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黑逍遥散调控p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路对阿尔茨海默病大鼠神经炎症的影响
编辑人员丨2024/3/16
目的 观察黑逍遥散对Aβ1-42所致阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响,并从p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路介导的炎症级联反应探讨其作用机制.方法 双侧海马注射 1 μL Aβ1-42溶液复刻AD大鼠模型.筛选造模成功的大鼠 50 只,随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组(0.5 mg/kg)和黑逍遥散低、中、高剂量组(4.25、8.5、17 g/kg),连续给药 42 d.Morris水迷宫实验检测定位航行与空间探索能力,HE染色观察海马神经元病理结构改变,ELISA法检测海马组织Aβ1-42、iNOS、PGE2 表达,RT-qPCR法检测海马组织p38、ATF2、COX-2 mRNA表达,Western blot法检测海马组织p-p38、p-ATF2、COX-2蛋白表达.结果 与模型组比较,黑逍遥散中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组逃避潜伏期缩短(P<0.01),有效区域运动距离、目标象限滞留时间百分比增加(P<0.01),海马CA1 区神经元排列有序,胞体清晰,凋亡细胞减少,海马组织 Aβ1-42、iNOS、PGE2 水平降低(P<0.05,P<0.01),p38、COX-2 mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),p38、p-p38、p-ATF2、COX-2 蛋白表达降低(P<0.01).结论 黑逍遥散可改善Aβ1-42所致AD大鼠的认知能力,其机制可能与阻断 p38MAPK/ATF2/COX-2 信号通路传导,进而减轻炎症反应有关.
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编辑人员丨2024/3/16
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黑逍遥散调控NOX2/ROS/NF-κB信号通路干预AD模型小鼠小胶质细胞极化
编辑人员丨2023/9/30
基于氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)/活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)/核转录因子κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)信号通路探究黑逍遥散对APP/PS1双转基因小鼠小胶质细胞(microglia,MG)极化的影响及作用机制.4月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠50只,随机分为模型组、MCC950组(10 mg·kg-1)及黑逍遥散低、中、高剂量组(6.45、12.89、25.78 g·kg-1),同月龄、同系种雄性C57BL/6J小鼠30只,随机分为空白组、空白灌胃干预组和空白腹腔注射组,各组给药干预90 d.Morris水迷宫检测学习认知能力,尼氏染色和透射电镜观察海马神经元病理形态和超微结构,免疫荧光检测小胶质细胞M1型标志物CD16/32+/Iba-1+、M2型标志物CD206+/Iba-1+的阳性表达及海马ROS表达情况,比色法检测海马丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,酶联免疫吸附法检测海马白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎症因子含量,蛋白免疫印迹检测海马β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)、Iba-1、CD16/32、CD206、NOX2、NF-κB、p-NF-κB、核因子 κB抑制蛋白 α(NF-κB inhibitor alpha,IκBα)和p-IKBα蛋白表达.结果显示,与空白组比较,模型组小鼠目标象限运动距离、逃避潜伏期显著延长(P<0.01),目标象限滞留时间及百分比显著缩短(P<0.01);神经元细胞排列紊乱,出现肿胀、核消失或偏置,细胞数量明显减少,尼氏小体溶解甚至消失,胞质呈透亮区域;细胞膜出现缺损、皱缩,形态异常,胞质中少见细胞器,线粒体明显肿大,数量减少;小胶质细胞M1型标志物CD16/32+/Iba-1+显著升高(P<0.01),M2型标志物CD206+/Iba-1+显著降低(P<0.01),ROS活性和MDA含量显著升高(P<0.01),SOD水平显著降低(P<0.01),炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α 含量显著升高(P<0.01);Aβ、CD16/32、Iba-1、NOX2、NF-κB和IKBα蛋白表达及磷酸化显著升高(P<0.01),CD206显著降低(P<0.01).空白组与空白灌胃干预组、空白腹腔注射组差异无统计学意义.黑逍遥散干预后,各剂量组小鼠目标象限运动距离和逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),目标象限滞留时间及百分比显著延长(P<0.01);细胞数量明显增多,排列较为整齐,肿胀明显缓解,尼氏小体增加;细胞形态较为规则,胞膜较为完整,线粒体肿胀明显缓解,但仍有部分内质网轻度扩张;M1型标志物CD16/32+/Iba-1+显著降低(P<0.05或P<0.01),M2型标志物CD206+/Iba-1+显著升高(P<0.01),ROS活性、MDA含量显著降低(P<0.01),SOD水平显著升高(P<0.01),炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α含量显著降低(P<0.01);Aβ、CD16/32、Iba-1、NOX2、NF-κB、IKBα蛋白及其磷酸化显著降低(P<0.01),CD206显著升高(P<0.01).综上所述,黑逍遥散能够缓解神经元损伤,提高APP/PS1小鼠学习记忆能力,作用机制可能与抑制NOX2/ROS/NF-κB信号通路,调节MG极化,增加M2型表达,抑制M1型表达,减少炎症因子释放有关.
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编辑人员丨2023/9/30
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国医大师段富津教授运用逍遥散加减验案5则
编辑人员丨2023/8/6
国医大师段富津教授从医六十余载,博采众方,古为今用,精于辨证论治,善于运用逍遥散加减治疗肝经疾病.逍遥散主治肝郁血虚脾弱证,有疏肝、养血、健脾三方面的作用,段老认为,三者相互影响、相互联系,临床上应根据三者的轻重缓急,酌情确定君药.现列举段老运用逍遥散治疗经行头痛、乳癖、胃痛、黧黑斑、瘿痈验案5则,通过对上述异病同治案例的分析,总结其运用逍遥散的临证经验,以示段富津教授的辨证思路,以期为临床上应用逍遥散提供参考.
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编辑人员丨2023/8/6
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逍遥散加减治疗痤疮兼斑秃验案
编辑人员丨2023/8/6
陈某,女,32岁.2017年12月22日初诊.患者面部反复痤疮多年,其下巴较为严重,呈大粒丘疹,顶上常有脓头,且于经前明显加重.该患者在3个月前无明显诱因出现脱发症状,呈近似圆形,直径约2cm,边界清楚,此区域皮肤干滑光泽;舌淡红、苔白,脉弦细.辨证属肝郁化火上扰,血不养发;治宜疏肝清热,柔肝养血,方用逍遥散加减:当归、生白芍、茯苓、炒白术、生麦芽各15g,薏苡仁30g,柴胡6g,生甘草5g,牡丹皮、焦栀子、潼蒺藜、白蒺藜、生侧柏叶、土茯苓、紫花地丁各10g.水煎服,每日服用2次,每次150ml.嘱服药期间忌辛辣刺激食物.二诊:服药半月复诊,痤疮大好,偶见下巴处新发若干小粒痘疹,无脓头;在其头顶脱发区域开始长出白色小绒毛.再于前方加入桑白皮10g,续服7剂.三诊:脱发处绒毛状新发更加致密,近圆心处发色转黑,痤疮偶发少许,观病气已十去七八,渐入佳境,给予四物汤养血巩固.
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编辑人员丨2023/8/6
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黑逍遥散对AD模型小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β,NEP,IDE表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究黑逍遥散对阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD)小鼠海马区β淀粉样多肽1-42(β-amyloid 1-42peptide,Aβ1-42),糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β),脑啡肽酶(neprilysin,NEP),胰岛素抵抗酶(insulin-degrading enzyme,IDE)表达的影响.方法:42只APP/PSI双转基因小鼠称体质量后,按随机原则分为4组,分别为模型组,阳性药组(盐酸多奈哌齐,3.25 mg· kg-1),黑逍遥散高、低剂量组(6,3 g·kg-1).10只同月龄、同种系的野生型C57BL/6J小鼠为正常组.连续灌胃12周后,Morris水迷宫予以行为学检测,苏木素-伊红(HE)染色观察海马神经元的形态改变,采用免疫组化技术分别检测小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β,NEP,IDE蛋白的表达.结果:治疗3个月后,与正常组比较,AD模型组小鼠,逃避潜伏期均延长,跨原平台次数减少(P<0.01),小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β蛋白阳性表达显著增强,NEP与IDE蛋白阳性表达显著减弱(P<0.01),HE染色显示AD模型小鼠海马神经细胞损伤严重;与模型组比较,用药各组小鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加(P<0.05,P<0.01),小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β蛋白阳性表达显著减弱,NEP与IDE蛋白阳性表达显著增强(P <0.05,P<0.01),HE染色显示各治疗组小鼠海马神经细胞损伤减轻.结论:黑逍遥散能够显著改善AD小鼠的学习记忆能力,可能与调节Aβ在海马区的异常沉积和降解作用等方面来减轻AD小鼠认知能力损伤有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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黑逍遥散对APP/PS1双转基因小鼠海马CREB1蛋白及其磷酸化表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨黑逍遥散治疗阿尔茨海默病的可能作用机制.方法 30只APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、黑逍遥散组,每组10只.同月龄、同种系的野生型C57BL/6雄性小鼠10只设为空白组.黑逍遥散组给予黑逍遥散6g/(kg·d)灌胃,盐酸多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐片3.25 mg/(kg·d)灌胃,模型组、空白组给予双蒸水0.2 ml/10 g灌胃,各组均每日灌胃1次,连续3个月.采用Morris水迷宫于实验结束第1~5天进行定位航行实验观察逃避潜伏期,第6天开展空间搜索实验记录跨原平台次数.采用免疫组化法检测小鼠海马CA1、CA3及DG区环腺苷酸应答元件结合蛋白1(CREB1)及磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白1 (p-CREB1)表达.结果 与空白组比较,模型组小鼠第1~5天逃避潜伏期明显延长,第6天跨原平台次数明显减少,小鼠海马CA1、CA3及DG区CREB1及p-CREB1蛋白表达显著降低(P <0.05或P<0.01).与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和黑逍遥散组各时间点逃避潜伏期均缩短,第6天跨原平台次数明显增加,小鼠海马CA1、CA3及DG区CREB1、p-CREB1蛋白表达显著升高(P <0.05或P<0.01).黑逍遥散组和盐酸多奈哌齐组各指标组间比较差异无统计学意义(P>0.05). 结论 黑逍遥散可能通过调节海马CREB1及其磷酸化表达发挥防治阿尔茨海默病的作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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黑逍遥散对阿尔茨海默病模型小鼠Ca2+-CaM/CaMKⅡα信号通路关键因子表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察黑逍遥散对阿尔茨海默病(AD)小鼠海马神经元Ca2+浓度和钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白依赖性激酶Ⅱα(CaMKⅡα)表达的影响.方法 30只APP/PS1双转基因雄性小鼠称重后,按随机原则分为模型组、阳性对照组和黑逍遥散组,每组10只.另取10只同月龄、同种系野生型C57BL/6雄性小鼠为空白组.各给药组给予相应药物干预,连续3个月,采用钙荧光探针结合激光共聚焦显微镜技术检测海马神经元Ca2+浓度,采用实时荧光定量PCR和免疫组化技术分别检测小鼠海马区CaM、CaMKαⅡ 基因和蛋白的表达.结果 与空白组比较,模型组小鼠海马神经元Ca2+浓度显著升高,CaM基因和蛋白表达显著升高,CaMKαⅡ基因和蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,各给药组小鼠海马神经元Ca2+浓度显著降低,CaM基因和蛋白表达显著降低,CaMKαⅡ 基因和蛋白表达显著升高(P<0.01,P<0.05).结论 黑逍遥散通过调节模型小鼠海马Ca2+-CaM/CaMKⅡα 信号通路关键因子表达而发挥防治AD的作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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黑逍遥散对AD模型小鼠海马区APP,PERK表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究黑逍遥散对阿尔茨海默症(AD)模型小鼠海马神经元内质网应激的影响,包括行为学、组织病理学及淀粉样前体蛋白(APP),类蛋白激酶内质网激酶(PERK)等因子的表达.方法:使用SPF级的4月龄双转基因(APP/PS1)雄性小鼠42只随机分为黑逍遥散高、低剂量组(6,3 g·kg-1),盐酸多奈哌齐组(3.25 mg·kg-1)及模型组4组,同种系同月龄C57BL小鼠10只作为正常组.首先适应环境1周,经不同药物干预治疗2个月后,用Morris水迷宫行为学检测每组小鼠的学习和记忆能力;再治疗1个月后,通过光镜来观察每组小鼠海马区组织病理学改变;免疫组化、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠海马区细胞内质网组织中APP,PERK蛋白及mRNA的表达情况.结果:药物干预治疗后,与正常组比较,模型组小鼠的逃避潜伏期显著延长(P<0.01);模型组小鼠海马区内神经元严重损伤;模型组APP,PERK的表达量显著升高(P<0.01).与模型组比较,各给药组小鼠逃逸潜伏期均明显缩短(P <0.05,P<0.01);海马区内神经元损伤程度均减轻;APP,PERK的表达均明显降低(P<0.05).结论:黑逍遥散能够显著改善AD小鼠的学习记忆能力,可能与减少内质网过度应激反应等方面来减轻AD小鼠认知能力损伤有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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睡眠-觉醒机制的相关因素及中药对其调节的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
综述睡眠-觉醒机制的相关因素及中药对其调节的研究进展.随着神经解剖学、药理学、分子生物学等技术方法的发展,发现睡眠-觉醒机制与众多因素有关,如下丘脑-垂体-肾上腺轴、褪黑素、多巴胺、5-羟色胺、神经肽、乙酰胆碱、γ-氨基丁酸能等;加味四逆散、加味逍遥散等中药可通过调节激素水平及神经递质影响睡眠-觉醒机制.
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编辑人员丨2023/8/6
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黑逍遥散对APP/PS1双转基因小鼠海马和脑皮层CaMKⅡα蛋白及其磷酸化表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:观察黑逍遥散对阿尔茨海默症(AD)小鼠海马和脑皮层钙调蛋白依赖性激酶2α(CaMKⅡα)及其磷酸化表达水平的干预效应.方法:30只APP/PS1双转基因雄性小鼠称体质量并按随机原则分为模型组、盐酸多奈哌齐组、黑逍遥散组,每组10只.同月龄、同种系的野生型C57BL/6雄性小鼠10只为空白组.盐酸多奈哌齐组(6 g·kg-1)、黑逍遥散组(3.25 mg·kg-1)分别连续给药90 d后,Morris水迷宫检测行为学变化,免疫组化和蛋白免疫印迹法检测小鼠海马区和脑皮层CaMKⅡα蛋白及其磷酸化的表达.结果:干预90 d后,与空白组比较,AD模型组小鼠,逃避潜伏期显著延长,跨原平台和有效区域次数显著减少(P<0.01),小鼠海马区及脑皮层CaMKⅡα蛋白表达显著减弱或降低,而p-CaMKⅡα蛋白表达显著升高(P<0.05.P<0.01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐和黑逍遥散组小鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加(P<0.01),小鼠海马区及脑皮层CaMKⅡα蛋白显著增强或升高,p-CaMKⅡα蛋白表达显著降低(P <0.05,P<0.01).结论:黑逍遥散通过调节AD小鼠不同脑区参与细胞记忆形成机制的关键蛋白CaMKⅡα及其磷酸化表达,进而发挥改善AD小鼠的学习记忆能力.
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编辑人员丨2023/8/6