细胞在G1 期阻滞的数量增多,G2 期阻滞数量减少,S期阻滞的细胞数量稍减少,GM130、14-3-3ζ、P115、Cyclin A、Cdc25A蛋白相对表达水平降低,P21 蛋白相对表达水平升高(P<0.05).结论 抑制GM130 可抑制卵巢癌细胞增殖,其机制可能与抑制 14-3-3ζ表达,影响卵巢癌细胞周期有关.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2天前
-
基于DNA甲基化探讨电针改善痰湿型PCOS患者胰岛素抵抗及IVF-ET妊娠结局的作用机制
编辑人员丨2天前
目的 基于INSR基因甲基化以及胰岛素代谢信号通路探讨电针改善痰湿型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者胰岛素抵抗及体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)妊娠结局的作用机制.方法 采用前瞻性随机对照研究,纳入2020年1月至2022年12月期间于山东中医药大学附属医院生殖与遗传科就诊拟行IVF-ET助孕的痰湿型PCOS患者100例,采用随机数字表法均分为电针治疗(试验组)50例,伪针刺激(对照组)50例,采用固定拮抗剂方案促排卵,两组患者分别于取卵前1个月经周期经净始予电针治疗和伪针刺激,每周2次,直至扳机日.收集颗粒细胞.观察比较两组患者痰湿证候积分、胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance,HOMA-IR)、促性腺激素(gonadotropin,Gn)的用量及使用时间、获卵数、受精率、优质胚胎数、临床妊娠率、流产率和活产率.采用亚硫酸氢盐扩增子测序测定颗粒细胞中INSR基因启动子区甲基化水平的变化;实时荧光定量PCR和Western blotting测定INSR、PI3K、GLUT4 mRNA和蛋白的含量.结果 试验组治疗后痰湿证候积分(15.23±1.57)、HOMA-IR(2.82±0.39)较治疗前(21.65±3.61、3.34±0.56)明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.001,P=0.014).试验组治疗前后证候积分差值(-5.76±2.86)、HOMA-IR差值(-2.67±0.06)的绝对值明显大于对照组(-1.64±0.84、-0.11±0.04),差异均具有统计学意义(P<0.001,P=0.021).试验组患者Gn用量[(2 119.53±338.28)U]及使用时间[(10.16±1.25)d]较对照组[(2 405.65±434.20)U、(10.94±1.46)d]明显减少(P=0.005,P=0.026),优质胚胎数[(3.54±1.04)枚]较对照组[(2.66±1.87)枚]明显增多(P=0.014),受精率[66.91%(552/825)]、临床妊娠率[63.27%(31/49)]和活产率[51.02%(25/49)]较对照组[60.20%(475/789)、41.67%(20/48)、31.25%(15/48)]明显升高,差异均具有统计学意义(P=0.005,P=0.033,P=0.048);两组患者的获卵数、早期流产率差异均无统计学意义(均P>0.05).试验组患者颗粒细胞中INSR基因启动子区38、47、56、59、94、143位点甲基化水平较对照组明显降低,差异均具有统计学意义(均P<0.05),两组患者71、74、154、156、162位点甲基化水平差异均无统计学意义(均P>0.05).与对照组相比,试验组患者卵巢颗粒细胞中INSR、PI3K、GLUT4基因mRNA和蛋白表达均上调,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 电针可能是通过降低痰湿型PCOS患者INSR基因启动子区甲基化水平,使INSR、PI3K、GLUT4基因表达上调,从而改善患者胰岛素抵抗,提高其胚胎的质量,最终改善妊娠结局.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2天前
-
鳖甲煎丸调控EGFR/MAPK/ERK通路对MHCC-97H肝癌细胞的影响
编辑人员丨1周前
目的 探讨鳖甲煎丸通过miR-885-5p对表皮生长因子受体(EGFR)/丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的靶向调控对MHCC-97H肝癌细胞的影响及作用机制.方法 SPF级SD大鼠10只随意分为空白组和鳖甲煎丸(1.1 g/kg)组,制备空白及鳖甲煎丸含药血清.取对数生长期的MHCC-97H细胞,分为模型组、不同质量分数(5%、10%、15%、20%)空白血清梯度组和鳖甲煎丸含药血清梯度组,以及不含细胞的空白组.CCK-8法检测细胞增殖,筛选含药血清最佳干预时间及质量分数.将MHCC-97H细胞分为空白对照组(不做任何处理)、鳖甲煎丸含药血清组(20%鳖甲煎丸含药血清)、miR-885-5p mimics组(转染miR-885-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-885-5p阴性对照物)、鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组(20%鳖甲煎丸含药血清和转染miR-885-5p mimics),各组细胞均培养72 h.采用双荧光素酶报告实验验证miR-885-5p与EGFR的靶向关系.CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,Annexin V-APC/PI双染色法检测细胞凋亡水平,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-885-5p、EGFR、MAPK的激酶(MEK)、ERK1、ERK2 mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测EGFR、磷酸化的EGFR(p-EGFR)、MEK、磷酸化的MEK(p-MEK)、ERK1、ERK2、磷酸化的ERK1(p-ERK1)、磷酸化的ERK2(p-ERK2)、基质金属蛋白酶1(MMP1)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达;通过皮下注射法建立裸鼠MHCC-97H肝癌细胞皮下瘤模型,观察不同剂量鳖甲煎丸(0.55、1.1、2.2g/kg)对裸鼠肝癌皮下瘤的抑制效果.结果 筛选出鳖甲煎丸含药血清最佳干预质量分数及时间为20%、72 h,同时,双荧光素酶报告实验显示,miR-885-5p可以直接靶向结合EGFR;各项实验报告显示空白对照组和miR-NC组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清组、miR-885-5p mimics组和鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组MHCC-97H肝癌细胞增殖率明显降低(P<0.01),迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05,P<0.01),同时,与细胞增殖、侵袭密切相关的蛋白CyclinD1和MMP1的蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),晚期凋亡率和总凋亡率均明显升高,促进细胞凋亡(P<0.01);鳖甲煎丸含药血清组、miR-885-5p mimics组和鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组明显上调miR-885-5p mRNA(P<0.01),抑制EGFR、MEK、ERK1、ERK2 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),抑制EGFR、MEK、ERK1、ERK2磷酸化激活(P<0.01),其中,鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组效果最好(P<0.05,P<0.01).裸鼠肝癌皮下瘤模型验证了鳖甲煎丸可抑制裸鼠肝癌皮下瘤生长.结论 鳖甲煎丸可促进MHCC-97H肝癌细胞凋亡,抑制其增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能和通过miR-885-5p靶向调控EGFR/MAPK/ERK信号通路有关.
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
lnc85通过调节CDC42的表达促进肝癌细胞增殖
编辑人员丨1周前
目的:探讨长链非编码RNA RP11-85G21.1(lnc85)对肝癌细胞增殖的作用及可能机制.方法:RNA全转录组测序结合实时荧光定量PCR(RT-qPCR)筛选验证肝癌中差异高表达的lnc85;利用lnc85过表达/空载慢病毒感染细胞,构建lnc85过表达肝癌细胞株(OE)和对照细胞(control);RNA下拉实验(RNA pull-down)联合质谱筛选lnc85互作蛋白并进行蛋白免疫印迹(western blotting)验证;MTT实验、细胞克隆形成实验分析lnc85过表达对细胞增殖的影响;生物信息学分析lnc85互作蛋白表达水平及对生存的影响.结果:RNA全转录组测序发现,与对照相比,lnc85在肝癌患者血浆外泌体中明显高表达(P<0.001),RT-qPCR验证lnc85在3种肝癌细胞中显著升高(P<0.01,P<0.001);RNA pull-down联合质谱分析发现CDC42为lnc85的互作蛋白,RT-qPCR证实CDC42水平在肝癌细胞显著升高(P<0.001);且lnc85过表达的肝癌细胞中,CDC42蛋白水平显著上调(P<0.001),细胞增殖能力显著增强(P<0.01);生物信息学分析发现,肝癌患者CDC42的表达水平显著高于健康对照(P<0.001),并随着肿瘤等级的增高而增高;高表达CDC42的肝癌患者预后不良(P<0.001).结论:lnc85在肝癌中高表达,可能通过靶向调节CDC42的表达促进肝癌细胞的增殖.
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
健康女性月经前后太冲及太溪两穴红外光谱分析
编辑人员丨1周前
目的:观察月经前后太冲、太溪两穴及对照点的红外辐射变化,探究生理性月经相关脏腑原穴的红外辐射特性.方法:穴位红外辐射光谱检测系统检测32例成年健康女性月经前、月经期、月经后三个时期太冲、太溪及两穴旁开1 cm处对照点在波长为1.50-18.00 μm范围内的红外辐射光谱,进行数据挖掘与分析.结果:月经前、月经期和月经后双侧太冲、太溪及其对照点的红外光谱形态基本一致,红外光谱波长位于11.25 μm处;经前右太溪红外辐射总强度显著低于对照点(P<0.05),左太冲红外辐射总强度显著低于对照点(P<0.01);月经期和月经后,双侧太溪红外辐射总强度均显著低于对照点(P<0.05);穴位与对照点红外辐射强度有差异的波长点集中于7.50-14.25 μm的主波峰和15.00-17.25 μm的次波峰处.结论:月经不同时期太冲、太溪两穴红外辐射光谱具有明显的穴位特异性,主要体现在红外辐射强度及红外辐射波长方面.
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前