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穿山龙薯蓣皂苷通过调控自噬治疗胶原诱导性关节炎小鼠模型的机制
编辑人员丨2天前
目的 探讨穿山龙薯蓣皂苷通过自噬治疗胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠的作用机制.方法 通过鸡Ⅱ型胶原乳剂建立CIA模型小鼠,初次免疫DBA1小鼠(0.1 mL),第21天后再次给予相同剂量刺激.加强免疫后将胶原免疫的50只小鼠随机分组为CIA模型组、雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷低、中、高剂量组,另有10只小鼠注射等量生理盐水作为对照组.在对小鼠进行连续14天灌胃治疗并观察各组小鼠足爪的炎症程度,取下各组小鼠脾、腹股沟淋巴结和踝关节、膝关节,对踝关节、膝关节进行HE染色,检测各组淋巴结、脾组织中mRNA和蛋白质水平的相关自噬指标.结果 与CIA模型组相比,穿山龙薯蓣皂苷高剂量组关节炎指数(AI)评分降低(P<0.05);雷公藤组及穿山龙薯蓣皂苷组足爪厚度差值减小(P<0.01).与对照组相比,CIA模型组体质量明显下降(P<0.01);小鼠膝关节滑膜和足爪踝关节HE染色结果显示CIA模型组对比对照组出现免疫细胞浸润、骨质侵蚀、软骨破坏和滑膜增生的症状;雷公藤组与穿山龙薯蓣皂苷中、高剂量组对CIA模型有不同程度的治疗作用,可以减轻和预防症状.与CIA模型组相比,雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷治疗组中LC3、Beclin-1的mRNA水平和蛋白水平的表达升高,p62的mRNA水平和蛋白水平的表达降低.结论 穿山龙薯蓣皂苷可能通过抑制自噬对CIA模型小鼠起到治疗作用.
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编辑人员丨2天前
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二甲双胍预处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤时AMPK/PINK1信号通路的影响
编辑人员丨1周前
目的:评价二甲双胍预处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤时单磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)/PTEN诱导假定激酶1(PINK1)信号通路的影响。方法:清洁级健康雄性SD大鼠36只,6周龄,体质量120~160 g,采用随机数字表法分为3组( n=12):糖尿病假手术组(DS组)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DI/R组)和糖尿病心肌缺血再灌注+二甲双胍预处理组(DI/R+Met组)。高脂高糖饲料喂养4周后,通过单次腹腔注射1%链脲佐菌素40 mg/kg制备2型糖尿病模型。采用阻断左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。DI/R+ Met组于心肌缺血前1周给予每天1次二甲双胍200 mg/kg灌胃处理。于再灌注120 min时采集股静脉血样,采用ELISA法检测血清CK-MB和cTnI浓度;随后处死大鼠取心肌组织,采用HE染色法观察病理学结果;采用伊文氏蓝和TTC双重染色法确定心肌梗死体积百分比;采用Western blot法检测心肌自噬相关蛋白Beclin-1、PINK1、磷酸化AMPK(p-AMPK)的表达和微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/Ⅰ)的比值。 结果:与DS组比较,DI/R组和DI/R+ Met组心肌梗死体积百分比、血清CK-MB和cTnI浓度升高,心肌Beclin-1、p-AMPK和PINK1表达上调,LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高( P<0.05),病理学损伤加重;与DI/R组比较,DI/R+ Met组心肌梗死体积百分比、血清CK-MB和cTnI浓度降低,心肌Beclin-1、p-AMPK和PINK1表达上调,LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高( P<0.05),病理学损伤减轻。 结论:二甲双胍预处理减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制与激活AMPK/PINK1信号通路上调线粒体自噬水平有关。
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编辑人员丨1周前
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靶向Neddylation修饰通路抗结直肠癌作用及其机制研究进展
编辑人员丨1周前
蛋白类泛素化修饰Neddylation是一种重要的蛋白质翻译后修饰。Neddylation修饰在结直肠癌中过度活化,并且与结直肠癌患者的预后不良密切相关。小分子抑制剂MLN4924通过阻断Neddylation修饰通路诱导结直肠癌细胞凋亡、自噬、DNA损伤及细胞衰老发挥抗肿瘤效应。此外,MLN4924还可作为化学增敏剂和放射增敏剂提高结直肠癌的治疗效果。本文对Neddylation修饰及MLN4924在结直肠癌中的作用机制作一综述。
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编辑人员丨1周前
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低剂量脂多糖诱导下人牙周膜干细胞对巨噬细胞促炎因子表达的影响及其机制研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cell,HPDLSC)经低剂量脂多糖作用后,对巨噬细胞促炎因子表达的影响及其机制。方法:培养原代HPDLSC,并以磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)、100 μg/L或10 mg/L 脂多糖处理48 h,收集各自条件培养基(conditioned medium,CM),分别与人单核白血病细胞(human monocyte leukemic cell,THP-1)源性巨噬细胞共培养48 h,对应实验分组为PBS处理的HPDLSC条件培养基(PBS-treated HPDLSC-derived CM,CM-C)组、低剂量脂多糖处理的HPDLSC条件培养基(low dose lipopolysaccharide-treated HPDLSC-derived CM,CM-L)组和高剂量脂多糖处理的HPDLSC条件培养基(high dose lipopolysaccharide-treated HPDLSC-derived CM,CM-H)组。实时荧光定量PCR检测各组巨噬细胞促炎因子相关基因白介素(interleukin,IL)-6、IL-8、IL-12、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA表达;CM-C、CM-L组核因子E2相关因子2 [nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2,NRF2]及其下游抗氧化基因谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(磷酸):醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinone dehydrogenase 1,NQO1]及血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)mRNA的表达。同时以蛋白质免疫印迹法检测CM-C和CM-L组巨噬细胞胞质与胞核NRF2蛋白、GCLC及HO-1蛋白表达;2′,7′-二氯荧光素探针检测CM-C和CM-L组巨噬细胞内活性氧水平,以平均荧光强度(mean fluorescent intensity,MFI)表征结果。结果:CM-H组巨噬细胞内促炎因子IL-6、IL-8、IL-12及TNF-α mRNA表达(2.332±0.594、3.601±0.639、2.120±0.677、2.468±0.236)均较CM-C组(1.000±0.321、1.000±0.151、1.000±0.059、1.000±0.095)显著上调( P<0.05);而CM-L组巨噬细胞内IL-6、IL-12及TNF-α mRNA表达(0.056±0.002、0.215±0.024、0.567±0.071)均较CM-C组(1.000±0.209、1.000±0.220、1.000±0.220)显著下调( P<0.05)。在mRNA水平,NRF2表达在CM-L组(1.864±0.198)较CM-C组(1.000±0.094)显著上调( P<0.05);在蛋白水平,CM-L组巨噬细胞胞质及胞核NRF2表达(1.175±0.104、1.308±0.082)均较CM-C组(1.000±0.025、1.000±0.049)显著升高( P<0.05)。CM-L组巨噬细胞NRF2下游抗氧化基因GCLC、NQO1 mRNA表达(1.786±0.278、1.444±0.078)均较CM-C组(1.000±0.139、1.000±0.226)显著上调( P<0.05),且CM-L组GCLC、HO-1蛋白水平(1.159±0.036、1.412±0.075)均显著高于CM-C组(1.000±0.050、1.000±0.013)( P<0.05)。同时CM-L组巨噬细胞活性氧水平(MFI:123 419±1 302)较CM-C组(MFI:139 193±1 241)显著降低( P<0.05)。 结论:低剂量脂多糖可以诱导HPDLSC激活巨噬细胞NRF2信号通路调控氧化应激反应,下调巨噬细胞促炎因子表达。
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编辑人员丨1周前
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基于生信分析探讨吸烟肺腺癌患者自噬相关基因及其机制
编辑人员丨1周前
目的:探索吸烟肺腺癌组织中和自噬相关联的基因,并确定吸烟导致肺腺癌的潜在的自噬相关因素和预后因素。方法:从GEO数据库下载2个数据集(GSE32863和GSE75037)的基因表达谱,同时下载来自TCGA数据库的吸烟肺腺癌患者的数据集。采用R中的微阵列数据包的线性模型探索来自吸烟的肺腺癌患者的样本与癌旁肺组织之间的差异基因。采用数据库DAVID进行差异基因的富集分析。采用相互作用基因/蛋白质检索的搜索工具和Cytoscape软件获得蛋白质-蛋白质相互作用网络并识别关键基因。此外,构建自噬相关基因和差异基因之间的网络。采用Kaplan-Meier分析总生存率。结果:在GSE32863数据集确定了71个差异基因,在GSE75037数据集确定了641个差异基因,在TCGA数据集中确定了4 070个差异基因。3个数据集的交集显示了52个差异基因,并选择这些数据进行进一步研究。采用GO基因功能注释将52个差异基因分为生物学过程、分子功能和细胞组分3个类别,进行京都基因和基因组百科全书分析。总共有17个差异基因和自噬相关基因密切关联,其中LYVE1、RGCC、FOSB、ETV4、CDC20与自噬基因关联最为密切。LYVE1、CDC20的表达量在吸烟肺腺癌人群和不吸烟肺腺癌中比较,差异均有统计学意义( P值均<0.05),且与肺腺癌患者总生存率相关( P值均<0.05),RGCC、FOSB、ETV4表达量在吸烟肺腺癌人群和不吸烟肺腺癌中比较,差异均无统计学意义( P值均>0.05)。 结论:确定了LYVE1,CDC20为吸烟肺腺癌患者特异性的自噬相关基因。这些基因与患者的预后密切相关,可能为肺腺癌的治疗提供新的靶点。
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编辑人员丨1周前
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硝酸盐对脑胶质瘤细胞生物活性及自噬的影响分析
编辑人员丨1周前
目的:研究饥饿条件下不同浓度硝酸盐对脑胶质瘤C6和U87细胞生物活性的影响以及自噬相关蛋白的变化。方法:将C6和U87细胞分为对照组和饥饿组,对照组给予常规培养基培养,饥饿组给予等体积的Hank′s平衡盐溶液培养。两组细胞分别应用0 mmol/L、0.05 mmol/L、0.20 mmol/L和0.50 mmol/L的硝酸盐处理12 h和24 h,然后采用噻唑蓝比色法检测各组细胞的增殖情况;流式细胞术检测各组细胞的凋亡水平;实时荧光定量PCR实验检测各组p62的表达水平;蛋白质免疫印迹实验检测自噬相关蛋白p62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ及硝酸盐转运蛋白(SLC17A5)的表达水平。结果:与对照组相比,饥饿状态引起C6和U87细胞的增殖能力下降,C6细胞培养12 h和24 h后分别下降了(63.60±2.40)%和(77.10±2.70)%;U87细胞分别下降了(65.60±2.70)%和(86.80±3.20)%(均 P<0.01);给予0.20 mmol/L和0.50 mmol/L的硝酸盐处理后,饥饿组C6和U87细胞的增殖能力与0 mmol/L组比较均明显下降(均 P<0.05),而0.05 mmol/L的硝酸盐浓度对各组细胞的增殖能力均无明显影响(均 P>0.05)。流式细胞术检测显示,C6细胞对照组给予0.20 mmol/L和0.50 mmol/L硝酸盐后,各组膜联蛋白Ⅴ和碘化丙啶的阳性细胞数比较差异均无统计学意义(均 P>0.05);饥饿12 h后,0 mmol/L组膜联蛋白Ⅴ和碘化丙啶的阳性细胞所占比率分别为(13.50±0.71)%和(7.80±0.34)%;0.20 mmol/L组分别为(17.30±0.82)%和(10.30±0.42)%;0.50 mmol/L组分别为(19.40±0.75)%和(12.60±0.75)%,组间比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)。U87各组细胞的凋亡水平也呈现相同的变化趋势。实时荧光定量PCR实验显示,对照组给予不同浓度的硝酸盐不影响C6和U87细胞p62 mRNA的表达水平(均 P>0.05);而饥饿组给予不同浓度的硝酸盐后C6和U87细胞p62 mRNA的表达水平均明显上调(均 P<0.05)。蛋白质免疫印迹实验显示,饥饿组给予不同浓度的硝酸盐后LC3Ⅱ/Ⅰ的比值明显下调,而p62和SLC17A5的表达水平明显上调(均 P<0.05)。 结论:硝酸盐可抑制饥饿状态下胶质瘤细胞的增殖能力和细胞内的自噬水平,从而诱导细胞发生凋亡。
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编辑人员丨1周前
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内质网应激和自噬在PM 2.5诱导的呼吸系统疾病中的作用
编辑人员丨1周前
内质网应激和细胞自噬均是细胞维持稳态的重要调节机制。内质网是真核细胞中合成、折叠和运输蛋白质的重要细胞器。当内质网中的蛋白质折叠发生紊乱时,大量未折叠或错误折叠的蛋白质出现积累,引起的后续反应称为内质网应激。当内质网应激无法清除折叠紊乱的蛋白质时,细胞自噬将被激活,以清除这类蛋白质,维持细胞稳态。PM 2.5作为一类环境污染物,可激活内质网应激与自噬,引起慢性阻塞性肺疾病、缺血性心脏病、脑血管病等多种疾病。本文就PM 2.5激活内质网应激和自噬在呼吸系统疾病中的作用作一综述,旨在为相关疾病的临床治疗提供新思路。
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编辑人员丨1周前
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人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病大鼠模型脑片神经元自噬小体相关蛋白表达的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病(AD)大鼠模型脑片神经元自噬小体相关蛋白表达的影响及其分子机制。方法:选取6周龄SD大鼠断头取脑制备海马脑片,将海马脑片随机分为空白对照组、模型组及低、中、高浓度Rg1组,每组10张脑片。模型组人工脑脊液中加入Aβ 1-42(终浓度5 μmol/L)处理2 h造模,低、中、高浓度Rg1组加入Aβ 1-42(终浓度5 μmol/L)作用2 h造模后分别加入Rg1致终浓度分别为60 μmol/L、120 μmol/L、240 μmol/L作用3 h;空白对照组不给予任何干预药物。干预结束后采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组海马脑片病理学改变情况;采用透射电镜检测各组海马脑片自噬小体情况;采用Western blot检测各组脑片自噬相关蛋白P62、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平以及Aβ 1-42和Shank蛋白表达水平。 结果:HE染色结果显示,模型组海马神经元排列紊乱,存在神经元死亡和缺失,Rg1各组海马神经元排列及缺失情况较模型组改善,以高浓度Rg1组改善最明显;透射电镜结果显示,模型组脑片自噬小体较空白对照组明显增多,Rg1各组脑片中自噬小体均较模型组减少。蛋白质印迹结果显示,与空白对照组比较,模型组脑片Shank1、P62和LC3-Ⅰ蛋白水平减少(均 P<0.05),Aβ 1-42、LC3-Ⅱ蛋白水平升高(均 P<0.05);与模型组比较,各Rg1组脑片Shank1、P62和LC3-Ⅰ蛋白表达水平均升高(均 P<0.05)、Aβ 1-42、LC3-Ⅱ蛋白水平均降低(均 P<0.05),其中以高浓度Rg1组最明显。 结论:人参皂苷Rg1可能通过上调AD大鼠模型海马脑片Shank1、P62、LC3-Ⅰ蛋白表达,抑制自噬作用,发挥大脑神经元的保护作用。
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编辑人员丨1周前
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口腔扁平苔藓病损组织自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3B、p62和Beclin1的表达及意义
编辑人员丨1周前
目的:了解自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B,LC3B)、p62及自噬关键分子Beclin1在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)病损组织中的表达变化及其与OLP临床病理特征的关系,探讨细胞自噬在OLP病因机制中的作用及意义。方法:于贵州医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙周黏膜科2017年10月至2019年12月的就诊患者中,选取41例OLP患者的病损组织(OLP组,21例糜烂型OLP,20例非糜烂型OLP)及15例来自贵州医科大学附属口腔医院口腔颌面外科手术中收集的正常口腔黏膜组织(对照组),采用免疫组织化学技术(immunohistochemistry,IHC)与实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测OLP组织中LC3B、p62、Beclin1的蛋白及mRNA水平,采用蛋白质印迹法检测上述41例OLP病损的16例组织(8例糜烂型OLP,8例非糜烂型OLP)中LC3B、p62、Beclin1的蛋白表达量及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值。分析LC3B、p62、Beclin1及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值与OLP临床病理特征的关系。结果:IHC结果显示,OLP病损组织中LC3B、p62蛋白阳性表达率[分别为68%(28/41)、59%(24/41)]均显著高于对照组(分别为5/15、3/15)(χ 2=5.55, P=0.019;χ 2=5.55, P=0.015);糜烂型OLP组织中LC3B、p62蛋白阳性表达率[分别为86%(18/21)、76%(16/21)]均显著高于非糜烂型OLP[分别为50%(10/20)、40%(8/20)](χ 2=4.50, P=0.034;χ 2=5.53, P=0.019);OLP病损组织中Beclin1蛋白的阳性表达率[20%(8/41)]较对照组(7/15)显著降低(χ 2=4.13, P=0.042),但Beclin1蛋白阳性表达率在OLP两型间差异无统计学意义( P>0.05)。RT-qPCR结果显示,OLP组织中LC3B、p62 mRNA表达水平[分别为2.78(1.59,6.15)、4.30(2.34,6.29)]均显著高于对照组[分别为1.05(0.88,1.21)、1.12(0.89,1.36)]( Z=-4.56, P<0.001; Z=-4.78, P<0.001),糜烂型OLP组LC3B、p62 mRNA表达水平均显著高于非糜烂型OLP( Z=-2.87, P=0.004; Z=-2.95, P=0.003),而Beclin1在OLP组织中的mRNA表达显著低于对照组( Z=-2.43, P=0.015),但在OLP两型间差异无统计学意义( P>0.05)。蛋白质印迹法结果显示,OLP组织中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值显著高于对照组( t=-2.45, P=0.021),非糜烂型OLP组织中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值显著高于糜烂型OLP( t=-2.38, P=0.032)。Spearman相关性分析显示,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值与OLP临床分型、基底细胞液化变性程度均呈显著负相关关系( r=-0.57, P=0.021; r=-0.54, P=0.032),与病程及淋巴细胞浸润程度无显著相关性( P>0.05)。 结论:自噬相关因子LC3B、p62与Beclin1在OLP病损形成及发展中可能发挥了一定作用;与非糜烂型OLP相比,糜烂型OLP的自噬水平相对不足,这可能导致糜烂型OLP局部病损破坏程度加重;细胞自噬异常可能在OLP病损形成中起重要作用。
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编辑人员丨1周前
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高氧诱发幼鼠急性肺损伤时Wnt/β-catenin信号通路与自噬的关系
编辑人员丨1周前
目的:评价高氧诱发幼鼠急性肺损伤时Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路及与自噬的关系。方法:清洁级健康雄性SD幼鼠24只,14日龄,体质量40~50 g,采用随机数字表法分为4组( n=6):对照组(C组)、高氧诱发急性肺损伤(HALI)组、HALI+IWP-2组(HI组)和HALI+DMF组(HD组)。采用吸入高浓度氧气(氧浓度>90%)72 h的方法制备HALI模型。于制模前30 min,HI组腹腔注射IWP-2 15 mg/kg,HD组腹腔注射相同容量DMF溶剂,C组与HALI组腹腔注射相同容量生理盐水。各组于每日同一时间点给药,连续给药3 d。制模结束后,经颈总动脉取血标本行血气分析,计算氧合指数(OI);然后深麻醉下处死幼鼠,取肺组织,测定湿重/干重(W/D)比值,光镜下观察肺组织病理学结果并行肺损伤评分,采用ELISA法测定IL-6、IL-1β和TNF-α的含量,Western blot法检测Wnt3a、β-catenin、微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin1和p62的表达,计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。 结果:与C组比较,HALI组、HI组和HD组OI降低,肺组织W/D比值、肺损伤评分、IL-6、IL-1β和TNF-α含量升高,Wnt3a、β-catenin和Beclin1表达上调,p62表达下调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高( P<0.05);与HALI组比较,HI组OI降低,肺组织W/D比值、肺损伤评分、IL-6、IL-1β和TNF-α含量升高,Wnt3a、β-catenin和p62表达下调,Beclin1表达上调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高( P<0.05),HD组上述指标差异无统计学意义( P>0.05);与HI组比较,HD组OI升高,肺组织W/D比值、肺损伤评分、IL-6、IL-1β和TNF-α含量降低,Wnt3a、β-catenin和p62表达上调,Beclin1表达下调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低( P<0.05)。 结论:Wnt/β-catenin信号通路可能通过对自噬的负向调控参与幼鼠HALI的过程。
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编辑人员丨1周前