-
重复经颅磁刺激联合胆碱酯酶抑制剂对阿尔茨海默病认知障碍的影响及机制
编辑人员丨2023/10/21
目的 探究重复经颅磁刺激(rTMS)联合胆碱酯酶抑制剂对阿尔茨海默病认知障碍患者的影响及机制.方法 119 例阿尔茨海默病认知障碍患者分为单纯用药组59 例、联合治疗组60 例,单纯用药组使用胆碱酯酶抑制剂治疗,联合治疗组使用rTMS联合胆碱酯酶抑制剂治疗.酶联免疫吸附试验检测患者炎症因子水平、β淀粉样蛋白多肽(Aβ)1~42 蛋白、血清缓激肽(BK)、磷酸化Tau蛋白、脑源性神经营养因子(BDNF)水平;采用免疫比浊法检测血清铜蓝蛋白(CER)水平;使用简易精神状态检查(MMSE)量表、蒙特利尔认知评估(MoCA)量表、痴呆量表(BBS)等评估两组神经、认知、生活能力,对比两组治疗效果.结果 治疗后,联合治疗组肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6 水平明显低于单纯用药组(P<0.05).治疗后,联合治疗组MMSE、MoCA评分明显高于单纯用药组,Blessed-Roth评分明显低于单纯用药组,Aβ1~42 蛋白、BK、磷酸化Tau蛋白水平明显低于单纯用药组,BDNF、CER水平明显高于单纯用药组(均P<0.05).联合治疗组治疗有效率明显高于单纯用药组(P<0.05).结论 使用rTMS联合胆碱酯酶抑制剂对阿尔茨海默病认知障碍患者进行治疗,患者神经功能、认知功能、日常生活能力得到提升,炎症反应降低、从而改善阿尔茨海默病认知障碍的病程进展,治疗效果显著.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/10/21
-
芍药苷调控RhoA/ROCK2通路对阿尔茨海默病大鼠认知功能障碍的影响
编辑人员丨2023/8/12
目的 探索芍药苷调控Ras同源基因家族成员(Rho)A/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)2 通路对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知功能障碍的影响.方法 取SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芍药苷(20 mg/kg)组、Rhosin(RhoA抑制剂,40 mg/kg)组、芍药苷(20 mg/kg)+Rhosin(40 mg/kg)组,除假手术组外,向其余各组大鼠海马CA1 区注入β-淀粉样蛋白(Aβ)1~42多肽诱导建立AD模型,以药物分组干预后,通过Morris水迷宫实验测定各组大鼠逃避潜伏期,以评测其认知功能;通过苏木素-伊红(HE)染色检测各组大鼠海马组织病理形态变化;通过试剂盒检测海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量及血清致炎因子白细胞介素(IL)-6 和干扰素(IFN)-γ含量;通过Western印迹实验检测各组海马组织RhoA/ROCK2 通路蛋白RhoA、ROCK2 的表达水平.结果 与假手术组相比,模型组神经元细胞结构萎缩,变性死亡,排列紊乱疏松,数目明显减少,海马组织呈现明显损伤,海马组织SOD含量显著降低(P<0.05),逃避潜伏期、海马组织ROS及MDA含量、血清IL-6 和IFN-γ含量、海马组织RhoA及ROCK2 蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,药物干预组海马组织病理损伤均减轻,海马组织SOD含量均显著升高(P<0.05),逃避潜伏期、海马组织ROS及MDA含量、血清IL-6 和IFN-γ含量、海马组织RhoA及ROCK2 蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与芍药苷组、Rhosin组分别相比,芍药苷+Rhosin组大鼠海马组织病理损伤均减轻,海马组织SOD含量均显著升高(P<0.05),逃避潜伏期、海马组织ROS及MDA含量、血清IL-6 和IFN-γ含量、海马组织 RhoA 及 ROCK2 蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).结论 芍药苷可能通过抑制 RhoA/ROCK2 通路激活,减弱AD大鼠氧化应激与炎症反应,缓解其海马组织病理损伤,提高大鼠学习记忆能力,改善其认知功能障碍.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/12
-
地佐辛对β淀粉样多肽处理的原代大鼠皮质星形胶质细胞的保护作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨地佐辛对接受β淀粉样多肽处理的原代大鼠皮质星形胶质细胞的影响以及与超极化激活的环核苷酸门控(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated,HCN)通道的关系.方法 出生24 h内的SD大鼠,体外培养皮质星形胶质细胞并接种于培养瓶或35 mm培养皿,采用随机数字表法分为七组(n=5).ZA组和CDA组预先24 h分别向培养基中加入HCN通道激动剂7-CH-cAMP(30μmol/L)和阻断剂ZD7288(30μmol/L),随后DA1、DA2、DA3和CDA组分别向培养基中加入地佐辛10-7、10-6、10 5和10-6 mmol/L孵育24 h,最后A、DA1、DA2、DA3、ZA和CDA组分别向培养基中加入Aβ1-42(15 μmol/L)孵育24 h作为β淀粉样多肽处理,而对照组(C组)细胞正常培养.按照各组处理收集星形胶质细胞,采用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞法测定细胞凋亡率,乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞损伤率,ELISA法测定细胞前炎性因子IL-1β浓度,Westem blot法测定细胞内Cu/Zn-SOD和Mn-SOD蛋白含量.结果 与C组比较,A组星形胶质细胞凋亡率、损伤率和IL-1β浓度明显升高(P<0.05);与A组比较,DA2、DA3和ZA组星形胶质细胞凋亡率、损伤率和IL-1β浓度明显下降,Cu/Zn-SOD和Mn-SOD蛋白含量明显升高(P<0.05);与CDA组比较,DA2、DA3和ZA组星形胶质细胞凋亡率、损伤率和IL-1β浓度明显下降,Cu/Zn-SOD和Mn-SOD蛋白含量明显升高(P<0.05).结论 地佐辛抑制β淀粉样多肽诱发的原代大鼠皮质星形胶质细胞凋亡的机制可能与HCN通道开放被抑制后,抗氧化应激相关蛋白Cu/Zn-SOD和Mn-SOD含量增加相关.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
ThT结合试验法检测Aβ42聚集情况的条件探讨
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨硫黄素(ThT)结合试验法检测β-淀粉样多肽l~42(Aβ42)聚集情况的条件.方法 Aβ42经六氟异丙醇(HFIP)单体化处理后,进行复溶,然后将Aβ42与ThT溶于缓冲体系,一定温度下于96孔板中共孵育不同时间,酶标仪检测450 nm激发下485 nm的荧光强度.分析Aβ42不同的浓度,孵育温度,96孔板类型,缓冲液种类以及复溶方式对ThT结合试验法测定Aβ42聚集情况的影响.结果 在ThT结合试验法中,Aβ42孵育浓度与荧光值成线性正比关系,孵育温度对此正比关系无较大影响;选用半透明板及PBS缓冲体系与其它条件相比,此线性正比关系更稳定;以最终NH3·H2O 20 mmol/L的浓度加入1% NH3·H2O对单体化处理后的Aβ42复溶,并进行过滤的方法,与其它方法相比,寡聚体更少,以最终2% v/v (DMSO/PBS)的比例加入二甲基亚砜(DMSO)进行复溶的方法,寡聚体较多,且Aβ42更快更多地发生了聚集;而利用ThT结合试验法研究Aβ42由单体到聚合体进程变化的动力学时,使用20 mmol/L NH3·H2O复溶方式进行复溶,观察到的动力学趋势过程更明显直观.结论 不同条件对ThT结合试验法检测Aβ42聚集情况的结果影响较大,条件不同结果不同,实验中应根据实验目的及具体情况来选择不同的条件.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
黑逍遥散对AD模型小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β,NEP,IDE表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究黑逍遥散对阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD)小鼠海马区β淀粉样多肽1-42(β-amyloid 1-42peptide,Aβ1-42),糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β),脑啡肽酶(neprilysin,NEP),胰岛素抵抗酶(insulin-degrading enzyme,IDE)表达的影响.方法:42只APP/PSI双转基因小鼠称体质量后,按随机原则分为4组,分别为模型组,阳性药组(盐酸多奈哌齐,3.25 mg· kg-1),黑逍遥散高、低剂量组(6,3 g·kg-1).10只同月龄、同种系的野生型C57BL/6J小鼠为正常组.连续灌胃12周后,Morris水迷宫予以行为学检测,苏木素-伊红(HE)染色观察海马神经元的形态改变,采用免疫组化技术分别检测小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β,NEP,IDE蛋白的表达.结果:治疗3个月后,与正常组比较,AD模型组小鼠,逃避潜伏期均延长,跨原平台次数减少(P<0.01),小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β蛋白阳性表达显著增强,NEP与IDE蛋白阳性表达显著减弱(P<0.01),HE染色显示AD模型小鼠海马神经细胞损伤严重;与模型组比较,用药各组小鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加(P<0.05,P<0.01),小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β蛋白阳性表达显著减弱,NEP与IDE蛋白阳性表达显著增强(P <0.05,P<0.01),HE染色显示各治疗组小鼠海马神经细胞损伤减轻.结论:黑逍遥散能够显著改善AD小鼠的学习记忆能力,可能与调节Aβ在海马区的异常沉积和降解作用等方面来减轻AD小鼠认知能力损伤有关.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
水鬼蕉新碱A的急性毒性实验研究及在防治阿尔茨海默病中的应用
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究水鬼蕉新碱A的急性毒性及防治阿尔茨海默病的一般药效学机制.方法:将60只昆明小鼠随机分为6组:空白对照组和水鬼蕉新碱A不同浓度组(645.6,512.9,407.4,323.6,257.0 mg·kg-1),每组10只,观察各组小鼠的毒性症状及死亡情况.将60只ICR小鼠随机分为5组:空白对照组、模型组、水鬼蕉新碱A高(10 mg·kg-1)、中(5 mg·kg-1)、低(2.5 mg·kg-1)剂量组,每组12只.采用Morris水迷宫检测各组小鼠的学习记忆能力,八臂迷宫法检测小鼠的空间记忆能力,ELISA法检测脑β-淀粉样多肽-42(Aβ-42)蛋白的含量.结果:水鬼蕉新碱A的半数致死量(LD50)为380.2 mg·kg-1,LD50的95%可信限为341.2~423.7 mg·kg-1.与模型组相比,水鬼蕉新碱A高、中剂量组小鼠的逃避潜伏期显著缩短,穿台次数显著延长,工作记忆错误次数显著减少,Aβ-42含量显著降低(P<0.05);水鬼蕉新碱A高剂量组小鼠的参考记忆错误次数和探究时间显著减少(P<0.05或P<0.01).结论:水鬼蕉新碱A无明显不良反应,可有效改善阿尔茨海默病小鼠的记忆效果,可通过下调Aβ-42达到防治该病的目的.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
黄精丸对阿尔茨海默病大鼠大脑的抗氧化作用及Aβ1-42,APP蛋白表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨黄精丸药方(Huangjingwan,HW)对阿尔茨海默病(AD)大鼠大脑的抗氧化作用及β-淀粉样多肽1-42(Aβ1-42),淀粉样前体蛋白(APP)表达的影响.方法:SD大鼠随机分成正常组,假手术组,AD模型组,HW低、中、高剂量组(相当药丸剂量1,3,9 g·kg-1 ·d-1组).给大鼠腹腔注射1.25% D-半乳糖液(120 mg·kg-1 ·d-1,连续6周)后,再右侧脑室一次性注射Aβ1-42 10 μg,制作大鼠AD模型;造模2周后各药物组大鼠灌胃相应剂量试验药物,假手术组及AD模型组大鼠灌胃给生理盐水1 mL,每天1次.灌胃持续8周.采用跳台实验评价各大鼠的学习记忆能力;体质量10%的负荷游泳实验测试各大鼠的体能耐力变化;比色法检测各大鼠大脑组织超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽还原酶(GR),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)抗氧化酶系活性,谷胱甘肽(GSH)与丙二醛(MDA)含量变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各大鼠大脑组织白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),Aβ1-42与APP蛋白含量变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各大鼠大脑APP蛋白表达变化.结果:与正常组比较,AD模型组大鼠表现出明显的痴呆状态,少动易呆卧,学习反应时间延长,学习记忆错误次数显著增多,体能衰减明显,大脑内抗氧化酶(SOD,GR,GSH-Px)活性及抗炎因子GSH水平显著降低,炎症因子MDA,IL-1β,TNF-α水平显著升高,Aβ1-42蛋白含量显著升高,APP蛋白含量显著下降(P<0.01).与AD模型组比较,HW低、中、高剂量均可改善AD大鼠的痴呆症状,提高学习记忆成绩,改善机体虚弱、提高体能,升高大脑内SOD,GR,GSH-Px活性及抗炎因子GSH水平,降低MDA,IL-1β,TNF-α水平,并能降低大脑内Aβ1-42及升高APP蛋白水平(P <0.05,P<0.01);且1~9 g·kg-1 ·d-1剂量范围内的HW,随剂量增加,药效作用越明显.结论:HW有防治AD的功能,这一作用与HW可以增强脑内抗氧化系统功能、降低神经炎症反应、降低氧化应激引发的Aβ1-42沉积、维持APP蛋白表达水平等有关.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
远志皂苷改善APP/PS1转基因小鼠认知功能损伤的机制研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨远志皂苷对阿尔兹海默病(AD)模型小鼠认知损伤的改善作用及可能的机制.方法 6月龄APP/PS1转基因小鼠18只,随机均分为远志皂苷治疗组(连续8周每天腹腔注射8 mg/kg远志皂苷)与生理盐水对照组(连续8周每天腹腔注射等体积生理盐水),同时选取同月龄野生型小鼠9只作为野生型对照组(连续8周每天腹腔注射等体积生理盐水).8周后采用Morris水迷宫法检测各组小鼠的学习记忆水平,免疫荧光法检测小鼠脑内海马区突触后致密蛋白-95(PSD-95)的表达,硫黄素染色检测海马区老年斑水平,ELISA检测海马区β-淀粉样多肽(Aβ42)含量,Western blotting分析海马区PSD-95表达水平以及tau蛋白Ser231、Ser214、Ser396位点的磷酸化水平.结果 在Morris水迷宫实验中,生理盐水对照组小鼠的逃避潜伏期自第2天起较野生型对照组小鼠明显延长(P<0.05);远志皂苷治疗组小鼠的逃避潜伏期自第3天起较生理盐水对照组明显缩短(P<0.05);与野生型对照组相比,远志皂苷治疗组小鼠的逃避潜伏期在前4天无明显改变(P>0.05),在第5天时逃避潜伏期明显延长(P<0.05).空间搜索实验发现,生理盐水对照组小鼠定位目标位置花费时间较野生型对照组明显延长(P<0.05);远志皂苷治疗组小鼠定位目标位置时间较生理盐水对照组明显减少(P<0.05),而与野生型对照组相比则无明显改变(P>0.05).生理盐水对照组小鼠穿越平台的次数较野生型对照组明显减少(P<0.05);远志皂苷治疗组小鼠穿越平台的次数大于生理盐水对照组(P<0.05),而与野生型对照组比较则无明显改变(P>0.05).生理盐水对照组小鼠海马PSD-95相对含量低于野生型对照组(P<0.05);远志皂苷治疗组小鼠海马PSD-95相对含量高于生理盐水对照组(P<0.05),但与野生型对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).与生理盐水对照组相比,远志皂苷治疗组小鼠海马区内老年斑数量明显减少(P<0.05).ELISA检测结果显示,与生理盐水对照组相比,远志皂苷治疗组小鼠海马区内Aβ42含量明显减少[(2.859±0.864)ng/mg vs.(5.154±0.735)ng/mg],差异有统计学意义(P<0.05).生理盐水对照组小鼠海马tau蛋白Ser231、Ser214、Ser396位点磷酸化水平高于野生型对照组(0.947±0.131 vs.0.540±0.076、0.832±0.161 vs.0.305±0.088、0.819±0.053 vs.0.338±0.052),差异均有统计学意义(P<0.05);远志皂苷治疗组小鼠脑组织tau蛋白Ser231、Ser214、Ser396位点磷酸化水平低于生理盐水对照组(0.568±0.051 vs.0.947±0.131、0.472±0.094 vs.0.832±0.161、0.452±0.071 vs.0.819±0.053),差异均有统计学意义(P<0.05);远志皂苷治疗组小鼠海马tau蛋白Ser214、Ser396位点磷酸化水平高于野生型对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 远志皂苷可上调AD小鼠PSD-95表达并改善认知损伤,其途径可能是通过减少Aβ沉积及tau蛋白的过度磷酸化来实现的.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/5
-
黑逍遥散干预APP/PSI双转基因小鼠海马区Aβ降解相关基因和蛋白表达效应的研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 观察黑逍遥散对阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD)小鼠海马区β淀粉样蛋白前体(Amyloid beta precursorprotein,APP)、β淀粉样多肽1-42(β-amyloid1-42 Peptide,Aβ1-42)、糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、脑啡肽酶(Neprilysin,NEP)、胰岛素抵抗酶(Insulin-degrading enzyme,IDE)基因和蛋白表达的影响.方法 42只APP/PS1双转基因雄性小鼠称重后,按随机原则分为模型组(10只)、阳性对照组(10只)、黑逍遥散高剂量组(11只)、黑逍遥散低剂量组(11只).10只同月龄、同种系的野生型C57BL/6雄性小鼠为空白组.连续灌胃3个月后,采用Moms水迷宫进行行为学检测,采用qRT-PCR和Western Bloting分别检测小鼠海马区APP(Aβ1-42)、GSK-3β、NEP、IDE基因和蛋白的表达.结果 干预3个月后,小鼠逃避潜伏期:模型组较空白组显著延长,用药各组较模型组显著缩短,差异具有统计学意义(P<0.01);小鼠跨原平台次数:模型组较空白组显著减少,用药各组较模型组显著增多,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05).与空白组相比,模型组小鼠海马区APP基因和Aβ1-42蛋白,以及GSK-3β基因和蛋白相对表达量显著升高,NEP与IDE基因和蛋白相对表达量显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05);与模型组相比,各用药组小鼠海马区APP基因和Aβ1-42蛋白以及GSK-3β基因和蛋白相对表达量显著降低,NEP与IDE基因和蛋白相对表达量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05).结论 黑逍遥可通过调节Aβ在海马区的异常代谢等作用,减缓AD小鼠认知能力的损伤.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/5
-
截短型金属蛋白酶ADAM10对Aβ42的水解作用
编辑人员丨2023/8/5
目的:解整合素样金属蛋白酶1 0(disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10,ADAM 10)是一种重要的膜锚定金属蛋白酶,参与多个重要生理过程,同某些癌症和神经退行性疾病有重要联系.拟通过毕赤酵母表达系统表达ADAM 10的金属蛋白酶结构域,探究ADAM 10对β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ42)的作用.方法:首先通过数据库检索的方式获得所需序列,将密码子进行酵母偏好性优化后,插入至pPIC9k分泌表达载体上.通过电转化、阳性筛选、多拷贝子筛选等过程后,用蛋白印迹(WesternBlot)的检测方式筛选出能够表达重组蛋白并将其有效分泌至培养基中的阳性菌株.分别用Tricine-SDS-PAGE电泳结合Western Blot和高效液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)的方法检验截短型ADAM 10(sADAM10)对Aβ42的水解作用,并用硫黄素T(thioflavin T,ThT)荧光实验检验sADAM 10对Aβ42聚集的影响.结果:通过毕赤酵母表达系统成功分泌表达了sADAM 10,其分子量在35 kD左右,为已成功切除了前导肽的并在金属蛋白酶结构域中的糖基化位点上进行糖基化的成熟蛋白酶;重组蛋白能水解Aβ42,在一定程度上抑制Aβ42聚集,其被检测到的水解位点位于Aβ42多肽的中段.结论:sADAM 10具有作为阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)治疗药物的可能性.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/5