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载雷西莫特微泡增效高强度聚焦超声消融及协同刺激免疫效应的实验研究
编辑人员丨6天前
目的:制备载雷西莫特(R848)脂质微泡(R848-MBs),观察其增强超声成像和增效高强度聚焦超声(HIFU)消融效果,并评估其协同HIFU改善肿瘤免疫微环境的能力。方法:通过薄膜水化-机械振荡法制备R848-MBs,并检测其基本表征和安全性,考察HIFU辐照R848-MBs体外控释药物作用及其体内药物代谢和生物分布情况;观察R848-MBs增强体内外超声成像效果;将6只EMT6荷瘤小鼠随机分为HIFU组和R848-MBs+HIFU组,每组3只,通过评估消融前后小鼠肿瘤区域的造影平均声强变化、肿瘤区域辐照后即刻超声图像灰度值变化和肿瘤TTC染色、肿瘤HE染色观察其凝固性坏死情况,验证R848-MBs增效HIFU消融的效果;然后将45只荷瘤小鼠随机分为对照组、Free R848组、HIFU组、Blank-MBs+HIFU组、R848-MBs+HIFU组,每组9只,治疗后第3 d随机取各组中3只小鼠处死,免疫荧光染色检测肿瘤细胞表面CRT的表达水平,流式细胞术检测淋巴结、脾脏成熟DC比例和脾脏CD8 +T细胞比例以评估R848-MBs协同HIFU改善肿瘤免疫微环境的能力,通过测量剩余各组小鼠( n=6)的肿瘤体积、观察并绘制生存曲线以评估各组治疗效果。 结果:成功制备了安全性良好的载药脂质微泡R848-MBs,微泡浓度为2.58×10 9/ml,光镜和激光共聚焦显微镜下呈球形空泡,粒径为 (1.72±0.11)μm,表面电位为(-10.16±0.73)mV,经HIFU(90 W,3 s)辐照后药物累计释放率高达 (84.81±1.58)%,体内血浆中R848浓度迅速下降,治疗后24 h R848-MBs+HIFU组肿瘤组织中的药物浓度高于R848组 ( P<0.01);体内外R848-MBs在造影模式下超声显像明显增强;同时,载药微泡还能显著增效HIFU消融效果,R848MBs+HIFU组小鼠消融前后肿瘤区域的造影平均声强变化大于R848组 ( P<0.05),HIFU联合R848-MBs组即刻超声灰度值变化(46.34±3.21)显著大于单纯HIFU组(10.67±1.53),差异有统计学意义 ( P<0.000 1),肿瘤HE染色、TTC染色可观察到凝固性坏死;体内疗效结果显示R848MBs+HIFU组具有最强的治疗效果,R848-MBs联合HIFU治疗相较于静脉注射游离R848治疗可显著延长小鼠存活时间 ( P<0.01)。此外,免疫荧光染色和流式结果显示R848-MBs联合HIFU组肿瘤组织表面CRT表达水平上升,肿瘤引流淋巴结 [(58.53±1.04)%]显著高于单纯HIFU组[(37.56±2.13)%, P<0.001],脾成熟DC比例[(70.65±1.91)%]显著高于单纯HIFU组[(36.46±3.89)%, P<0.001],脾CD8 +T细胞比例[(27.46±3.04)%]明显高于单纯HIFU组[(18.69±0.29)%, P<0.01]。 结论:载药脂质微泡R848-MBs不仅能被HIFU控释,还能增效HIFU消融,并具有良好的协同刺激肿瘤特异性免疫效应。
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编辑人员丨6天前
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脂质纳米粒载体共递送抗原和雷西莫特佐剂对黑色素瘤小鼠细胞免疫应答及瘤体生长的影响
编辑人员丨2023/11/11
目的 探讨脂质纳米粒(LNP)载体共递送抗原和雷西莫特(R848)佐剂对黑色素瘤小鼠细胞免疫应答及瘤体生长的影响.方法 取对数期生长小鼠黑色素瘤(B16F10-OVA)细胞接种于30只小鼠右侧前肢皮下构建黑色素瘤模型,模型鼠随机均分为空白(Blank)组(生理盐水100μL)、LNP+抗原组(肿瘤疫苗多肽50μg和LNP 10μg)、LNP+R848组(LNP 10μg和R8483.18μg)、R848+抗原组(肿瘤疫苗多肽50μg和R8483.18μg)及LNP+R848+抗原组(肿瘤疫苗多肽50μg、LNP 10μg及R8483.18μg),均采用肌肉注射、2次免疫、间隔7 d,免疫处理期间每2 d测量1次各组小鼠肿瘤体积的变化,第2次免疫结束后第7天麻醉处死各组小鼠,取瘤体制备细胞悬液;采用流式细胞术检测各组小鼠肿瘤细胞中CD4阳性T淋巴细胞(CD4+T)和CD8阳性T淋巴细胞(CD8+T)细胞分泌的溶酶体相关膜蛋白1(CD107a)、干扰素γ(IFN-γ)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达.结果 LNP+R848+抗原组小鼠黑色素瘤体积低于Blank组、LNP+抗原组、LNP+R848组及R848+抗原组(P<0.05);LNP+R848+抗原组小鼠肿瘤组织中CD4+T和CD8+T细胞分泌的CD107a、IFN-γ及TNF-α表达高于Blank组、LNP+抗原组、LNP+R848组及R848+抗原组(P<0.05).结论 LNP载体共递送抗原和R848佐剂可增强黑色素瘤小鼠的细胞免疫应答及抑制瘤体的生长.
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编辑人员丨2023/11/11
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雷西莫特:一种潜在的多适应证免疫调节药物
编辑人员丨2023/8/5
雷西莫特是咪喹莫特的类似物,在体外和体内都具有免疫调节作用.作为Toll样受体7和Toll样受体8激动剂,雷西莫特能刺激免疫细胞产生大量的炎性细胞因子,在促进T h1反应的同时抑制T h2反应,发挥抗病毒、抗肿瘤及抗过敏性疾病等作用.本文对雷西莫特的药物化学性质、药理作用、临床应用等进行全面综述,以期为其在皮肤科及相关专业的研究提供参考.
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编辑人员丨2023/8/5
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雷西莫特对特应性皮炎模型小鼠的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的 观察雷西莫特对特应性皮炎小鼠的治疗效果,并探究其作用机制.方法 30只BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、治疗组,每组10只.模型组及治疗组小鼠耳部予卡泊三醇搽剂(连续14 d,每天2 nmol)诱导特应性皮炎模型,同时模型组予200μL PBS每天腹腔注射、治疗组予50 nmol雷西莫特(溶于200μL PBS)每天腹腔注射;空白组小鼠不给予任何处理.实验第15天观察各组小鼠耳部皮损红斑、肿胀及鳞屑情况;采用H-E染色及甲苯胺蓝染色观察皮损组织炎症细胞浸润情况;采用ELISA检测血清IgE、IL-4、IL-13水平;采用qPCR检测皮损组织中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、γ干扰素mRNA的表达.结果 与空白组相比,模型组小鼠耳部皮肤出现明显肿胀发红、鳞屑,血清中IgE、IL-4、IL-13水平均升高(P均<0.01),说明小鼠特应性皮炎模型构建成功.与模型组小鼠相比,治疗组小鼠耳部皮肤红肿、鳞屑及炎症细胞浸润情况均好转,血清IgE、IL-4、IL-13水平均降低(P均<0.05),皮损组织中γ干扰素mRNA表达量升高(P<0.05).皮损组织中TSLP mRNA表达量在模型组和治疗组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 雷西莫特可改善特应性皮炎小鼠的皮损症状,其机制可能与调节辅助性T细胞(Th)1/Th2免疫反应、影响相关细胞因子的表达有关.
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编辑人员丨2023/8/5
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两种造模方法建立小鼠先兆子痫模型比较研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 对比分析小鼠先兆子痫(pre-eclampsia,PE)模型两种造模方法的差异,为不同类型先兆子痫动物模型的选择提供参考.方法 将24只CD-1孕鼠随机分成4组:脂多糖对照组、脂多糖组、雷西莫特(R848)对照组、R848组,每组6只.脂多糖对照组和脂多糖组于妊娠第13、14、15、16、17天分别尾静脉注射生理盐水或LPS(4 mg/kg);R848对照组和R848组于妊娠第13、15、17天分别腹腔注射R848溶剂(5%DMSO+40%PEG300+5%Tween-80+50%saline)或R848(10 mg/kg);同时于妊娠第12、14、16、18天测量尾动脉收缩压;给药后于妊娠第18天解剖,进行尿蛋白/尿肌酐检测、抗血管生成因子检测及HE染色.结果 与对照组相比,两种造模方法均出现妊娠期高血压(LPS组的妊娠第14、16、18天的血压分别为:(142.16±4.81)mmHg、(144.07±2.91)mmHg和(143.31±4.61)mmHg;R848组的妊娠第14、16、18天的血压分别为:(154.00±5.29)mmHg、(147.44±3.24)mmHg和(140.77±2.00)mmHg);尿蛋白/尿肌酐检测结果显示,LPS模型组比值升高(P<0.05),R848组无统计学差异(P>0.05);血清抗血管生成因子检测结果显示,与对照组相比,脂多糖组sFlt-1和sEng表达量无统计学差异(P>0.05),R848组血清内sFlt-1和sEng表达量均升高(P<0.01);HE结果显示,与对照组相比,R848组出现孕鼠胎盘血管慢性损伤,合胞体滋养层广泛增生.结论 两种造模方法均能使孕鼠出现高血压、胎儿生长受限、内皮功能障碍等PE症状.腹腔注射R848造模法较尾静脉注射LPS法对动物的损伤程度更严重,且给药方式为腹腔注射,操作简单.
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编辑人员丨2023/8/5
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丹皮酚对雷西莫特诱导的巨噬细胞M1极化的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的 观察丹皮酚是否能够影响巨噬细胞M1极化.方法 用Toll样受体7/8激动药雷西莫特(R848)刺激RAW264.7细胞建立M1型巨噬细胞模型.将细胞分为对照组、模型组、高剂量实验组.对照组细胞正常培养;模型组用2μg·mL-1的R848处理24 h,高剂量实验组用2μg·mL-1 R848和30μmol·L-1丹皮酚处理24 h.以酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌水平;以流式细胞术检测CD80阳性表达的巨噬细胞比例;以实时荧光定量多聚核苷酸链反应(Q-PCR)检测TNF-α、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA的表达水平;以蛋白质印迹法检测iNOS蛋白表达情况.结果 高剂量丹皮酚干预R848诱导的M1极化24 h后,对照组、模型组和高剂量实验组上清中TNF-α水平分别为(355.55±16.45)、(552.69±18.09)和(447.71±22.71)ng·L-1;CD80阳性细胞比例分别为(16.29±0.50)%、(43.57±3.78)%和(36.08±1.40)%;IL-1βmRNA表达水平分别为1.04±0.15、60.02±12.92和34.69±1.75;TNF-αmRNA表达水平分别为1.00±0.04、13.69±0.25和12.20±0.46;iNOS蛋白表达水平分别为1.00±0.00、1.11±0.05和0.91±0.03.模型组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量实验组上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 丹皮酚能够抑制R848诱导的巨噬细胞M1极化.
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编辑人员丨2023/8/5