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天麻素与薯蓣皂苷元配伍对大鼠缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用
编辑人员丨2天前
目的 探讨天麻素(Gas)、薯蓣皂苷元(Dio)及其组合物(GDC)对大鼠缺氧损伤脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用和对脑微血管新生的影响及其作用机制.方法 将BMECs分为 5 组:正常对照组,模型对照组,Gas组(1、2、4、8、16、32 μmol·L-1),Dio组(0.25、0.5、1、2、4、8 μmol·L-1),GDC组(Gas和Dio浓度分别为 1 和 0.25、2和 0.5、4 和 1、8 和 2、16 和 4、32 和 8 μmol·L-1).分组给药12h后,对模型对照组、Gas组、Dio组和GDC组通过氧糖剥夺法建立BMECs缺氧模型.检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、白细胞介素 1β(IL-1β)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)浓度;观察Hoechst 33258、FITC-Annexin V/PI染色,采用Transwell小室实验、细胞划痕实验和小管形成实验,考察Gas、Dio及GDC对缺氧损伤BMECs的保护作用及促进血管新生作用.进一步利用网络药理学和分子对接方法研究GDC抗脑缺血的作用机制.结果 Gas、Dio以 2、0.5 μmol·L-1组合时,可显著提高缺氧损伤BMECs细胞活力(P<0.05),促进细胞增殖;与模型对照组比较,Gas组LDH漏出率降低(P<0.05);Gas组、Dio组与GDC组IL-1β含量均显著下降(均P<0.05),Gas 组、GDC 组 SOD 活力升高(P<0.05),Gas 组、Dio 组以及 GDC 组凋亡小体减少.GDC 可促进BMECs缺氧模型的增殖、侵袭、迁移以及小管形成,表明其在细胞水平上一定程度促进血管新生.网络药理学研究发现,Gas与半胱天冬酶 3(CASP3)、过氧化物酶体增生激活受体 γ(PPARG)、凝血因子Ⅱ(F2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)1 蛋白具有良好的结合活性,Dio与内皮一氧化氮合成酶(NOS3)、KDR蛋白具有良好的结合活性,Gas、Dio可能主要通过血管内皮生长因子(VEGF)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、磷酯酰肌醇 3-激酶(PI3K)-Akt信号通路以及缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路调控脑缺血后血管新生.结论Gas、Dio及GDC具有抗缺氧损伤作用并可促进缺氧损伤后血管新生,作用机制可能与其作用于Akt1、NOS3、VEGFR2 等蛋白,调控VEGF/Akt/MAPK等信号通路促进血管新生有关.
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编辑人员丨2天前
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化癥散积方联合顺铂对HepG2肝癌细胞的增殖和迁移的影响
编辑人员丨2天前
目的 通过单独使用化癥散积方(HZSJ)或与顺铂(cisplatin,DDP)联合应用干预HepG2肝癌细胞的增殖和迁移,以探讨其治疗肝癌的潜在机制.方法 将HepG2肝癌细胞分为空白对照组、缺氧模型组、DDP组、HZSJ组、HZSJ+DDP组,采用CoCl2法诱导缺氧环境.通过MTT法、流式细胞术和细胞划痕试验验证HZSJ联合DDP对HepG2肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测凋亡相关因子;网络药理学进行靶点预测;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HZSJ联合DDP对HepG2肝癌细胞中低氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.结果 HZSJ和DDP可以显著抑制HepG2肝癌细胞的增殖,并且HZSJ与DDP具有协同作用,降低DDP的有效浓度;当低浓度DDP和HZSJ联合应用时,HepG2肝癌细胞的早期和晚期凋亡数量显著增加,Bax/Bcl-2的比值显著增加,Cleaved-Casp-3的表达水平也显著增加;低浓度DDP不影响HepG2肝癌细胞的迁移,而高浓度HZSJ可抑制HepG2的迁移,当两者联合应用时能够显著降低HepG2肝癌细胞的迁移率;基于STRING数据库构建HZSJ潜在靶点网络图,确定了HIF信号通路是HepG2肝癌细胞增殖和迁移的主要调节通路;Western blot结果表明,HZSJ和低浓度DDP联合应用时,HIF-1α和VEGF的表达水平显著降低.结论 HZSJ可以帮助DDP抑制HepG2肝癌细胞的增殖和迁移,两者协同促进HepG2肝癌细胞凋亡,并调节凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-Casp-3以及迁移相关蛋白HIF-1α和VEGF.
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编辑人员丨2天前
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基于QSAR机器学习模型结合"久病致瘀"理论对丹参治疗慢性疼痛的分子机制研究
编辑人员丨2天前
目的:运用定量结构-活性关系(QSAR)机器学习模型和分子对接技术预测丹参治疗慢性疼痛相关的活性成分,并结合"久病致瘀"理论以及网络药理学探讨丹参治疗慢性疼痛的分子机制.方法:首先通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和人类基因组数据库(GeneCards)收集丹参化学成分和慢性疼痛作用靶点,筛选核心靶标,通过STRING数据库进行蛋白质相互作用(PPI)网络分析;然后对交集靶标进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;最后运用QSAR机器学习模型以及分子对接技术筛选丹参治疗慢性疼痛的活性成分和核心靶点.结果:①筛选获得丹参与慢性疼痛的交集靶标55个、潜在活性成分55个,通过PPI分析发现丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、表皮生长因子受体(EGFR)、白介素(IL)-6等核心靶标;②通过功能富集分析得到细胞组成45个,分子功能87个,生物过程1 450个,信号通路140条,涉及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、IL-17、缺氧诱导因子1(HIF-1)、环磷腺苷(cAMP)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信号通路;③通过QSAR模型和分子对接发现丹参中的鼠尾草呋萘嵌苯、表丹参螺缩酮内脂、salvianan A、异丹参酮Ⅱ和丹酚酸C是治疗慢性疼痛的活性成分.结论:丹参治疗慢性疼痛的活性成分为二萜类化合物,其作用机制可能与调节AKT1介导的信号通路密切相关.
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编辑人员丨2天前
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HIF-1α、VEGF与暴发性心肌炎患者心肌损伤的关系
编辑人员丨1周前
目的 探究血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)与暴发性心肌炎患者心肌损伤程度之间的相关性.方法 选择2017年6月至2022年10月郑州大学第一附属医院收治的62例暴发性心肌炎患者及同期到医院体检的40名健康者分别作为研究组与对照组,两组均测定血清HIF-1α、VEGF水平.研究组依据患者预后情况分为死亡组与存活组,比较两组血清HIF-1α、VEGF水平、心肌损伤指标、心脏超声指标水平及住院时间差异,分析患者血清HIF-1α、VEGF水平与心肌损伤指标、心脏超声指标及住院时间的相关性,分析血清HIF-1α、VEGF水平与心肌损伤指标对患者预后的预测价值.结果 研究组血清HIF-1α、VEGF水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);死亡组患者血清HIF-1α、VEGF及心肌损伤脑钠肽(BNP)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)指标水平均高于存活组,左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)均低于存活组,住院时间长于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,血清HIF-1α、VEGF水平与BNP、CK-MB、cTnI呈正相关关系(P<0.05),但与LVEF、LVEDD、住院时间之间均不存在相关关系(P>0.05);受试者工作特征曲线显示,血清HIF-1α、VEGF、BNP、CK-MB、cTnI预测患者预后的曲线下面积分别为0.708、0.766、0.847、0.852、0.864.结论 血清HIF-1α、VEGF与暴发性心肌炎患者心肌损伤关系密切,可用于评估患者预后,有较高的临床应用价值.
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编辑人员丨1周前
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基于营卫理论探讨桂枝-赤芍配伍重塑肿瘤血管微环境的网络药理学机制
编辑人员丨1周前
目的:采用网络药理学方法预测桂枝-赤芍配伍影响肿瘤血管生成的潜在靶点和通路,从分子网络药理学水平探索该配伍重塑肿瘤血管微环境的网络药理学机制.方法:采用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索桂枝、赤芍的化学成分和潜在靶点,选择口服生物利用度≥30%和类药性≥0.18 作为化学成分筛选条件;在GeneCards数据库中检索血管生成的靶点;利用Cytoscape 3.6.0 软件绘制桂枝-赤芍配伍-化合物-靶点-血管生成网络;使用STRING 11.0 在线软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络并挖掘核心靶点;采用David Bioinformatics Resources数据库对该复方活性成分潜在的靶点网络中的蛋白进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果:桂枝-赤芍配伍的 33 种有效成分作用于血管生成过程的 77 个靶点,PPI网络的核心靶点包括蛋白激酶B(Akt)1、JUN、白细胞介素 6、基质金属蛋白酶、血管内皮生长因子A、一氧化氮合酶 2 和缺氧诱导因子-1α等多个蛋白.GO功能富集分析提示,该配伍的关键蛋白主要参与了DNA结合转录激活剂活性、血红素结合、抗氧化活性、核受体活性和转录因子活性等生物过程.KEGG通路富集分析显示,该配伍参与了缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、肿瘤蛋白 53 信号通路、细胞凋亡信号通路、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药信号通路、血管内皮生长因子(VEGF)信号通路和磷脂酰肌醇 3 激酶-Akt信号通路等,提示桂枝-赤芍配伍与肿瘤血管生成的关系最为密切.结论:桂枝-赤芍配伍中的黄芩素、谷甾醇和鞣花酸等成分可能通过HIF-1 信号通路、VEGF信号通路影响肿瘤血管生成,干预肿瘤的生物学行为.
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编辑人员丨1周前
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急性氨氮胁迫下大口黑鲈的肝脏转录组特征分析
编辑人员丨1周前
为研究大口黑鲈(Micropterus salmoides)受到氨氮胁迫时基因表达的变化规律,文章采用Illumina平台的HiSeq测序策略分析了氨氮胁迫12h和24h后大口黑鲈肝脏的基因表达谱.氨氮胁迫后在大口黑鲈肝脏共获得111.66 Gb的有效数据,组装获得133486个单基因簇(Unigenes),N50为1000 bp.通过比较转录组分析在2个时间点共获得2072个差异表达基因,其中氨氮胁迫12h获得1516个差异表达基因,907个上调,609个下调;氨氮胁迫24h获得556个差异表达基因,其中330个上调,226个下调.GO功能注释分析结果表明,在氨氮胁迫12h差异基因富集数目明显多于24h,但在"氧化还原酶活性"条目中富集的差异基因数目则是氨氮胁迫24h多于12h.此外,KEGG功能富集分析发现,氨氮胁迫对大口黑鲈肝脏氧化应激、细胞自噬和凋亡相关等途径产生影响.选取10个差异表达基因进行qPCR验证,其表达水平与转录组差异基因分析结果一致,证明了测序结果的可靠性.其中,与氧化应激相关基因缺氧诱导因子1α(HIF1α)、生长停滞DNA损伤可诱导蛋白p(Gadd45p)、DNA损伤诱导转录因子4(DDIT4)、与细胞自噬相关基因自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)及与细胞凋亡相关基因下游内质网氧化还原酶1α(Ero1α)在整个胁迫过程中均显著上调.综上所述,氨氮胁迫能引起大口黑鲈肝脏氧化应激,当机体调控作用不足时,大口黑鲈通过细胞自噬与凋亡方式去除受损细胞,以维持内环境稳定.研究结果将为进一步研究大口黑鲈在氨氮胁迫下生理调控的分子机制提供依据.
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编辑人员丨1周前
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基于疾病与活性化合物靶点网络研究牛舌草治疗大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用
编辑人员丨1周前
目的 基于脑缺血-再灌注损伤与牛舌草中活性化合物靶点网络,研究牛舌草治疗大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用及机制.方法 采用线栓法制备脑缺血-再灌注损伤大鼠模型,缺血1.5 h再灌注24 h,对大鼠神经功能进行评分,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)测定大鼠脑梗死体积.采用网络药理学的分子网络分析技术、蛋白质-蛋白质相互作用网络、基因本体(GO)生物过程富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析、分子对接等方法研究牛舌草治疗脑缺血-再灌注损伤作用机制.结果 牛舌草给药治疗能够显著改善脑缺血-再灌注损伤引起的神经行为功能障碍,减轻脑组织病理损伤.并且牛舌草能够通过143 个缺血性脑卒中相关靶点,调控炎症反应、细胞凋亡等生物过程,干预肿瘤坏死因子信号通路、血管内皮生长因子信号通路和缺氧诱导因子-1信号通路等发挥作用.结论 网络药理学及动物实验表明,牛舌草通过多靶点、多机制整体联合治疗脑缺血-再灌注损伤,可有效降低脑损伤和保护神经功能.
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编辑人员丨1周前
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缺氧信号通路在肾癌中的研究进展
编辑人员丨1周前
缺氧是实体肿瘤微环境的一个重要的基本特征,随着人们对肾细胞癌(RCC)发病机制研究的不断深入,缺氧和低氧诱导因子(HIF)在人肾癌中的表达及其功能越来越被关注,缺氧信号通路成为近年来肿瘤等疾病的研究热点。本文综述了目前对缺氧信号通路的认识、其与RCC发生发展的相关性以及HIF抑制剂的应用前景,以期指导临床RCC的精准化治疗。
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编辑人员丨1周前
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脓毒症时巨噬细胞代谢变化与其代谢调节研究进展
编辑人员丨1周前
脓毒症发病机制复杂,涉及单核/巨噬细胞介导的固有免疫反应,而巨噬细胞功能的维持和改变与其代谢途径变化息息相关。正常生理条件下,巨噬细胞是以葡萄糖氧化磷酸化作为能量需求的主要代谢途径,其中M1型巨噬细胞表现为葡萄糖摄取与无氧糖酵解增加;M2型巨噬细胞则表现为脂肪酸摄取增加,氧化磷酸化效率提高。目前研究发现,缺氧诱导因子-1α、琥珀酸盐及谷氨酰胺等可能通过调控巨噬细胞代谢模式进而影响其功能。关注巨噬细胞代谢变化及代谢调节在脓毒症免疫发病机制中的作用,可能使巨噬细胞免疫代谢的靶点成为未来脓毒症治疗的突破口。
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编辑人员丨1周前
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HIF-1α/BNIP3介导的线粒体自噬对创伤性脑损伤后神经元凋亡的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨缺氧诱导因子-1α/Bcl-2/E1B-19kDa相互作用蛋白3(HIF-1α/BNIP3)介导的线粒体自噬对创伤性脑损伤(TBI)后神经元凋亡的影响。方法:选择HT22细胞(小鼠海马神经元)进行实验,采用氧糖剥夺复氧(OGD/R)的方法构建TBI的体外模型,通过HIF-1α、BNIP3特异性小干扰RNA(siRNA)或质粒载体转染细胞调节HIF-1α、BNIP3表达。实验1:研究BNIP3介导的线粒体自噬对TBI后神经元凋亡的影响。这部分实验中HT22细胞分为4组( n=3):siRNA对照组,转染阴性siRNA后正常培养;siRNA+TBI组,转染阴性siRNA后进行OGD/R处理;BNIP3-siRNA组,转染BNIP3-siRNA后正常培养;BNIP3-siRNA+TBI组,转染BNIP3-siRNA后进行OGD/R处理。实验终点通过Western blotting法检测HIF-1α、BNIP3及LC3-Ⅱ、P62等线粒体自噬相关蛋白的表达水平,透射电镜观察线粒体自噬小体,TUNEL染色法检测细胞凋亡率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞上清液LDH活性。实验2:研究HIF-1α对TBI后BNIP3介导的线粒体自噬及神经元凋亡的影响。这部分实验中HT22细胞分为8组( n=3):siRNA对照组及siRNA+TBI组,处理同上;HIF-1α-siRNA组,转染HIF-1α-siRNA后正常培养;HIF-1α-siRNA+TBI组,转染HIF-1α-siRNA后进行OGD/R处理;空载质粒组,转染空载质粒pcDNA3.1(+)后正常培养;过表达HIF-1α组,转染过表达HIF-1α质粒后正常培养;空载质粒+TBI组,转染空载质粒后进行OGD/R处理;过表达HIF-1α+TBI组,转染过表达HIF-1α质粒后进行OGD/R处理。实验终点测定各组细胞HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ、P62、TOMM20、COX Ⅳ表达水平、细胞凋亡率及LDH活性。 结果:(1)实验1:与siRNA对照组比较,siRNA+TBI组BNIP3表达水平及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值显著升高,P62、TOMM20、COX Ⅳ表达水平显著下降,细胞凋亡率及LDH活性显著升高,差异均有统计学意义( P<0.05)。与siRNA+TBI组比较,BNIP3-siRNA+TBI组BNIP3表达水平及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值显著下降,P62、TOMM20、COX Ⅳ表达水平显著升高,细胞凋亡率及LDH活性显著升高,差异均有统计学意义( P<0.05)。透射电镜下siRNA+TBI组自噬小体较siRNA对照组增多,BNIP3-siRNA+TBI组自噬小体较siRNA+TBI组减少。(2)实验2:与siRNA+TBI组比较,HIF-1α-siRNA+TBI组HIF-1α、BNIP3表达水平及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值显著下降,P62、TOMM20、COX Ⅳ表达水平显著升高,细胞凋亡率及LDH活性显著升高,差异均有统计学意义( P<0.05)。与空载质粒+TBI组比较,HIF-1α过表达+TBI组HIF-1α、BNIP3表达水平及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值显著升高,P62、TOMM20、COX Ⅳ表达水平显著下降,细胞凋亡率及LDH活性显著下降,差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:HIF-1α通过促进BNIP3介导的线粒体自噬减轻TBI后神经元凋亡。
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编辑人员丨1周前