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褪黑素通过SIRT3/SOD2途径改善高龄卵巢功能减退女性颗粒细胞线粒体功能和减轻氧化应激
编辑人员丨2天前
目的 研究褪黑素在体外培养中改善高龄卵巢功能减退女性颗粒细胞线粒体功能、减轻氧化应激状态的作用及可能机制.方法 收集在2022年3月至6月期间在郑州大学第二附属医院生殖医学中心接受辅助生殖技术助孕患者取卵后废弃的卵泡液,提取壁层颗粒细胞,按患者年龄分为高龄组(年龄≥38岁,6例)和年轻对照组(年龄<35岁,6例).使用透射电子显微镜观察颗粒细胞的线粒体超微结构,通过ATP检测试剂盒检测细胞内ATP,实时荧光定量PCR检测线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)拷贝数,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,MitoSOX? Red 线粒体氧化物指示剂检测活性氧含量,Western blotting法检测SIRT3、SOD2的蛋白表达.将高龄组的颗粒细胞样本根据随机数字表法分为褪黑素处理组和空白对照组(各5例),检测在体外培养颗粒细胞时添加褪黑素1 μmol/L后线粒体上述检测指标与空白对照组的差异.转染siRNA下调颗粒细胞内SIRT3,检测褪黑素添加前后上述检测指标并与阴性对照组比较.结果 高龄组颗粒细胞的线粒体超微结构与年轻对照组相比存在明显差异,线粒体结构显示不清,线粒体嵴少见且不规律排列,ATP水平(P=0.012)、mtDNA拷贝数(P=0.005)和线粒体膜电位(P=0.009)显著低于年轻对照组,活性氧含量显著增加(P= 0.003),SIRT3和SOD2水平显著降低(P<0.001和P=0.002),差异均有统计学意义.经褪黑素体外培养后,线粒体超微结构有所恢复,ATP水平(P<0.001)、mtDNA拷贝数(P=0.038)和线粒体膜电位(P= 0.002)高于空白对照组,SIRT3和SOD2水平高于空白对照组(P=0.011和P=0.031),活性氧含量低于空白对照组(P<0.001),差异均有统计学意义.siRNA转染后的颗粒细胞SIRT3的表达显著下调(P<0.001).经褪黑素处理后,细胞内ATP水平、mtDNA拷贝数和线粒体膜电位均低于未下调SIRT3的阴性对照组(P<0.001、P=0.001、P<0.001),活性氧含量高于阴性对照组(P<0.001),差异均有统计学意义.结论 在体外培养中添加褪黑素可以改善高龄卵巢功能减退女性颗粒细胞的线粒体功能和氧化应激状态.褪黑素除了直接抗氧化作用,还可通过调节SIRT3和SOD2水平来降低活性氧含量.
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编辑人员丨2天前
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基于DNA甲基化探讨电针改善痰湿型PCOS患者胰岛素抵抗及IVF-ET妊娠结局的作用机制
编辑人员丨2天前
目的 基于INSR基因甲基化以及胰岛素代谢信号通路探讨电针改善痰湿型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者胰岛素抵抗及体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)妊娠结局的作用机制.方法 采用前瞻性随机对照研究,纳入2020年1月至2022年12月期间于山东中医药大学附属医院生殖与遗传科就诊拟行IVF-ET助孕的痰湿型PCOS患者100例,采用随机数字表法均分为电针治疗(试验组)50例,伪针刺激(对照组)50例,采用固定拮抗剂方案促排卵,两组患者分别于取卵前1个月经周期经净始予电针治疗和伪针刺激,每周2次,直至扳机日.收集颗粒细胞.观察比较两组患者痰湿证候积分、胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance,HOMA-IR)、促性腺激素(gonadotropin,Gn)的用量及使用时间、获卵数、受精率、优质胚胎数、临床妊娠率、流产率和活产率.采用亚硫酸氢盐扩增子测序测定颗粒细胞中INSR基因启动子区甲基化水平的变化;实时荧光定量PCR和Western blotting测定INSR、PI3K、GLUT4 mRNA和蛋白的含量.结果 试验组治疗后痰湿证候积分(15.23±1.57)、HOMA-IR(2.82±0.39)较治疗前(21.65±3.61、3.34±0.56)明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.001,P=0.014).试验组治疗前后证候积分差值(-5.76±2.86)、HOMA-IR差值(-2.67±0.06)的绝对值明显大于对照组(-1.64±0.84、-0.11±0.04),差异均具有统计学意义(P<0.001,P=0.021).试验组患者Gn用量[(2 119.53±338.28)U]及使用时间[(10.16±1.25)d]较对照组[(2 405.65±434.20)U、(10.94±1.46)d]明显减少(P=0.005,P=0.026),优质胚胎数[(3.54±1.04)枚]较对照组[(2.66±1.87)枚]明显增多(P=0.014),受精率[66.91%(552/825)]、临床妊娠率[63.27%(31/49)]和活产率[51.02%(25/49)]较对照组[60.20%(475/789)、41.67%(20/48)、31.25%(15/48)]明显升高,差异均具有统计学意义(P=0.005,P=0.033,P=0.048);两组患者的获卵数、早期流产率差异均无统计学意义(均P>0.05).试验组患者颗粒细胞中INSR基因启动子区38、47、56、59、94、143位点甲基化水平较对照组明显降低,差异均具有统计学意义(均P<0.05),两组患者71、74、154、156、162位点甲基化水平差异均无统计学意义(均P>0.05).与对照组相比,试验组患者卵巢颗粒细胞中INSR、PI3K、GLUT4基因mRNA和蛋白表达均上调,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 电针可能是通过降低痰湿型PCOS患者INSR基因启动子区甲基化水平,使INSR、PI3K、GLUT4基因表达上调,从而改善患者胰岛素抵抗,提高其胚胎的质量,最终改善妊娠结局.
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编辑人员丨2天前
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放射治疗对卵巢功能影响的机制及防护研究进展
编辑人员丨1周前
随着肿瘤综合治疗措施的不断发展,在提高肿瘤患者生存率的同时,对于年轻女性肿瘤患者的生育力保存,日益引起重视。放疗作为肿瘤综合治疗中的重要组成部分,可引起青春期和育龄女性的卵巢损伤,进而导致其生育力下降及一系列不良反应。放射线除直接作用于生物大分子进而引起卵巢损伤外,还可以通过增加各级卵母细胞及卵巢颗粒细胞间的氧化应激水平引起卵巢间接损伤。现阶段,在接受放射治疗的女性肿瘤患者生育力保存具体实践过程中,主要包含物理防护、药物防护及生物防护三方面措施。近些年来,相关女性肿瘤患者的生育力保存新技术的发展也为此带来了新希望,包括防护效果、患者年龄、具体肿瘤治疗措施的选择等在内的因素,是生育力保存相关措施选择过程中主要考虑的方面。本文综述放射治疗引起卵巢损伤的研究进展,着重介绍对接受放疗的年轻女性肿瘤患者的生育力保存措施与新技术进展。
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编辑人员丨1周前
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卵巢原发结外NK/T细胞淋巴瘤一例并文献复习
编辑人员丨1周前
目的:探讨卵巢原发结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKL)的临床病理特征及鉴别诊断要点。方法:分析广东省佛山市第一人民医院2016年10月收治的1例卵巢原发ENKL患者的临床表现、病理特征及免疫组织化学表达、EBER荧光原位杂交检测结果,并复习相关文献。结果:该例患者表现为盆腔实性肿物,大体观察肿瘤有纤维包膜,切面灰黄、实性、均质,质地稍韧,部分区域有出血。光学显微镜下观察:肿瘤细胞呈弥漫片状生长,多灶区域凝固性坏死,瘤细胞胞体中等至大,胞质丰富,部分胞质透亮,核形态卵圆形、空泡状、不规则、扭曲、折叠,核分裂象散在易见,背景较多散在嗜酸性粒细胞、小淋巴细胞。未见明确血管壁纤维素样坏死。免疫组织学染色示:CD3、CD56、CD2、TIA-1、perfoin、GranzymeB均阳性,Ki-67阳性指数90%。EBER荧光原位杂交检测阳性。结论:卵巢原发ENKL罕见,形态学表现为弥漫生长的胞质丰富、透亮的中等大小为主的细胞,结合细胞毒性免疫组织化学表型可以诊断,需与分化差的癌、颗粒细胞瘤、高钙血症小细胞癌、髓系肉瘤等鉴别。
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编辑人员丨1周前
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长链非编码RNA在多囊卵巢综合征中的作用及分子机制
编辑人员丨1周前
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是一种累及5%~20%育龄妇女的生殖内分泌和代谢紊乱性疾病,是导致无排卵性不孕的主要原因。PCOS的临床表现具有明显的复杂性和异质性,其发病机制尚未明确。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是转录长度大于200个核苷酸的非编码RNA,能通过表观修饰、转录、转录后三个水平调控细胞生长、增殖、分化、凋亡等许多生物学过程。lncRNA是近年来PCOS领域的研究热点,研究显示 PCOS患者的外周血、卵巢颗粒细胞、卵泡液、子宫内膜中的lncRNA水平与正常女性存在显著差异,且与PCOS排卵障碍、高雄激素血症、胰岛素抵抗、子宫内膜容受性等密切相关,提示lncRNA是PCOS发病机制的重要部分,可能成为PCOS诊断的分子标志物。本文就lncRNA在PCOS中的作用及其分子机制进行综述。
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编辑人员丨1周前
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脑源性神经营养因子和神经营养因子-5在女性生殖内分泌领域的研究进展
编辑人员丨1周前
脑源性神经营养因子(BDNF)和神经营养因子-5(NT-5)属于神经营养因子家族,是一类由神经支配的靶组织分泌的分泌型多肽,两者通过作用于相同的受体发挥作用.BDNF和NT-5在卵巢表达广泛,发挥着促进卵泡组装和发育、卵母细胞成熟、排卵、调节颗粒细胞和膜细胞类固醇激素分泌等多种生理作用.不孕症是由多种病因导致的一种生育障碍状态,不孕症患者卵巢局部的BDNF和NT-5存在异常分泌情况.因此,了解BDNF和NT-5在女性生殖内分泌领域的研究进展,可能为不孕症治疗提供新方向,为辅助生殖结局的预测提供新指标.
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编辑人员丨1周前
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多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞的基因表达与胚胎发育潜能的相关性
编辑人员丨1周前
目的:探讨多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的不孕患者卵巢颗粒细胞基因的转录表达差异与早期胚胎发育潜能的相关性。方法:选择3对年龄、体质指数、卵巢储备功能相近,并使用促性腺激素释放激素(gonadotrophin-releasing hormone,GnRH)拮抗剂治疗的PCOS不孕症患者,其中胚胎数少者为病例组( n=3),多者为对照组( n=3)。收集患者的卵巢颗粒细胞并提取总RNA,进行基因转录表达差异的显著性分析及功能富集分析。 结果:与对照组相比,病例组76个基因显著上调,110个基因显著下调。与进周期日相比,对照组人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,HCG)日的雌二醇(estradiol,E 2)水平显著升高。与对照组相比,病例组 KRT7基因表达显著上调, CCNYL2表达显著下调。基因本体条目富集差异表达基因发现,与染色体分离、调控细胞周期、脂肪酸代谢等相关的基因显著富集;调控细胞组装、细胞分化、负向调控细胞周期、负向调控发育、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)的ERK1和ERK2信号通路等相关基因表达显著下调。KEGG分析显示,与固醇激素生物合成相关的基因显著富集。 结论:接受GnRH拮抗剂治疗的PCOS不孕患者卵母细胞体外正常受精数及可用胚胎数存在显著差别,可能与卵巢颗粒细胞相关基因的表达差异有关。
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编辑人员丨1周前
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miR-29a-3p靶向 SGMS2调控PCOS卵巢颗粒细胞慢性炎症的机制研究
编辑人员丨1周前
目的:探究miR-29a-3p/ SGMS2轴对人类卵巢颗粒样肿瘤细胞系(human ovarian granulosa-like tumor cell line,KGN)炎症反应的调控机制。 方法:通过构建并验证过表达和敲低miR-29a-3p及 SGMS2转染KGN细胞模型,双荧光素酶报告基因实验检测 miR-29a-3p与 SGMS2的结合;MTT法检测各组细胞的增殖;免疫荧光法观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Ki67蛋白荧光强度;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-6、IL-1β和鞘磷脂的表达;Western blotting检测细胞中Caspase-3、cleaved-Caspase-3、 SGMS2和p-p65蛋白表达。 结果:miR-29a-3p与 SGMS2之间存在位点结合,且能够负向调控 SGMS2的表达水平。KGN细胞中过表达 SGMS2能够增高其吸光度值( P=0.007),并增强其PCNA和Ki67蛋白的免疫荧光强度(均 P<0.001);过表达 SGMS2能够降低KGN细胞的凋亡率( P=0.001),升高炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和鞘磷脂的表达水平(均 P<0.001)。过表达 SGMS2时KGN细胞中cleaved-Caspase-3、p-p65和 SGMS2蛋白表达量升高( P=0.001, P<0.001, P<0.001)。而敲低 SGMS2时,以上结果具有与过表达 SGMS2相反的变化趋势。 结论:miR-29a-3p与 SGMS2之间存在靶向负向调节关系, SGMS2能够促进KGN细胞的炎症反应,可为多囊卵巢综合征等妇科内分泌疾病的治疗提供靶点。
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编辑人员丨1周前
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miRNA-17~92基因簇在多囊卵巢综合征发生发展中的作用研究进展
编辑人员丨1周前
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄妇女最常见的内分泌紊乱疾病,以卵巢的多囊样改变、雄激素过多和排卵障碍为主要临床特征。已有大量研究证实,miRNAs在PCOS的病理生理学中发挥重要作用。miRNA-17~92基因簇是一个包含多顺反子簇的miRNA家族,最初被认为是癌基因,后来被证实可触发多种生理和病理过程。新近研究显示,miRNA-17~92基因簇可通过调控卵巢颗粒细胞的功能而在PCOS的发生发展过程中发挥重要作用。本文就miRNA-17~92基因簇在PCOS发生发展中的作用及其分子途径进行综述。
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编辑人员丨1周前
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子宫内膜异位症对卵泡颗粒细胞的影响
编辑人员丨1周前
子宫内膜异位症患者常伴有卵泡发育迟缓、卵母细胞成熟障碍等问题,严重影响患者生育能力。子宫内膜异位症患者颗粒细胞凋亡及氧化应激事件的发生、细胞能量代谢及类固醇合成能力受损可能是其卵泡发育异常、卵母细胞质量下降的原因。而卵巢内膜异位囊肿引起炎症反应发生,使卵泡过度激活、卵巢皮质纤维化,直接影响卵巢储备。本文对子宫内膜异位症患者卵泡颗粒细胞凋亡及氧化应激事件、类固醇激素合成及能量代谢功能异常进行讨论,并从炎症反应的角度解释内膜异位囊肿对卵巢储备的不利影响。
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编辑人员丨1周前