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卵巢肿瘤结构域蛋白酶1在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用:与TAK1-MAPK信号通路的关系
编辑人员丨4天前
目的:评价卵巢肿瘤结构域蛋白酶1(OTUD1)在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用及其与转化生长因子β活化激酶1 (TAK1)-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系。方法:雄性野生型和OTUD1基因敲除的C57BL/6N小鼠各20只,6~8周龄,体质量20~25 g。采用随机数字表法分别分为野生型假手术组(WT-Sham组)、野生型脓毒症组(WT-SEP组)、OTUD1基因敲除型假手术组(KO-Sham组)和OTUD1基因敲除SEP组(KO-SEP组),每组10只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型。于术后24 h时处死小鼠,采集腹主动脉血样,取肺组织。采用血气分析仪行血气分析,计算氧合指数(OI),光镜下观察肺组织形态学并计算肺损伤评分,确定肺组织湿重/干重(W/D)比值,测定髓过氧化物酶(MPO)活性;采用ELISA法测定血浆TNF-α和IL-6浓度,Western blot法检测肺组织OTUD1、磷酸化(p-)TAK1、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)的表达。结果:与WT-Sham组比较,WT-SEP组小鼠PaO 2和OI降低,肺损伤评分、W/D比值、MPO活性、血浆TNF-α和IL-6浓度升高,肺组织OTUD1、p-TAK1、p-p38、p-JNK和p-ERK表达上调( P<0.05);与WT-SEP组比较,KO-SEP组小鼠PaO 2和OI降低,肺损伤评分、W/D比值、MPO活性、血浆TNF-α和IL-6浓度升高,肺组织p-TAK1、p-p38、p-JNK和p-ERK表达上调( P<0.05)。 结论:OTUD1参与了脓毒症小鼠急性肺损伤的内源性保护机制,可能与抑制TAK1-MAPK信号通路激活,降低炎症反应有关。
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编辑人员丨4天前
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去泛素化酶UCH-L3和自噬基因LC3Ⅱ在急性髓细胞白血病诊断中的临床应用研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨自噬和UCH-L3在急性髓细胞白血病发生发展过程中的作用机制和相互关系,为白血病的诊断及治疗提供新的靶点和策略.方法 选取2014至2015年大连医科大学附属第一医院收治的84例AML患者(男47例,女37例)及健康体检对照组25名(男13名,女12名).AML初发组40例(男24例,女16例),中位年龄54岁(23~85岁);缓解组30例(男14例,女16例),中位年龄45岁(22~74岁);难治组14例(男9例,女5例),中位年龄50岁(18~80岁),其中M1型3例、M2型42例、M3型18例、M4型3例及M5型18例.HL-60细胞采用Real Time PCR及Western Blot法检测TCID处理前后UCH-L3和LC3II的表达变化.AML患者及对照组采用Real Time PCR方法检测外周血单个核细胞UCH-L3和LC3II基因mRNA的表达情况;比较其在初发组、缓解组、难治组及对照组间表达情况;分析AML不同型别之间UCH-L3和LC3II的表达水平;比较AML初发组LC3Ⅱ基因表达的高低与临床特征、临床分期、实验室检查结果及治疗效果的关系.追踪同一患者治疗前后UCH-L3及LC3ⅡmRNA的表达变化.计量资料用t检验,率的比较用χ2检验;相关性分析采用秩相关检验;不符合正态分布的数据用非参数检验.结果 TCID处理HL-60细胞后,UCH-L3及LC3 II在基因和蛋白水平上与未处理组相比表达均下调,差异有统计学意义(t=-29.435及-8.105,P均<0.05);AML初发组的UCH-L3表达量较健康对照组下调,差异有统计学意义(Z=-3.87,P<0.05);AML缓解组UCH-L3表达量与初发组和难治组相比均高表达,差异有统计学意义(Z分别为-6.70和-4.09,P均<0.05);AML初发组LC3Ⅱ的表达量与健康对照组,缓解组和难治组相比均高表达,差异有统计学意义(Z分别为-6.96、-5.32和-3.52,P均<0.05);LC3Ⅱ高表达组患者细胞遗传学异常更为常见(χ2=6.510,P<0.05);同一患者治疗前后UCH-L3及LC3Ⅱ的相对表达量均有显著差异(t=5.315及-7.353,P均<0.05),经化疗缓解后UCH-L3的表达量较初发治疗前上调,而LC3Ⅱ的表达量下调;初发与缓解组的AML患者各型别间UCH-L3及LC3Ⅱ的相对表达量无差异(F分别为0.014及0.143,P均>0.05).结论 UCH-L3和自噬可以通过相互协同作用而调控AML的发生发展.
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编辑人员丨2023/8/6
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蛋白泛素化修饰调控炎性肠疾病发生和发展的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
炎性肠疾病是一种慢性胃肠道功能紊乱的炎症性疾病.泛素化是一类重要的蛋白质翻译后修饰方式.近年来关于泛素化去泛素化系统在炎性肠疾病发生和发展中的作用已成为研究热点.目前蛋白泛素化修饰调控炎性肠疾病过程所需的E3泛素连接酶中,分子生物学研究较为清楚的有环指蛋白183(RNF183)、环指蛋白20(RNF20)、Itch和锌指蛋白A20.其中RNF183可靶向核因子κB抑制蛋白α(IκBα)泛素化降解促进NF-κB活化;RNF20促进组蛋白H2 B单泛素化从而下调相关炎症因子的转录;Itch促进维甲酸核孤儿受体γt泛素化降解抑制IL-17介导的肠炎;A20以其特有的泛素化和去泛素化双重活性影响炎性肠疾病的发展.本文综述了以上分子在炎性肠疾病发生、发展和转归中的作用及调控机制.
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编辑人员丨2023/8/6
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胰腺癌中Ring1B、LSD1及P16表达及其与预后的关系
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨胰腺癌中E3泛素连接酶亚单位Ring1B、组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)及细胞周期调节因子P16表达与及其与患者预后的关系.方法:用免疫组化法检测85例胰腺癌患者手术标本(癌组织与癌旁组织)中LSD1、Ring1B与P16蛋白的表达及分布,并选取其中6对癌组织和癌旁组织,用qRT-PCR和Western blot法检测mRNA和蛋白表达;分析三者在胰腺癌组织中表达的相关性,及其与患者生存的关系.结果:免疫组化结果显示,Ring1B与LSD1蛋白主要表达于细胞浆,P16主要表达于胞核;Ring1B与LSD1在胰腺癌组织中表达明显高于癌旁组织,而P16的表达明显低于癌旁组织(均P<0.05);在胰腺癌组织中Ring1B、LSD1的表达与P16的表达均呈负相关(r=-476;r=-0.673,均P<0.05).qRT-PCR结果显示,胰腺癌组织中Ring 1B和LSD1的mRNA的平均相对表达量均明显高于癌旁组织(8.908vs.1.947;7.126 vs.1.940,均P<0.05),P16的mRNA的平均相对表达量明显低于癌旁组织(1.269vs.5.237,P<0.05);Western blot结果显示,三者的蛋白表达趋势与mRNA表达一致.生存分析显不,Ring1B、LSD1高表达患者生存率均分别低于其低表达患者(x 2=8.958,P=0.012;x 2=8.856,P=0.010),而P16高表达患者生存率高于其低表达患者(x 2=7.867,P=0.024).结论:胰腺癌组织中Ring 1B与LSD1表达升高,P16表达降低;Ring1B、LSD1可能分别通过组蛋白泛素化和去甲基化调控P16的表达,从而影响胰腺癌预后.
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编辑人员丨2023/8/6
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Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与AMPK∕mTOR信号通路的关系
编辑人员丨2023/8/6
目的 评价Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶( HDAC)在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与AMP依赖的蛋白激酶∕哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK∕mTOR)信号通路的关系.方法SPF级健康成年雄性SD大鼠,体重210~220 g,腹腔注射柠檬酸盐-链脲佐菌素60 mg∕kg,建立Ⅰ型糖尿病模型,8周后用于实验.取糖尿病大鼠48只,采用随机数字表法分为4组( n=12):假手术组(S组) 、心肌缺血再灌注组(I∕R组)、心肌缺血再灌注+I型HDAC抑制剂MS-275组( I∕R+MS组)和心肌缺血再灌注+MS-275+AMPK抑制剂Compound C组( I∕R+MS+CC组).采用结扎冠状动脉左前降支45 min,再灌注180 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型. I∕R+MS组腹腔注射MS-275 10 mg∕kg,连续7 d,1次∕d,给药结束后制备心肌缺血再灌注损伤模型;I∕R+MS+CC组于缺血前30 min静脉注射AMPK抑制剂Compound C 0.5 mg∕kg.于再灌注结束时,处死6只大鼠,测定心肌梗死体积;另取6只大鼠,右颈内动脉采血后处死,采用ELISA法检测血清CK-MB和LDH的水平,West-ern blot法测定心肌组织磷酸化AMPK (p-AMPK)、AMPK、磷酸化mTOR(p-mTOR)、mTOR、泛素结合蛋白(P62)和微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、LC3Ⅱ的表达水平,计算 p-AMPK∕AMPK 比值、p-mTOR∕mTOR比值和LC3Ⅱ∕Ⅰ比值.结果 与SH组比较,I∕R组、I∕R+MS组和I∕R+M+CC组心肌梗死体积、血清CK-MB和LDH水平升高,I∕R+MS组心肌组织p-AMPK∕AMPK比值和LC3Ⅱ∕Ⅰ比值升高,p-mTOR∕mTOR比值降低,P62表达下调(P<0. 05),I∕R组和 I∕R+ M+CC组心肌组织 p-AMPK∕AMPK比值、p-mTOR∕mTOR比值、LC3Ⅱ∕Ⅰ比值和P62表达差异无统计学意义( P>0. 05);与I∕R组比较,I∕R+MS组心肌梗死体积、血清CK-MB和LDH水平降低,心肌组织p-AMPK∕AMPK比值和LC3Ⅱ∕Ⅰ比值升高,p-mTOR∕mTOR比值降低,P62表达下调(P<0. 05),I∕R+M+CC组上述指标差异无统计学意义(P>0. 05);与I∕R+MS组比较,I∕R+M+CC组心肌梗死体积、血清CK-MB和LDH水平升高,心肌组织p-AMPK∕AMPK比值和LC3Ⅱ∕Ⅰ比值降低,p-mTOR∕mTOR比值升高,P62表达上调( P<0. 05).结论 Ⅰ型HDAC通过增强AMPK∕mTOR信号通路调控的细胞自噬水平,参与糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤.
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编辑人员丨2023/8/6
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去泛素化酶OTUD6A基因敲除小鼠的构建及表型初步分析
编辑人员丨2023/8/5
目的 建立去泛素化酶OTUD6A基因敲除小鼠模型,并对该模型进行初步表型分析.方法 基于CRIS-PR/Cas9基因编辑技术构建OTUD6A基因敲除小鼠;利用PCR、qPCR和Western blot技术(WB)分别在DNA水平、mRNA水平和蛋白水平上检测OTUD6A基因的表达;统计雄性OTUD6A纯合敲除(OTUD6A-/-)小鼠和雌性OTUD6A杂合子(OTUD6A+/-)小鼠交配所得后代各基因型小鼠比例及生长发育情况,对小鼠各组织器官利用苏木素-伊红染色(HE染色)进行病理学分析.结果 成功建立OTUD6A基因敲除小鼠模型,该基因敲除小鼠可正常生长繁殖并符合伴性遗传定律.与同窝野生型(WT)小鼠相比,纯合敲除(OTUD6A-/-)小鼠在体型和体质量上无显著差异,主要组织脏器也无明显的病理学异常.结论 成功构建OTUD6A基因敲除小鼠模型.纯合敲除(OTUD6A-/-)小鼠可正常生长发育,与WT小鼠相比无显著差异.
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编辑人员丨2023/8/5
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去泛素化酶OTUD3调控胆固醇酯化酶SOAT1蛋白稳定性的机制
编辑人员丨2023/8/5
目的 鉴定胆固醇酯化酶甾醇O-酰基转移酶1(SOAT1)的去泛素化酶(DUB),探讨维持SOAT1蛋白稳定性的分子机制.方法 采用Western blot方法检测多种肝癌细胞系中SOAT1的表达,在SOAT1表达较低的肝癌细胞系HCCLM3中加入蛋白酶体抑制剂MG132后检测SOAT1蛋白水平的变化,筛选人源卵巢肿瘤相关蛋白酶(OTU)家族中与SOAT1相互作用的DUB分子,通过泛素化实验检测其对SOAT1的去泛素化效应.结果 SOAT1蛋白稳定性受到泛素-蛋白酶体系统的调控,对人源OTU家族进行无偏性筛选,显示OTUD3可以与SOAT1特异性结合,通过去除SOAT1的多聚泛素化,维持SOAT1的蛋白稳定性.结论 在肝癌细胞中OTUD3是SOAT1的一个DUB,参与调控SOAT1蛋白稳定性.
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编辑人员丨2023/8/5
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去泛素化酶在肿瘤上皮间质转化中的作用
编辑人员丨2023/8/5
肿瘤的侵袭和转移是加剧肿瘤恶化的主要原因,也是导致患者预后不良的根本原因.近年来大量研究发现,大部分肿瘤的转移都依赖于上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的发生,此外EMT也与肿瘤干性和肿瘤耐药等诸多肿瘤恶性行为密切相关,因此有效的抑制EMT的发生将可能极大的有利于肿瘤的治疗.去泛素化酶(deubiquitinating enzymes,DUBs)的主要功能之一就是通过移除底物蛋白质上泛素链,避免其通过泛素蛋白酶体途径降解,来维持细胞内蛋白质水平的动态平衡.去泛素化酶作为调节蛋白质泛素化修饰的一类重要酶类,其异常表达或酶活性的改变通常都会导致疾病的发生.众多研究发现,部分去泛素化酶在肿瘤侵袭和转移过程中表达失衡,在肿瘤转移的过程中扮演着重要的角色.EMT是指由上皮型细胞转变为间质型细胞的动态细胞生物学过程,在该过程中涉及到例如Snial1、Slug、ZEB1等EMT相关转录因子和细胞表面的例如E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白等分子标志物表达水平的变化.这些蛋白质通常具有不稳定性,易被降解等特征.EMT过程的发生,涉及到许多蛋白质稳定性的调节,而去泛素化酶作为一类维持蛋白质稳定的重要酶类,在调节这些蛋白质的稳定性方面发挥着重要的作用.EMT的发生也与TGF-β通路、Wnt通路等细胞内众多信号通路的异常活化密不可分,去泛素化酶通过介导这些信号通路的活化,从而间接的调节EMT发生发展.去泛素化酶通过调节EMT相关分子或EMT相关信号通路等多种方式直接或间接影响EMT进展,因此,通过靶向于去泛素化酶抑制肿瘤的侵袭和转移,将为肿瘤治疗提供新的治疗手段和方案,从而有效的推动肿瘤的治疗.本文主要就去泛素化酶在调节EMT相关分子以及信号通路等方面,阐述去泛素化酶在EMT过程中所发挥的重要作用及其作为肿瘤治疗靶点的可能性.
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编辑人员丨2023/8/5
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高表达OTUD3对C6星形胶质瘤细胞增殖的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的 探究高表达OTUD3对C6星形胶质瘤细胞增殖的影响.方法 C6胶质瘤细胞转染Myc-OTUD3质粒载体48 h后,采用Western Blot方法检测OTUD3蛋白表达变化;采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖试剂盒和细胞克隆形成实验检测高表达OTUD3的C6胶质瘤细胞增殖改变情况.结果 转染Myc-OTUD3质粒载体48 h后,C6胶质瘤细胞OTUD3蛋白表达升高(t=3.472,P<0.01).CCK-8和细胞克隆形成实验结果显示,高表达OTUD3的C6胶质瘤细胞增殖水平降低(F=17.326、70.345,t=3.646,P<0.05).结论 高表达OTUD3可抑制C6星形胶质瘤细胞的增殖.
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编辑人员丨2023/8/5
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泛素-蛋白酶体系统在肺动脉高压中的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
泛素化是真核细胞中最重要的蛋白质翻译后修饰形式之一,可参与调节细胞的各种生理过程,包括细胞周期进程、细胞分化、细胞凋亡以及先天性和适应性免疫反应.目前越来越多的靶向泛素-蛋白酶体系统(UPS)的药物被开发出来.有证据表明,肺动脉高压(PH)发病过程中存在UPS功能紊乱,但其机制尚不明确,也无相关药物应用于临床.本文回顾了UPS的结构和功能,并对PH中功能异常的UPS相关蛋白及其作用机制进行综述,以为临床精准诊断及靶向治疗方案的制定提供新思路.
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编辑人员丨2023/8/5