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AKAP1在高原低压低氧致心肌损伤中的保护作用及机制
编辑人员丨1周前
目的:探讨A型激酶锚定蛋白1(A-kinase anchored protein1,AKAP1)在高原低压低氧环境导致心肌损伤中的保护作用及可能机制。方法:于2021年1月至2022年5月,将SPF级雄性C57BL/6小鼠分为常氧野生对照(wild type,WT)组及高原低压低氧实验(hypobaric hypoxia,HH)组,各6只小鼠;HH组用动物实验低压氧舱模拟6 000 m海拔持续4周构建模型。分离SD大鼠乳鼠原代心肌细胞后分为常氧对照组及低氧实验组( n=3),用三气低氧培养箱以1%氧浓度低氧24 h构建细胞模型。用蛋白质印迹法、免疫组化及实时荧光定量聚合酶链反应检测心肌组织和细胞中AKAP1蛋白及mRNA表达。心肌点注射AKAP1或对照腺病毒后将小鼠分3组( n=6):WT组、高原低压低氧过表达对照组(HH+Ad-Ctrl组)、高原低压低氧过表达实验组(HH+Ad-AKAP1组)。用无创M型超声心动机检测小鼠心脏功能,马松及天狼猩红染色检测心肌纤维化程度,麦胚凝集素检测心肌细胞肥大状况。用siRNA干涉或腺病毒上调原代心肌细胞AKAP1表达后将细胞分3组( n=3):常氧对照组,低氧干涉对照组(低氧+siCtrl组),低氧AKAP1敲低组(低氧+siAKAP1组);常氧对照组,低氧过表达对照组(低氧+Ad-Ctrl组),低氧AKAP1过表达组(低氧+Ad-AKAP1组)。用流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法及实时荧光定量聚合酶链反应检测AKAP1、凋亡相关蛋白及mRNA的表达水平,JC-1染色检测线粒体膜电位,MitoSOX检测线粒体活性氧水平。 结果:HH组小鼠心肌AKAP1表达低于WT组,低氧实验组细胞AKAP1表达低于常氧对照组( P<0.01)。与WT组比较,HH+Ad-Ctrl组小鼠左心室射血分数及左心室短轴缩短率降低( P<0.01),心肌纤维化及肥大程度加重( P<0.01),B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)降低,BCL-2相关X蛋白(BCL-2-associated X protein,BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase 9)表达升高( P<0.01)。过表达AKAP1后,与HH+Ad-Ctrl组比较,HH+Ad-AKAP1组小鼠左心室射血分数及左心室短轴缩短率升高( P<0.01),心肌纤维化及肥大程度减轻( P<0.01),BCL-2表达升高,BAX、Caspase 3、Caspase 9表达下降( P<0.01)。与常氧对照组比较,低氧+siCtrl组大鼠原代心肌细胞BCL-2表达降低,BAX、Caspase 3、Caspase 9表达升高,凋亡水平增加( P<0.01),线粒体膜电位降低,活性氧生成增加( P<0.01)。敲低AKAP1后,与低氧+siCtrl组比较,低氧+siAKAP1组细胞BCL-2表达降低,BAX、Caspase 3、Caspase 9表达升高,凋亡水平增加( P<0.01),线粒体膜电位降低,活性氧生成增加( P<0.01)。过表达AKAP1后,与低氧+Ad-Ctrl组比较,低氧+Ad-AKAP1组细胞BCL-2表达升高,BAX、Caspase 3、Caspase 9表达降低( P<0.05),凋亡水平降低( P<0.01),线粒体膜电位增强,活性氧水平降低( P<0.01)。 结论:高原低压低氧条件下心肌细胞AKAP1下调,可能导致线粒体膜电位降低、活性氧生成增加,引发心肌细胞凋亡,从而加重高原低压低氧心肌损伤。
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编辑人员丨1周前
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右美托咪定对NR8383细胞缺氧/复氧损伤时表型转化的影响
编辑人员丨1周前
目的:评价右美托咪定对大鼠肺泡巨噬细胞缺氧/复氧损伤时表型转化的影响。方法:大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383培养于含20%热灭活胎牛血清的F-12K培养基中,采用随机数字表法将细胞分为:对照组(C组),使用完全培养基,培养于常规培养箱中;缺氧/复氧组(H/R组),在三气培养箱中缺氧6 h后,置于常规培养箱中复氧6 h;右美托咪定组(D+H/R组,按右美托咪定终浓度不同分为D0.1+H/R组、D1+H/R组、D10+H/R组),在含0.1、1.0 μmol/L或10.0 μmol/L右美托咪定的培养液中孵育1 h后,更换完全培养基进行缺氧/复氧(每组设置6个复孔)。于复氧6 h后,采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)法检测细胞活力,比色法检测细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性,分光光度计检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性,实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS) 2、干扰素(interferon, IFN)、单核细胞趋化蛋白1 (monocyte chemotactic protein 1, Mcp1 )、精氨酸酶1 (arginase-1, Arg1)、IL-10、几丁质酶3样蛋白3 (chitinase 3-like protein-3, Chi3l3)的mRNA表达,免疫荧光染色法标记诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)与Arg1。结果:与C组比较,其余4组上清液LDH活性升高,H/R组、D0.1+H/R组和D1+H/R组细胞活力降低,H/R组、D0.1 +H/R组SOD活性降低( P<0.05);与H/R组比较,D1+H/R组和D10+H/R组细胞活力增高,D1+ H/R组SOD活性增高,D1+H/R组和D10+H/R组上清液LDH活性降低( P<0.05)。与C组比较,H/R组NOS2、IFN、Mcp1、Chi3l3和IL-10的基因表达上调,D+H/R组Mcp1、Arg1、IL-10和Chi3l3的基因表达上调( P<0.05);与H/R组比较,D+H/R组NOS2、Mcp1和IFN的mRNA表达下调,Arg1和IL-10的mRNA表达上调( P<0.05)。与C组比较,H/R组和D+H/R组细胞Arg1和iNOS荧光表达均明显增强,提示Arg1和iNOS表达均增加;与H/R组比较,D+H/R组的Arg1荧光表达较H/R组更强,而iNOS荧光表达减弱,提示D+H/R组的Arg1的表达增加。 结论:右美托咪定减轻大鼠肺泡巨噬细胞缺氧/复氧损伤的机制与促进细胞向M2型极化有关。
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编辑人员丨1周前
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红细胞来源外泌体对NK细胞增殖和分泌INF-γ的影响
编辑人员丨1周前
目的:评价红细胞来源外泌体对自然杀伤细胞(NK细胞)增殖和分泌INF-γ的影响。方法:储存时间为14~21 d的5袋红细胞,采用ExoQuick试剂盒分离外泌体。应用磁珠法和流式细胞仪分离、鉴定健康志愿者外周血NK细胞,以2×10 5个/ml分别接种于96孔板和24孔板,采用随机数字表法分为2组( n=18):对照组(C组)和外泌体组(E组)。E组加入外泌体,终浓度为5 μg/ml;C组加入相应体积RPMI1640培养液。置于37 ℃、5%CO 2、饱和湿度培养箱中培养,分别于细胞培养第1和3天采用CCK8法检测NK细胞增殖水平,第5天采用ELISA法检测上清液INF-γ浓度。 结果:2组培养第1和3天时NK细胞增殖水平比较差异无统计学意义( P>0.05);与C组比较,E组上清液IFN-γ浓度降低 ( P<0.05)。 结论:红细胞来源外泌体对NK细胞增殖无明显影响,可抑制NK细胞分泌INF-γ。
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编辑人员丨1周前
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鸟巢式-袋鼠式-沐浴-转运护理模式在低体温新生儿护理中的应用
编辑人员丨1周前
目的:探讨鸟巢式-袋鼠式-沐浴-转运护理模式在低体温新生儿护理中的应用效果。方法:选取2017年1月至2018年6月在湖北省仙桃市妇幼计生服务中心分娩的低体温新生儿90例为研究对象,按随机数字表发分为观察组和对照组,各45例。对照组采用常规护理措施,观察组采用鸟巢式-袋鼠式-沐浴-转运护理模式干预。综合评价比较两组新生儿的体温、耗氧量、康复进程及不良事件发生率等。结果:护理干预后观察组新生儿的血氧饱和度(SpO 2)、体温高于对照组,而体温波动幅度低于对照组,观察组新生儿培养箱治疗时间、体温复温时间、住院时间均短于对照组,观察组新生儿寒战、躁动、心率加快、呼吸抑制等不良事件发生率低于对照组,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:对低体温新生儿采用鸟巢式-袋鼠式-沐浴-转运护理模式干预可显著提高和稳定患儿的体温,降低新生儿的耗氧量,缩短患儿的康复进程,减少不良事件发生,为新生儿创造了良好的生长环境。
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编辑人员丨1周前
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PTPIP51调节线粒体-内质网结构偶联在N2a细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤中的作用
编辑人员丨1周前
目的:观察蛋白酪氨酸磷酸酶相互作用蛋白(protein tyrosine phosphatase interacting protein, PTPIP)51对线粒体-内质网结构偶联(the mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes, MAMs)的影响,探讨其在小鼠神经母细胞瘤(mouse neuro-blastoma N2a, N2a)细胞氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)损伤中的作用。方法:将指数生长的N2a细胞株置于37 ℃、5%CO 2、95%空气的细胞培养箱内培养至细胞密度达70%,按照随机数字表法分为4组:对照组(C组)、氧糖剥夺/复糖复氧组(OGD/R组)、干扰小RNA(small interfering RNA, siRNA)-PTPIP51转染组(siRNA组)、siRNA-NC转染组(NC组)。OGD/R模型制备:将N2a细胞高糖培养液换成低糖培养液,置于37 ℃、5%CO 2、95% N 2缺氧环境中培养3 h后重新置于高糖培养液中正常条件下培养。C组继续在正常条件下培养;OGD/R组仅制备OGD/R模型;siRNA组与NC组在OGD/R模型制备前48 h分别转染siRNA-PTPIP51及siRNA-NC,余同OGD/R组。各组于复糖复氧12 h、24 h后收集细胞检测。细胞计数试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR, RT-qPCR)检测PTPIP51 mRNA表达水平,Western blot检测PTPIP51蛋白水平,共聚焦显微镜观察线粒体-内质网共定位水平。 结果:与C组比较,其他3组细胞存活率降低( P<0.05),细胞凋亡率、线粒体-内质网共定位水平、PTPIP51 mRNA及PTPIP51蛋白水平均升高( P<0.05);与OGD/R组比较,siRNA组细胞存活率升高( P<0.05),细胞凋亡率、线粒体-内质网共定位水平、PTPIP51 mRNA及PTPIP51蛋白水平均降低( P<0.05)。 结论:PTPIP51表达上调介导的线粒体-内质网共定位水平提高是N2a细胞OGD/R损伤的机制之一。
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编辑人员丨1周前
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人脂肪来源间充质干细胞条件培养基对病理性瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨人脂肪间充质干细胞条件培养基(human adipose-derived mesenchymal stem cells conditioned media,hADSCs-CM)对病理性瘢痕成纤维细胞增殖、迁移能力的影响。方法:分离培养hADSCs和病理性瘢痕成纤维细胞,取第3代细胞用于后续实验。于培养12、24、48 h收集hADSCs条件培养基作为实验组条件培养基(12 h-CM、24 h-CM、48 h-CM),无hADSCs的空白无血清低糖DMEM培养基置于培养箱内12、24、48 h作为对照组条件培养基(12 h-CC、24 h-CC、48 h-CC)。选取增生性瘢痕成纤维细胞(HSFs)、瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)以及正常皮肤成纤维细胞(NFs),分别以实验制备的培养基进行处理,每组培养基3个复孔,以CCK-8实验检测HSFs及KFs的增殖能力,以细胞划痕实验检测条件培养基处理后细胞迁移能力的变化,流式细胞仪分析细胞的周期分布、凋亡及乳酸脱氢酶(LDH)水平变化情况。实验数据以Graphpad 7.0软件进行分析,多组样本均数比较应用One-Way ANOVA, P<0.05为差异有统计学意义。 结果:CCK-8结果显示,24 h-CM、48 h-CM处理后24 h KFs、HSFs的增殖速度较对照组开始出现明显减慢,HSFs增殖趋势也出现了类似的变化趋势,NFs无明显的增殖趋势变化;实验组条件培养基对HSFs增殖的抑制作用在48 h达到峰值:24 h-CM KFs增殖活性为1.81±0.10,24 h-CC KFs为2.36±0.05( t=4.24, P<0.001);24 h-CM HSFs增殖活性为1.52±0.10,24 h-CC HSFs为1.96±0.15( t=8.98, P=0.001);48 h-CM KFs增殖活性为1.65±0.10,48 h-CC KFs为2.57±0.10( t=26.64, P<0.001);48 h-CM HSFs增殖活性为1.29±0.20,48 h-CC HSFs为1.94±0.10( t=11.14, P<0.001);之后抑制作用渐弱。细胞划痕实验结果表明,与对照组相比,24、48 h收集的hADSCs-CM处理后HSFs和KFs的迁移能力下降。细胞周期检测结果显示,在KFs中,12 h-CM、24 h-CM、48 h-CM组细胞处于G0/G1期的细胞比例较对照组升高,而处于S期的细胞比例则较对照组下降,在HSFs中也观察到了类似的现象。细胞凋亡检测结果显示各组NFs、KFs、HSFs未见明显凋亡。LDH漏出检测结果显示各组间无明显差异。 结论:hADSCs条件培养基可能通过其中含有的分泌因子抑制病理性瘢痕成纤维细胞的增殖、迁移,但不诱导其凋亡。
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编辑人员丨1周前
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内置物表面培养在骨折内固定术后感染致病菌中的检出效能初探
编辑人员丨1周前
目的:评估一种内置物表面培养方式在骨折内固定术后感染致病菌中的检出效能。方法:前瞻性筛选自2020年11月至2023年1月期间就诊于南方医科大学南方医院骨科-创伤骨科、诊断为骨折内固定术后感染、根据临床诊疗原则需取出内置物的患者。将所有患者术中取出的内置物于无菌环境下采用生理盐水冲洗2遍后,表面浇筑薄层胰酪大豆胨琼脂培养基,随后置于37 ℃含5% CO 2的细菌培养箱,每天观察内置物表面及周围变化,必要时再次加注培养基避免其干涸凝固,培养2周,对于出现的菌落予无菌咽拭子采集3个独立菌落送检验科进行鉴定;将鉴定结果与传统术中多点取材进行培养的结果进行比较分析。 结果:共纳入75例患者,其中男56例,女19例;年龄(46.2±15.4)岁;最常见的感染部位是胫骨(37例),最常见的内置物类型是钢板螺钉(59例);内置物表面细菌阳性率为86.7%(65/75),显著高于传统术中多点取材培养的52.0%(39/75),差异有统计学意义( P<0.001);传统培养阴性的80.5%(29/36)采用内置物表面培养可获得阳性结果;传统培养阳性而采用内置物表面培养获得阴性结果的患者3例;36例患者两种方式的培养结果均为阳性,35例患者两种方式的结果一致,一致率为97.2%(35/36);内置物表面培养方法的培养时间[1(1,2)d]显著短于传统培养方式[3(3,4)d],差异有统计学意义( P<0.001);65例内置物表面培养的阳性患者中,59例为单一菌种感染,最常见的致病菌为金黄色葡萄球菌(29例)。 结论:内置物表面培养致病菌的方法具有一定的优势:阳性率高,培养时间短,可作为传统培养方法的一种有效补充。
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编辑人员丨1周前
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用于精子DNA碎片指数检测的精液标本处理方式探讨
编辑人员丨1周前
目的:探讨不同的精液处理方式对精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)检测结果的影响,评价当前精液处理方式对男性生育力评估的准确性。方法:本研究采用自身配对设计,选取2021年8月至2022年1月期间在广西壮族自治区妇幼保健院生殖医学中心行体外受精助孕患者在取卵当日获得的50份精液。每一份精液分为3组,进行不同方法处理,A组:精液样本混匀后留取精液原液50 μL;B组:密度梯度离心后留取精液与梯度液交界层的精液50 μL;C组:密度梯度离心后,吸取精子沉淀团加入含有1.0 mL精子洗涤液的试管底部置于培养箱内上游15 min后,吸取50 μL上游液。精液处理后,进行精液常规检测和精子DFI检测。采用Pearson进行分析DFI和精子不动精子百分率、精子前向运动百分率的相关性。结果:C组的精子活动率[(96.83±2.28)%]显著高于A组[(57.16±11.28)%]和B组[(22.54±9.35)%],组间两两比较和3组之间比较差异均有统计学意义(均 P<0.001)。B组的不动精子百分率[(77.46±9.35)%]、DFI[37.18%(30.41%,47.80%)]高于C组[(3.14±2.31)%、0.78%(0.00%,2.07%)]和A组[(42.83±11.28)%、22.00%(14.75%,29.25%)],组间两两比较和3组之间比较差异均有统计学意义(均 P<0.001)。Pearson分析结果显示,A组和B组的DFI与不动精子百分率呈正相关( r=0.304, P=0.032; r=0.612, P<0.001),B组DFI与精子前向运动百分率呈负相关( r=-0.517, P<0.001)。 结论:对于同一份精液,不动精子的DFI显著高于活动精子的DFI。精液原液的DFI值因受不动精子的干扰,不能真实反映参与受精的活动精子的DNA情况,提示应该选择梯度离心法、上游法或其他方法收集的活动精子进行DFI检测,这样更能准确地评估男性生育力。
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编辑人员丨1周前
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桌面干式培养箱在体外受精胚胎培养中的临床效果观察
编辑人员丨3周前
目的 评估桌面干式培养箱与传统湿式培养箱在胚胎培养中的效果差异.方法 回顾性分析2019年1月至2022年9月于我院生殖中心就诊行体外受精(IVF)治疗的共3 177个周期的临床资料.根据培养环境不同分为两组:以传统湿式箱培养的为C200(湿式)组(n=2 820),以桌面干式培养箱培养的为MIRI(干式)组(n=357),比较两组的患者一般情况、胚胎培养情况和妊娠结局.结果 两组间女方年龄、体质量指数(BMI)、不孕年限、不孕类型、基础卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、窦卵泡数计数(AFC)、促性腺激素(Gn)总量比较均无显著差异(P>0.05);两组间双原核(2PN)率、D3优胚率、D3可用胚胎率、囊胚形成率比较均无显著差异(P>0.05).在D3卵裂期胚胎新鲜移植的患者中,C200(湿式)组活产率显著低于MIRI(干式)组(36.06%vs.46.09%,P<0.05),两组间胚胎种植率、临床妊娠率、流产率、早产率、双胎率及胎儿出生体重比较均无显著差异(P>0.05).在D5囊胚新鲜移植患者中,C200(湿式)组流产率显著低于MIRI(干式)组(13.20%vs.20.63%,P<0.05),两组间胚胎种植率、临床妊娠率、活产率、早产率、双胎率及胎儿出生体重比较均无显著差异(P>0.05).结论 两种培养模式整体上可获得相似的胚胎培养结果,但桌面干式培养箱可能更适合于D1~D3胚胎的培养,而D4至囊胚阶段的培养更适合在传统湿式培养箱中进行.
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编辑人员丨3周前
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D-手性肌醇对弱精子症患者精子常规和生物功能参数的影响
编辑人员丨2023/12/30
目的 比较精子制备过程中添加肌醇(Myo-inositol,MYO)和D-手性肌醇(D-chiro-inositol,DCI)对弱精子症患者精液常规参数和生物功能参数的影响.方法 将 2021 年 4 月至 2022 年 11 月在攀枝花市妇幼保健院就诊的40 例弱精子症不育男性患者液化后的精液标本分为三等份,37℃培养箱中孵育30 min后,采用非连续密度梯度离心法进行精子制备.对照组:不进行干预;MYO组:孵育前在精液中和梯度离心培养液中均加入2 mg/mL MYO;DCI组:孵育前在精液中和梯度离心培养液中均加入750 ug/mL DCI.分析制备后的精液常规参数,使用流式细胞仪分别测定3 组精液标本的生物功能参数,包括精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)、活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位(mtochondrial membrane potential,MMP).结果 使用非连续密度梯度离心法进行精子制备后:① MYO组显著提高制备后前向运动精子百分率和精子回收率(P<0.05);②与对照组相比,MYO显著降低精子DFI(P<0.05),而DCI组与对照组DFI差异无统计学意义(P>0.05),MYO组和DCI组对精子的ROS水平和MMP水平均无显著影响(P>0.05).结论 在体外添加MYO与精子共孵育能提高精子活力,MYO是精子制备过程中降低精子DNA氧化损伤的有效抗氧化保护剂.
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编辑人员丨2023/12/30