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微小RNA-455靶向调控泛素连接酶Cullin3活化核转录因子-κB在炎性神经痛中的作用及其机制
编辑人员丨6天前
目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-455靶向调控泛素连接酶Cullin3(CUL3)活化核转录因子-κB(NF-κB)在炎性神经痛中的作用及其机制。方法:培养施万细胞(SCs),过表达miR-455、CUL3和反义miR-455以及慢病毒CUL3-短发卡RNA(shRNA)质粒沉默CUL3表达。运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-455、CUL3和NF-κB的RNA水平表达变化,运用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析CUL3、NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β蛋白水平表达变化。组间比较采用 t检验,多组比较采用单因素方差分析。 结果:过表达miR-455组CUL3蛋白表达低于对照组(6.25±1.54比32.56±5.18, F=59.694, P<0.01),而NF-κB(62.75±8.69比12.75±1.59, F=57.505, P<0.01)、TNF-α(186.55±17.84比52.14±6.23, F=66.576, P<0.01)和IL-1β(16.46±4.76比4.86±1.28, F=10.799, P<0.05)蛋白表达高于对照组。反义miR-455组CUL3蛋白表达高于反义miRC组(87.49±8.26比28.16±5.12, t=32.598, P<0.01),而反义miR-455组NF-κB(6.63±0.75比19.22±2.84, t=8.929, P<0.05)、TNF-α(26.23±2.14比63.17±7.76, t=7.739, P<0.05)和IL-1β(2.77±0.56比7.15±1.03, t=11.926, P<0.01)蛋白表达低于反义miRC组。同时,shCUL3组NF-κB(65.28±7.71比12.75±1.59, F=57.505, P<0.01)、TNF-α(172.95±19.57比52.14±6.23, F=66.576, P<0.01)和IL-1β(15.33±3.14比4.86±1.28, F=10.799, P<0.05)的蛋白表达高于对照组。而CUL3过表达组NF-κB(5.27±0.83比16.21±1.58, t=11.937, P<0.01)、TNF-α(19.72±2.04比55.04±4.38, t=14.4, P<0.01)和IL-1β(2.25±0.49比6.79±0.81, t=13.065, P<0.01)蛋白表达低于空转对照组。 结论:miR-455靶向调控CUL3从而促进了NF-κB蛋白的表达,在炎症性神经痛发病过程中发挥重要作用。
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编辑人员丨6天前
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长链非编码RNA SNHG16通过微小RNA-455-3p/Nocth2对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) SNHG16通过微小RNA(miR)-455-3p/Nocth2对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的影响及其机制。方法:选取2017年6月到2021年6月新乡市中心医院收治的51例鼻咽癌及其癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织lncRNA SNHG16和miR-455-3p表达水平。采用慢病毒建立lncRNA SNHG16敲降稳定细胞系SNHG16 KD组和对照组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞增殖能力和体内成瘤能力。采用流式细胞术分析两组细胞凋亡水平;采用流式细胞术分析细胞周期变化;采用生物信息学和生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNA SNHG16靶基因。组间数据比较采用 t检验。 结果:癌旁组织lncRNA SNHG16表达水平(0.89±0.09)明显低于鼻咽癌组织lncRNA SNHG16表达水平(2.11±0.22),差异有统计学意义( t=36.260, P<0.05)。对照组细胞吸光度( A)值(1.93±0.06)明显高于SNHG16 KD组(1.27±0.06),差异有统计学意义( t=18.350, P<0.05)。对照组细胞在裸鼠体内成瘤体积[(904.94±39.53) mm 3]明显高于SNHG16 KD组细胞成瘤体积[(742.82±97.80) mm 3],差异有统计学意义( t=4.860, P<0.05)。对照组细胞成瘤重量[(4.70±0.46) g]明显高于SNHG16 KD组细胞[(2.22±0.18) g],差异有统计学意义( t=15.960, P<0.05)。对照组细胞凋亡比例[(4.07±1.34)%]明显低于SNHG16 KD组细胞[(26.79±5.16)%],差异有统计学意义( t=10.430, P<0.05)。对照组细胞G 0/G 1期比例[(31.56±3.27)%]明显高于SNHG16 KD组细胞[(45.96±1.72)%],差异有统计学意义( t=9.5201, P<0.05)。lncRNA SNHG16是miR-455-3p的海绵。对照组细胞miR-455-3p表达水平(1.19±0.10)明显低于SNHG16 KD组细胞(2.15±0.15),差异有统计学意义( t=13.040, P<0.05)。对照组细胞Notch2表达水平(0.93±0.05)明显高于SNHG16 KD组细胞(0.44±0.06),差异有统计学意义( t=13.040, P<0.05)。 结论:lncRNA SNHG16海绵吸附miR-455-3p,进而调控Nocth2表达水平,调节鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期。
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编辑人员丨6天前
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miR-455-3p在结直肠癌组织中表达的临床意义及对癌细胞增殖的影响
编辑人员丨2周前
目的:探讨miR-455-3p在结直肠癌组织中表达的临床意义及对癌细胞增殖的影响.方法:基于GEO数据库(GSE30454和GSE108153),使用limma包分析结直肠癌组织中显著差异表达的miRNAs;借助包含TCGA数据库的UALCAN平台分析miR-455-3p在结直肠癌组织中的差异表达,并通过Kaplan-Meier Plotter网站初步分析miR-455-3p与患者生存的关联;原位杂交(in situ hybridization,ISH)法检测结直肠癌及配对癌旁组织(n=185对)中miR-455-3p的表达情况,并利用两样本秩和检验进行比较;通过Pearson x2检验和非条件Logistic回归分析miR-455-3p表达与患者临床病理参数的相关性;采用Kaplan-Meier法Log-rank 检验、多因素 COX 回归以及多因子降维(multifactor dimensionality reduction,MDR)法分析miR-455-3p预测结直肠癌患者预后的潜力;qPCR和MTT法检测miR-455-3p在结直肠癌细胞株中的表达及对细胞增殖能力的影响.结果:miR-455-3p、miR-1181、miR-1290和miR-622是两组GEO芯片中的共同差异基因.基于TCGA数据的差异分析和Kaplan-Meier曲线发现miR-455-3p在结直肠癌中的下调与患者预后不良密切相关(P=0.007 9,HR=0.21).miR-455-3p在结直肠癌中表达减少与肿瘤大小和原发位置显著相关(P<0.05).miR-455-3p高表达预示结直癌患者生存时间延长(P<0.001),为预后的独立保护因素(P<0.001,HR<1).miR-455-3p单因素模型具备有效评估无病生存期(disease-free survival,DFS)和总体生存期(overall survival,OS)的潜力(P<0.05,Cross-validation consistency=10/10).miR-455-3p在结直肠癌细胞株中表达下调(P<0.05),过表达miR-455-3p显著抑制结直肠癌细胞的增殖能力(P<0.05).结论:miR-455-3p抑制结直肠癌细胞增殖,其低表达有望成为结直癌患者早期诊断和预后评估的潜在生物标志物.
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编辑人员丨2周前
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miR-455-3p调控sirt1表达对大鼠椎间盘髓核细胞增殖及凋亡的影响
编辑人员丨2024/3/16
目的 探讨miR-455-3p调控沉默信息调节因子 2 同源蛋白 1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,sirt1)表达对大鼠椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用Ⅱ型胶原酶从大鼠腰椎椎间盘中分离NP细胞,并用甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)免疫荧光染色对其鉴定.NP细胞分成Ctrl组、白细胞介素-1 β(interleukin-1 β,IL-1 β)组、IL-1β+NC inhibitor组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor+si-NC组、IL-1 β+miR-455-3p inhibitor+si-sirt1 组,除Ctrl组外的五组细胞均使用 10 ng/mL的IL-1 β诱导NP细胞退变模型.实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miR-455-3p及sirt1 mRNA水平;细胞计数试剂盒 8(cell counting kit 8,CCK-8)检测增殖;JC-1 染色检测线粒体膜电位;Hoechst染色检测凋亡;蛋白免疫印迹检测sirt1、增殖(PCNA、Ki67、Cyclin D1)和凋亡(Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3)相关蛋白及Collagen Ⅱ、Aggrecan表达;双荧光素酶报告分析实验验证miR-455-3p与sirt1 的靶向关系.结果 大鼠椎间盘NP细胞被成功分离.与IL-1 β组、IL-1β+NC inhibitor组比较,IL-1β+miR-455-3p inhibitor组miR-455-3p 表达、凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3 表达及 Bax/Bcl-2 比值下降,细胞活力、PCNA、Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、Collagen Ⅱ、Aggrecan表达升高(P<0.05).miR-455-3p直接靶向负调控sirt1 表达.干扰sirt1 可逆转抑制miR-455-3p表达对NP细胞增殖、凋亡的影响.结论 抑制miR-455-3p表达可通过靶向调控sirt1,抑制IL-1 β诱导的NP细胞凋亡并促进NP细胞增殖.
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编辑人员丨2024/3/16
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胃饥饿素通过miR-455-5p靶向IGF-1R调控肝细胞胰岛素敏感性的作用及机制研究
编辑人员丨2024/2/3
目的:探究胃饥饿素通过调控miR-455-5p影响肝细胞胰岛素敏感性的作用机制.方法:采用高糖构建HepG2细胞胰岛素抵抗模型,造模成功后使用去酰基化胃饥饿素(DAG,1 μmol/L)干预,分别转染miR-455-5p 模拟物(miR-455-5p mimic)或对照物(NC mimic).检测各组细胞葡萄糖消耗量和细胞内糖原含量.采用荧光原位杂交分析HepG2细胞内miR-455-5p表达水平.应用生物信息学分析、荧光素酶报告基因实验来鉴定与miR-455-5p结合的靶基因,Western Blot检测IGF-1R/PI3K/Akt信号通路的表达水平.结果:在胰岛素抵抗HepG2细胞中,miR-455-5p的表达水平显著上调,葡萄糖消耗量和细胞内糖原含量均明显降低.DAG干预后细胞葡萄糖消耗量和细胞内糖原含量增加,miR-455-5p的表达水平下调,IGF-1R/PI3K/Akt信号通路被激活.生物信息学分析表明IGF-1R是miR-455-5p的靶基因.双荧光素酶报告基因检测、miR-455-5p 模拟物和抑制剂转染证实DAG通过抑制miR-455-5p从而激活IGF-1R/PI3K/Akt信号通路.结论:DAG通过miR-455-5p介导的IGF-1R/PI3K/Akt信号通路激活并改善胰岛素抵抗,表明抑制miR-455-5p或外源性补充DAG可能是T2DM治疗的潜在靶点.
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编辑人员丨2024/2/3
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新生大鼠缺氧缺血性脑病中miRNA表达谱的改变及分析
编辑人员丨2024/1/20
目的 通过基因芯片检测新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型中差异性表达miRNA,构建HIE中miRNA及其靶基因调控网络.方法 将7d龄新生SD大鼠12 只随机分为HIE组及假手术对照组,每组6只.采用Rice法建立新生大鼠HIE模型,造模24h取新生大鼠海马组织,基因芯片检测HIE组和假手术对照组海马组织中差异性表达的miRNA,采用生物信息软件分析相关miRNA调控的靶基因及信号通路.结果 筛选出差异性表达的miRNA共22 个,其中表达上调9 个(mm u-miR-215-5 p,mmu-miR-1249-3p,mmu-miR-3072-5p,mmu-miR-324-3p,mmu-miR-690,mmu-miR-874-5p,11_10767,11_10888,13_12928_star)、表达下调共 13 个(mmu-miR-141-3p,mmu-miR-182-5p.mmu-miR-183-5p,mmu-miR-190a-3p,mmu-miR-200a-3p,mmu-miR-200b-3p,mm u-miR-200c-3p,mmu-miR-429-3p,mmu-miR-455-3p,mmu-miR-760-5p,mmu-miR-96-5p,6_5971_star,9_8784).GO功能分析显示,差异性表达的miRNA调控基因在生物过程中主要参与调节生物生长发育、神经元形成与分化过程,KEGG 通路分析显示主要有丝裂原活化蛋白激酶信号通路被激活.结论 差异性表达的miRNA可能参与调控HIE发病的机制,将为HIE的机制研究、临床诊断及药物设计提供理论依据和新的思路.
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编辑人员丨2024/1/20
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miR-455-3p靶向调控VEGF-C对矽肺淋巴管增生的影响研究
编辑人员丨2023/10/28
目的 探究微小RNA-455-3p(miR-455-3p)在大鼠矽肺模型淋巴管增生中的调控作用,并探讨miR-455-3p靶向血管内皮生长因子-C(VEGF-C)对人淋巴内皮细胞(HLECs)管状结构形成的影响.方法 将大鼠随机分为矽肺模型组和正常对照组,矽肺模型组气管内滴注二氧化硅(SiO2)悬浊液,对照组滴注等量0.9%氯化钠溶液,采用HE、Masson、免疫组织化学染色观察肺组织病理改变及淋巴管增生情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测大鼠肺组织内 miR-455-3p、VEGF-C 表达水平;将 miR-455-3p 抑制剂(In-hibitors)及其阴性对照(NC)转染至 HLECs 中,RT-qPCR 和Western blot检测细胞内miR-455-3p、VEGF-C表达水平,划痕实验检测HLECs迁移能力,基质胶管形成实验检测管状结构形成能力,双荧光素酶报告基因验证miR-455-3p和VEGF-C的靶向关系.结果 与正常对照组比较,大鼠矽肺模型组肺间质内大量炎性细胞聚集,胶原逐渐沉积,且肺内淋巴管增生,肺组织内miR-455-3p表达水平低于对照组,VEGF-C表达水平高于对照组;HLECs转染后,与NC组比较,Inhibitors组细胞内miR-455-3p表达水平降低,VEGF-C水平升高,细胞迁移能力及管状结构形成能力增强(P<0.05);双荧光素酶报告基因证实VEGF-C为miR-455-3p的靶基因.结论 miR-455-3p可通过靶向调控VEGF-C表达从而影响HLECs的管状结构形成能力,调节淋巴管增生.
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编辑人员丨2023/10/28
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霉酚酸酯对狼疮性肾炎小鼠肾小球系膜细胞增殖、炎性反应的影响及分子机制研究
编辑人员丨2023/9/2
目的:探究霉酚酸酯(MMF)抑制狼疮性肾炎(LN)肾小球系膜细胞(GMC)增殖及炎性反应的分子机制.方法:分离、培养 LN细胞,将细胞分为:对照组,LN 组,0.01 μmol/L MMF 组,0.1 μmol/L MMF 组,1.0 μmol/L MMF组,转染 miR-NC+LN 组,转染 miR-455-3p+LN 组,转染 anti-miR-NC+0.1 μmol/L MMF 组,转染anti-miR-455-3p+0.1 μmol/L MMF组.用实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中 miR-455-3p 的相对表达水平;用CCK-8 法、流式细胞术、酶联免疫法(ELISA)、蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组细胞的增殖、凋亡率及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素 1β(IL-1β)水平,活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达水平.结果:与对照组比较,LN 组 miR-455-3p 相对表达水平、细胞凋亡率以及 Cleaved caspase-3 蛋白表达水平显著降低(均 P<0.05),细胞增殖,TNF-α、IL-1β表达水平显著升高(均 P<0.05);与 LN 组比较,0.01 μmol/L MMF组、0.1 μmol/L MMF组以及 1.0 μmol/L MMF组细胞增殖和炎症因子表达水平降低(均P<0.05),miR-455-3p、细胞凋亡率以及 Cleaved caspase-3 蛋白表达水平升高(均 P<0.05),miR-455-3p+LN 组与miR-NC+LN比较,细胞增殖和炎症因子表达水平降低(均 P<0.05),miR-455-3p 表达,凋亡率以及 Cleaved caspase-3 蛋白水平显著升高(均 P<0.05);与 anti-miR-NC+0.1 μmol/L MMF 组比较,anti-miR-455-3p+0.1 μmol/L MMF组 miR-455-3p表达,凋亡率及Cleaved caspase-3 蛋白表达显著降低,细胞增殖和炎症因子表达水平显著升高(均P<0.05).结论:MMF能够抑制LN肾小球系膜细胞的增殖和炎性反应、促进凋亡、改善LN,这一作用与 miR-455-3p的表达调控有关.
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编辑人员丨2023/9/2
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microRNA对缺血性脑卒中的作用机制
编辑人员丨2023/8/19
微RNA(miRNA)是调节基因表达的单链小非编码RNA.miRNA最初是初级miRNA,在细胞核中被修饰为前体miRNA,然后将其导出到细胞质中.进一步的转录后修饰产生一个由22~25个核苷酸组成的成熟的miRNA.成熟的miRNA与RNA诱导沉默复合体(RISC)结合.RISC加载的miRNA通过结合3′非翻译区(UTR)与mRNA相互作用,抑制了mRNA向蛋白质的翻译或mRNA的靶向降解.miRNA调节许多细胞的代谢、增殖、分化和死亡.研究表明,缺血性脑卒中的发生通常伴随miRNA表达谱异常,miRNA参与缺血性脑卒中的一系列病理生理过程.miRNA对缺血性脑卒中的作用机制主要有以下几点.①减少血栓形成.miR-19a可以降低TF并靶向SERPINE1下调PAI-1以及靶向凝血因子等各个方面,调节血小板和凝血级联反应来影响血栓的形成.②保护血脑屏障.miRNA对内皮细胞功能具有调节作用,有助于维持血脑屏障完整性.miR-126-3p可通过下调VCAM-1和E-selectin表达,减少白细胞募集,降低IL-1β和TNF-α水平,减轻血脑屏障的破坏.③调节神经炎症.miR-455-p通过下调CCR5抑制小胶质细胞活化,减少TNF-α和IL-1β的产生,使神经炎症反应减轻.④促进血管的生成.miR-15a/16-1下调VEGFA和FGF2及其受体VEGFR2和FGFR1的表达,对缺血后血管生成具有抑制作用.miR-210促进了VEGF及VEGFR-2的上调,促进血管生成.miRNA在上调或下调时可能具有治疗缺血性中风的潜力.虽然目前还没有miRNA被批准用于人类,但一些miRNA已经在临床试验中显示出治疗医学疾病的前景.本文总结了miRNA对缺血性脑卒中的作用机制,以期为治疗缺血性脑卒中提供参考.
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编辑人员丨2023/8/19
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miR-455-5p在结直肠癌中的表达及生物学特性
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨miR-455-5p在结直肠癌(CRC)中的表达及生物学特性.方法 收集40例CRC患者经手术切除的结肠和直肠癌组织标本及癌旁10cm的正常黏膜组织标本.采用qRT-PCR法检测CRC组织及癌旁正常黏膜组织中miR-455-5p的表达水平;采用脂质体转染试剂转染CRC细胞,Brdu增殖实验检测转染后CRC细胞增殖能力,流式细胞仪检测转染后CRC细胞凋亡率.应用生物信息学方法预测并验证miR-455-5p的靶基因.结果 CRC组织miR-455-5p的相对表达量低于癌旁正常黏膜组织(P<0.01).经转染后CRC细胞中,上调miR-455-5p可抑制CRC细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡.数据库预测PIK3R1可能是miR-455-5p的靶基因,上调miR-455-5p可抑制PIK3R1 mRNA及蛋白表达.结论 miR-455-5p在CRC组织中呈低表达,其生物学特性是miR-455-5p具有抑制CRC细胞生长的作用,其机制可能与调控PIK3R1的表达有关.
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编辑人员丨2023/8/6