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骨桥蛋白通过LGALS3BP调控PI3K/AKT通路促进肝癌细胞迁移
编辑人员丨6天前
目的 探讨骨桥蛋白(OPN)通过半乳糖凝集素3结合蛋白(LGALS3BP)促进肝癌细胞迁移的作用及机制.方法 体外培养人肝癌细胞系SMMC-7721、稳定转染空真核表达载体的人肝癌细胞系SMMC-P及稳定转染OPN基因的人肝癌细胞系SMMC-OPN.RT-qPCR检测细胞中OPN及LGALS3BP mRNA表达情况,Western blot检测细胞中OPN、LGALS3BP和PI3K/AKT通路蛋白表达水平,细胞划痕实验检测细胞迁移能力.SMMC-OPN细胞中分别转染靶向LGALS3BP的小干扰RNA(si-LGALS3BP)及阴性对照(si-NC)后,检测细胞迁移能力变化和PI3K/AKT通路蛋白相对表达水平变化.结果 相较于亲本细胞SMMC-7721和转染空载体的细胞SMMC-P,高表达OPN的细胞SMMC-OPN迁移能力明显增强,而且细胞中LGALS3BP mRNA及蛋白表达水平显著上调,同时p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT蛋白相对表达量均显著升高.沉默LGALS3BP表达后,SMMC-OPN细胞的迁移能力受到明显抑制,同时p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT蛋白相对表达水平均显著降低.结论 OPN可以通过上调LGALS3BP的表达激活PI3K/AKT通路,从而促进肝癌细胞迁移.
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编辑人员丨6天前
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图像引导放射治疗小鼠原位肝癌模型的建立
编辑人员丨6天前
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上第七大常见癌症,占原发性肝癌病例的75%~85%.目前,由于最近的技术发展,放射疗法被认为是HCC有效的治疗选择.然而,对于HCC的分次方法、分次剂量、放射疗法与其他疗法的组合或治疗时间表,尚未达成一致,HCC放疗也没有标准方案.因此,需要一个稳定的临床前模型来促进相关的临床研究.
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编辑人员丨6天前
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miR-3612靶向SEMA4C调控肝细胞癌细胞的恶性生物学行为
编辑人员丨6天前
目的:探讨miR-3612靶向信号素(SEMA)4C对肝细胞癌细胞增殖与侵袭能力的影响.方法:收集2020年5月至2021年9月间在皖南医学院第一附属医院弋矶山医院手术切除的肝细胞肝癌的40对癌组织和相应癌旁组织,常规培养肝细胞癌Hep3B和Huh7细胞,将其分为对照组、miR-3612 mimics-NC组、miR-3612 mimics组、miR-3612 inhibitor-NC组、miR-3612 inhibitor组、si-NC组、si-SEMA4C组、mimics-NC+pcDNA-NC组、miR-3612 mimics+pcDNA-NC组和miR-3612 mimics+pcDNA-SEMA4C组,用转染试剂将相应的核酸和质粒转染各组细胞.qPCR法检测miR-3612和SEMA4C mRNA在肝细胞癌组织和Hep3B和Huh7细胞中的表达,双荧光素酶报告基因实验和免疫共沉淀(RIP)实验验证miR-3612与SEMA4C的结合及调控关系,qPCR法和WB法检测转染后各组Hep3B和Huh7细胞中miR-3612、SEMA4C mRNA和蛋白的表达,CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell小室实验分别检测各组Hep3B和Huh7细胞的增殖、迁移和侵袭能力.结果:miR-3612在肝细胞癌组织和Hep3B和Huh7细胞中呈低表达(P<0.001),而SEMA4C则呈高表达(P<0.001),过表达miR-3612可抑制Hep3B和Huh7细胞的增殖、迁移、侵袭和vimentin、SEMA4C蛋白的表达,促进E-cadherin蛋白的表达(P<0.05或P<0.01或P<0.001),敲低miR-3612则促进Hep3B和Huh7细胞的增殖、迁移、侵袭和SEMA4C蛋白的表达(P<0.05或P<0.01或P<0.001).双荧光素酶报告基因实验和RIP实验证实miR-3612与SEMA4C可直接结合(P<0.001),miR-3612与SEMA4C的表达呈负相关也间接证明了这一点(P<0.001).敲减SEMA4C能明显抑制Hep3B、Huh7细胞的增殖、侵袭和迁移能力(P<0.05或P<0.01或P<0.001),过表达SEMA4C可逆转过表达miR-3612对Hep3B和Huh7细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用(P<0.05或P<0.01或P<0.001).结论:miR-3612通过调控SEMA4C表达影响Hep3B和Huh7细胞的恶性生物学行为,miR-3612有望成为临床肝细胞癌治疗的潜在靶点.
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编辑人员丨6天前
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鳖甲煎丸调控EGFR/MAPK/ERK通路对MHCC-97H肝癌细胞的影响
编辑人员丨6天前
目的 探讨鳖甲煎丸通过miR-885-5p对表皮生长因子受体(EGFR)/丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的靶向调控对MHCC-97H肝癌细胞的影响及作用机制.方法 SPF级SD大鼠10只随意分为空白组和鳖甲煎丸(1.1 g/kg)组,制备空白及鳖甲煎丸含药血清.取对数生长期的MHCC-97H细胞,分为模型组、不同质量分数(5%、10%、15%、20%)空白血清梯度组和鳖甲煎丸含药血清梯度组,以及不含细胞的空白组.CCK-8法检测细胞增殖,筛选含药血清最佳干预时间及质量分数.将MHCC-97H细胞分为空白对照组(不做任何处理)、鳖甲煎丸含药血清组(20%鳖甲煎丸含药血清)、miR-885-5p mimics组(转染miR-885-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-885-5p阴性对照物)、鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组(20%鳖甲煎丸含药血清和转染miR-885-5p mimics),各组细胞均培养72 h.采用双荧光素酶报告实验验证miR-885-5p与EGFR的靶向关系.CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,Annexin V-APC/PI双染色法检测细胞凋亡水平,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-885-5p、EGFR、MAPK的激酶(MEK)、ERK1、ERK2 mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测EGFR、磷酸化的EGFR(p-EGFR)、MEK、磷酸化的MEK(p-MEK)、ERK1、ERK2、磷酸化的ERK1(p-ERK1)、磷酸化的ERK2(p-ERK2)、基质金属蛋白酶1(MMP1)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达;通过皮下注射法建立裸鼠MHCC-97H肝癌细胞皮下瘤模型,观察不同剂量鳖甲煎丸(0.55、1.1、2.2g/kg)对裸鼠肝癌皮下瘤的抑制效果.结果 筛选出鳖甲煎丸含药血清最佳干预质量分数及时间为20%、72 h,同时,双荧光素酶报告实验显示,miR-885-5p可以直接靶向结合EGFR;各项实验报告显示空白对照组和miR-NC组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清组、miR-885-5p mimics组和鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组MHCC-97H肝癌细胞增殖率明显降低(P<0.01),迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05,P<0.01),同时,与细胞增殖、侵袭密切相关的蛋白CyclinD1和MMP1的蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),晚期凋亡率和总凋亡率均明显升高,促进细胞凋亡(P<0.01);鳖甲煎丸含药血清组、miR-885-5p mimics组和鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组明显上调miR-885-5p mRNA(P<0.01),抑制EGFR、MEK、ERK1、ERK2 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),抑制EGFR、MEK、ERK1、ERK2磷酸化激活(P<0.01),其中,鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组效果最好(P<0.05,P<0.01).裸鼠肝癌皮下瘤模型验证了鳖甲煎丸可抑制裸鼠肝癌皮下瘤生长.结论 鳖甲煎丸可促进MHCC-97H肝癌细胞凋亡,抑制其增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能和通过miR-885-5p靶向调控EGFR/MAPK/ERK信号通路有关.
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编辑人员丨6天前
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lnc85通过调节CDC42的表达促进肝癌细胞增殖
编辑人员丨6天前
目的:探讨长链非编码RNA RP11-85G21.1(lnc85)对肝癌细胞增殖的作用及可能机制.方法:RNA全转录组测序结合实时荧光定量PCR(RT-qPCR)筛选验证肝癌中差异高表达的lnc85;利用lnc85过表达/空载慢病毒感染细胞,构建lnc85过表达肝癌细胞株(OE)和对照细胞(control);RNA下拉实验(RNA pull-down)联合质谱筛选lnc85互作蛋白并进行蛋白免疫印迹(western blotting)验证;MTT实验、细胞克隆形成实验分析lnc85过表达对细胞增殖的影响;生物信息学分析lnc85互作蛋白表达水平及对生存的影响.结果:RNA全转录组测序发现,与对照相比,lnc85在肝癌患者血浆外泌体中明显高表达(P<0.001),RT-qPCR验证lnc85在3种肝癌细胞中显著升高(P<0.01,P<0.001);RNA pull-down联合质谱分析发现CDC42为lnc85的互作蛋白,RT-qPCR证实CDC42水平在肝癌细胞显著升高(P<0.001);且lnc85过表达的肝癌细胞中,CDC42蛋白水平显著上调(P<0.001),细胞增殖能力显著增强(P<0.01);生物信息学分析发现,肝癌患者CDC42的表达水平显著高于健康对照(P<0.001),并随着肿瘤等级的增高而增高;高表达CDC42的肝癌患者预后不良(P<0.001).结论:lnc85在肝癌中高表达,可能通过靶向调节CDC42的表达促进肝癌细胞的增殖.
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编辑人员丨6天前
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目标激励下针对性护理对肝癌术后患者的影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨目标激励下针对性护理对肝癌术后患者的影响.方法:抽选徐州医科大学附属医院2020 年11 月1 日~2022年12 月31 日普外科收治的90 例肝癌术后患者作为研究观察对象,随机分为参照组和干预组各45 例;参照组实施常规康复护理措施,干预组实施目标激励下针对性康复护理措施.于干预前、干预 4 周后,比较两组疼痛控制、心理应激水平、并发症等指标情况.结果:干预 4 周后,干预组疼痛控制、心理应激水平评分均优于干预前(P<0.05),且干预组优于参照组(P<0.05);干预组并发症发生率低于参照组(P<0.05).结论:目标激励下针对性护理能有效提升肝癌术后患者疼痛控制能力,强化自身心理应激水平,降低并发症发生率.
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编辑人员丨6天前
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骨形态发生蛋白5对肝癌细胞生物学行为的影响及机制
编辑人员丨6天前
目的 探究骨形态发生蛋白5(BMP5)对人肝癌细胞生物学行为的影响及机制.方法 将正常人肝细胞系L02与人肝癌细胞系Hep3B、Huh7置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养,采用RT-qPCR法检测正常人肝细胞系L02与人肝癌细胞系Hep3B、Huh7中BMP5 mRNA表达.将肝癌细胞系Hep3B、Huh7分为对照(NC)组及低、中、高剂量组,低、中、高剂量组分别用1、10、100 ng/mL浓度的重组人骨形态发生蛋白5(rh-BMP5)处理细胞,通过CCK-8法检测细胞增殖,Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Western blotting法检测增殖细胞核抗原PCNA和SMAD通路关键蛋白及其磷酸化(SMAD3、p-SMAD3)表达.结果 与正常肝细胞系L02相比,BMP5在肝癌细胞系Hep3B、Huh7中表达升高(P均<0.05).与NC组相比,中、高剂量组rh-BMP5可促进Hep3B、Huh7细胞增殖和PCNA表达上调(P均<0.05),高剂量组100 ng/mL的rh-BMP5处理肝癌细胞24及48 h细胞凋亡率降低、迁移率增高(P均<0.05).高剂量组与NC组相比,p-SMAD3表达升高(P<0.05).结论 BMP5在肝癌细胞系中高表达,可能通过增强SMAD3活化促进肝癌细胞Hep3B、Huh7的增殖、迁移并抑制凋亡.
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编辑人员丨6天前
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原发性肝癌大鼠造模的文献研究现状与评价
编辑人员丨6天前
目的 探讨原发性肝癌大鼠造模的文献研究现状,并进行总结与评价.方法 以"原发性肝癌""大鼠模型"为关键词检索中国知网(CNKI)、万方数据库文献,检索时限为1996年1月至2021年12月,最终纳入115篇有效文献.对文献的造模方法、造模药物种类及剂量、造模周期以及造模结果评价等进行总结和分析.结果 最常用的原发性肝癌造模大鼠种类为Wistar大鼠,主要造模诱导剂有二乙基亚硝胺(DEN)配制的水溶液、DEN+灭菌食用水、DEN+四氯化碳(CCL4)、DEN+生理盐水、DEN+标准饲料、二乙酰氨基芴(2-AAF)、黄曲霉毒素B1(AFB1)等7种,其中以DEN配制的水溶液最为常用,占63.5%.造模方法有自由饮用法、腹腔注射法、腹腔注射+自由饮用法、灌胃法、皮下注射+自由饮用法、腹腔注射+灌胃法等6种,其中以自由饮用法最常用,占35.7%.主要通过客观评价法对造模结果进行判定,占47.8%.结论 原发性肝癌大鼠造模方法多样,目前尚无统一的标准方法.研究者宜根据自身实验需求选择合适的造模方式.
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编辑人员丨6天前
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tRNA衍生片段(tRF)在肿瘤侵袭转移中的机制及研究进展
编辑人员丨6天前
转运RNA(tRNA)衍生片段(tRF)又被称为tRNA衍生的小RNA(tsRNAs),是一类新兴的调节性非编码RNA,是在特定条件下特异性切割前tRNA或成熟tRNA而形成的.目前已发现tRF在肿瘤等多种疾病发展进程中具有独特的生物学功能,包括具有miRNA样作用及结合RNA结合蛋白(RBP)调节基因表达、蛋白质翻译、表观遗传学调控、调节细胞周期等.近年来多项研究表明tRF在乳腺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、肺癌、前列腺癌、白血病等多种肿瘤中异常表达并参与其发展进程.本文总结了它们的分类、生物发生、作用机制以及在肿瘤侵袭和转移中的生物意义,为肿瘤的新型诊断标记和治疗靶点的发现提供新思路.
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编辑人员丨6天前
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SPECT/CT超级骨显像影像学特征、临床表现、年龄及实验室检查指标的分析
编辑人员丨6天前
目的:探讨 99Tc m-亚甲基二膦酸盐(MDP)SPECT/CT超级骨显像患者的影像学特征、临床表现、年龄及实验室检查结果的差异。 方法:收集2012年6月至2021年7月于宁夏医科大学总医院行 99Tc m-MDP SPECT/CT显像的47 671例患者中呈超级骨显像的97例患者,其中男性54例、女性43例,年龄25~85(62.4±14.3)岁,回顾性分析97例患者的临床表现资料、影像学资料、年龄及实验室检查资料。根据病因不同,将患者分为骨转移瘤组(71例)与代谢性骨病组(26例,包括甲状旁腺瘤9例、肾性骨病6例、骨质疏松症11例)。根据原发肿瘤不同,将71例骨转移瘤组患者分为4个亚组[前列腺癌组(40例)、乳腺癌组(15例)、肺癌组(8例)、消化系统恶性肿瘤组(8例,包括胃癌4例、直肠癌2例、食管癌1例、原发性肝癌1例)]。统计分析骨转移瘤组与代谢性骨病组以及骨转移瘤组4个亚组之间 99Tc m-MDP SPECT全身骨显像的特征、SPECT/CT融合显像的特征、临床表现、年龄和实验室检查[血钙、血磷、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)]结果的差异。计量资料的组间比较采用独立样本 t检验、单因素方差分析、Wilcoxon秩和检验及Kruskal-Wallis H检验;分类变量资料的组间比较采用 χ2检验。 结果:骨转移瘤(73.2%,71/97)是导致超级骨显像的最常见病因[在其原发肿瘤中,前列腺癌较常见(56.3%,40/71)],其次为代谢性骨病(26.8%,26/97)。骨转移瘤组以灶性散在分布型(Ⅱ型)为主(85.9%,61/71),代谢性骨病组主要呈均匀对称型(Ⅰ型)(61.5%,16/26),2组比较差异有统计学意义( χ2=21.84, P<0.001)。骨转移瘤组以成骨型(74.6%,53/71)和混合型(19.7%、14/71)骨质破坏为主,而代谢性骨病组以溶骨型(73.1%,19/26)骨质破坏为主,差异均有统计学意义( χ2=39.76、15.95,均 P<0.001)。所有患者均以骨痛为初发症状,局部骨痛为主要临床表现(56.7%,55/97)。骨转移瘤组以腰痛最常见(60.0%,24/40),代谢性骨病组多为肋骨痛(40.0%,6/15),2组比较差异有统计学意义( χ2=11.11 , P<0.05)。骨转移瘤组患者的年龄和ALP、LDH水平均高于代谢性骨病组,而血钙水平则低于代谢性骨病组,差异均有统计学意义( t=4.89, Z=-2.28、-3.65, t=-5.96,均 P<0.05);而2组患者在血磷水平上的差异无统计学意义( t=0.01, P>0.05)。骨转移瘤组4个亚组在SPECT全身骨显像的显像模式、SPECT/CT融合显像中的骨质破坏类型、临床表现、局部骨痛部位间的差异均无统计学意义( χ2=2.71~13.07,均 P>0.05)。骨转移瘤组4个亚组间进行比较,乳腺癌组患者年龄最小、前列腺癌组患者年龄最大,乳腺癌组患者血钙水平最高,肺癌组患者LDH水平最高,且差异均有统计学意义( F=14.43、5.13, H=13.47,均 P<0.05);血磷和ALP水平的差异均无统计学意义( F=2.41, H=6.28,均 P>0.05)。 结论:超级骨显像病因中以骨转移瘤最常见,其次为代谢性骨病。2种病因超级骨显像患者在 99Tc m-MDP SPECT全身骨显像、病灶处 99Tc m-MDP SPECT/CT融合显像、临床表现、年龄及实验室检查结果方面均有差异, 99Tc m-MDP SPECT/CT在2种病因超级骨显像的鉴别中有一定价值。
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编辑人员丨6天前