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人参皂苷Rb1调控MAPK通路改善小鼠脑缺血再灌注诱导血脑屏障损伤的作用研究
编辑人员丨6天前
目的 探讨人参皂苷Rb1对小鼠脑缺血再灌注诱导的血脑屏障(BBB)损伤的作用及机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rb1低、中、高剂量(5、10、20mg·kg-1)组,采用线栓法栓塞颈内动脉1h后复灌建立脑缺血再灌注损伤模型,假手术组不栓塞,其余操作同模型小鼠.缺血1h后ip相应药物,于再灌注24h后处死取材.采用伊文思蓝染色法检测各组小鼠BBB损伤程度;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组小鼠脑组织中炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及紧密连接蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)的mRNA表达水平;同时采用Western blotting检测各组小鼠脑组织中ZO-1、Occludin蛋白,金属基质蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及MAPK通路相关蛋白磷酸化的表达水平.结果 与模型组相比,人参皂苷Rb,可显著减少脑缺血再灌注小鼠脑组织中伊文思蓝的渗漏量(P<0.05),显著降低脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平(P<0.05、0.01);显著上调ZO-1和Occludin的mRNA转录和蛋白表达水平(P<0.05、0.01);显著降低MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平(P<0.05、0.01);显著抑制MAPK通路p38、JNK及ERK磷酸化蛋白的表达(P<0.05、0.01).结论 人参皂苷Rb1对小鼠脑缺血再灌注诱导的BBB损伤具有一定的改善作用,其作用机制可能与抑制MAPK信号通路激活,减少MMP-2、MMP-9蛋白的表达,进而减轻对ZO-1、Occludin等紧密连接蛋白的降解有关.
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编辑人员丨6天前
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Metrnl对2型糖尿病小鼠主动脉重构的影响及相关机制研究
编辑人员丨6天前
目的 观察Metrnl在2 型糖尿病小鼠中的浓度变化及对小鼠主动脉重构的影响,探讨其可能的作用机制.方法 取15 只健康雄性小鼠,随机分成对照组(Control组)、糖尿病组(DM组)、Metrnl干预组(DM +Metrnl组),Metrnl干预组予以重组Metrnl,对照组和糖尿病组给予等体积生理盐水.注射结束后测定各组小鼠血脂水平.观察小鼠主动脉病理变化,主动脉内ROS含量,主动脉细胞凋亡情况,主动脉中P-P38 MAPK、P38 MAPK、P-STAT1、STAT1、BAX、BCL-2 蛋白表达水平.结果 Metrnl干预组体质量及血糖较糖尿病组差异无统计学意义(P>0.05);重组Metrnl干预前,各组小鼠血清Metrnl浓度差异无统计学意义(P>0.05).Metrnl降低了2 型糖尿病小鼠血清TC、TG、LDL-C水平(P<0.05),提高血清HDL-C浓度(P<0.05);Metrnl可改善2 型糖尿病小鼠主动脉细胞形态,但无法改变主动脉厚度(P>0.05);Metrnl可减少ROS产生,降低细胞凋亡率(P<0.05),并下调P-P38/P38 MAPK、P-STAT1/STAT1、BAX蛋白表达(P<0.05),提高BCL-2 蛋白表达(P<0.05).结论 糖尿病小鼠血清Metrnl水平无明显变化,外源性Metrnl干预不能改善糖尿病小鼠体质量及血糖,但可以改善糖尿病小鼠脂质代谢,Metrnl通过抑制ROS/P38 MAPK/STAT1 信号通路,减轻氧化应激损伤,从而发挥对主动脉的保护作用.
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编辑人员丨6天前
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气道压力释放通气通过调控ITGB4相关通路减轻ARDS肺部炎症的机制研究
编辑人员丨6天前
目的 分析气道压力释放通气(APRV)和小潮气量通气(LTV)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)炎症的影响,探讨不同机械通气模式对ARDS机械应力相关的作用及机制.方法 构建巴马小型成年猪重度ARDS模型,应用LTV与APRV通气模式,进行48 h机械通气治疗,分为空白对照组(control组,n=3)、疾病对照组(ARDS组,n=3)、LTV机械通气组(LTV组,n=4)以及APRV机械通气组(APRV组,n=4).观察两种通气模式对氧合指数、炎症因子的影响.对肺组织进行高通量测序,并在蛋白层面验证差异基因ITGB4对ARDS机械通气后炎症的影响.使用A549细胞系构建APRV样牵张模型及LTV样牵张模型,进行4 h体外牵张实验,探讨两种牵张模式通过ITGB4对细胞炎症因子分泌的影响.使用小干扰RNA(siRNA)沉默ITGB4表达,比较 LTV+siRNA 组与 APRV+siRNA 组 ITGB4-FAK-p38-MAPK-IL-8 通路表达差异.使用 p38 抑制剂(SB203580)对细胞进行干预,比较LTV+SB203580组和APRV+SB203580组IL-8表达水平的差异.结果 重度ARDS造模成功后,通气48 h,APRV组肺泡灌洗液及肺组织中IL-6、IL-8水平显著低于LTV组(P<0.05),而两组IL-1、TNF-α差异无统计学意义(P>0.05).转录组高通量测序结果显示,机械通气后细胞外基质受体交互通路及黏着斑信号通路显著富集.在肺组织中,APRV组ITGB4、p-FAK、p-p38蛋白表达水平显著低于LTV组(P<0.05).细胞牵张模型在体外细胞中复现LTV与APRV样牵张,周期性牵张4 h使细胞IL-8水平显著升高(P<0.05),IL-6水平无明显变化(P>0.05).APRV组的IL-8、ITGB4、p-FAK和p-p38表达水平显著低于LTV组(P<0.05).沉默ITGB4可以显著下调机械牵张后APRV组与LTV组p-FAK、p-p38的表达水平,APRV+siRNA组下调趋势明显,但相较LTV+siRNA组差异无统计学意义(P>0.05).使用p38抑制剂后,相较于LTV+SB203580组,APRV+SB203580组p-p38磷酸化水平显著下调(P=0.032).结论 APRV机械通气模式通过ITGB4-p38-MAPK通路显著改善重度ARDS后炎症因子IL-8的分泌,可能为ARDS治疗提供潜在的干预靶点.
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编辑人员丨6天前
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基于JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路探究八桂止痛散对脂多糖诱导脊髓星形胶质细胞凋亡的影响
编辑人员丨6天前
目的:基于JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路探究八桂止痛散对脂多糖(LPS)诱导的脊髓星形胶质细胞凋亡的影响.方法:从SD乳鼠脊髓中分离星形胶质细胞并鉴定.CCK-8法检测不同浓度八桂止痛散(2.5、5、10、20、40、80 mg/ml)对细胞存活的影响;随后分别设置对照组、LPS组、LPS+药物-L组、LPS+药物-M组、LPS+药物-H组、LPS+药物-H+Anisomycin组.CCK-8法、流式细胞术检测细胞存活、凋亡;ELISA法检测细胞中白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;qRT-PCR 检测细胞中 JNK、p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA 表达水平;Western blot检测JNK/p38 MAPK/NF-KB通路相关蛋白表达水平.结果:与对照组相比,LPS组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α 水平、JNK mRNA、p38 MAPK mRNA、NF-κB p65 mRNA 表达、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65 表达显著增加(均 P<0.05);与 LPS 组相比,LPS+药物-L组、LPS+药物-M组、LPS+药物-H组细胞存活率显著增加,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、JNK mRNA、p38 MAPK mRNA、NF-KB p65 mRNA 表达、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65 表达显著降低,具有剂量依赖性(均P<0.05);与LPS+药物-H组相比,LPS+药物-H+Anisomycin组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α 水平、JNK mRNA、p38 MAPK mRNA、NF-κB p65 mRNA 表达、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著增加(均P<0.05).结论:八桂止痛散可抑制LPS诱导的脊髓星形胶质细胞凋亡,其机制可能与抑制JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路有关.
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编辑人员丨6天前
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艾灸督脉组穴对血管性痴呆大鼠海马p38 MAPK信号通路及细胞凋亡的影响
编辑人员丨6天前
目的 基于 p38 丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路探究艾灸督脉组穴对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠的脑保护机制.方法 将 60 只 SPF级健康雄性 SD大鼠随机分为假手术组(12 只)和实验组(48 只);实验组大鼠采用双侧颈总动脉永久结扎法复制 VD大鼠模型,随后将模型复制成功的大鼠分为模型组、艾灸组、阻滞剂组、艾灸+阻滞剂组,每组 12 只;艾灸组大鼠取"百会""大椎""风府"穴,采用温和灸法治疗,每次 30 min,每日 1 次,治疗 6d,休息 1d,连续治疗 4 周;阻滞剂组在模型复制前 30 min腹腔注射 p38 MAPK阻滞剂(10μmol/L SB203580),模型复制成功后隔日注射 1 次,每次每只大鼠按 1 mL/kg注射 10 μmol/L SB203580,连续注射 4 周;艾灸+阻滞剂组大鼠在阻滞剂组干预方法基础上进行艾灸治疗.采用 Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能,TUNEL法检测大鼠海马组织CA1 区神经元凋亡率,Western blot法和 RT-qPCR法分别检测大鼠海马组织CA1 区 p38 MAPK、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 蛋白及 mRNA表达水平.结果 与模型组比较,艾灸组、阻滞剂组、艾灸+阻滞剂组大鼠平均逃避潜伏期均显著缩短(P<0.05),穿越平台次数显著增加(P<0.05),海马组织CA1 区神经元凋亡率显著降低(P<0.05),p38 MAPK、Caspase-3、Caspase-9 蛋白及 mRNA表达水平均显著降低(P<0.05),Bcl-2 蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);艾灸+阻滞剂组大鼠平均逃避潜伏期较艾灸组、阻滞剂组显著缩短(P<0.05),穿越平台次数显著增加(P<0.05),海马组织 CA1 区神经元凋亡率显著降低(P<0.05),p38 MAPK、Caspase-3、Caspase-9 蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.05),Bcl-2 蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05).结论 艾灸督脉组穴对 VD大鼠的认知功能具有一定的改善作用,其作用机制可能与调控 p38 MAPK信号通路抑制海马神经元凋亡有关.
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编辑人员丨6天前
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STEMI患者外周血单个核细胞中MAPK通路与炎症反应及PCI后无复流的关系
编辑人员丨6天前
目的 研究ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路与炎症反应及经皮冠状动脉介入术(PCI)后无复流的关系.方法 选取郑州市第七人民医院2021年2月至2022年10月进行PCI治疗的STEMI患者和同期进行体检的健康志愿者,分别作为STEMI组(n=92)和对照组(n=100).采用荧光定量PCR法检测PBMCs中p38MAPK、JNK的表达水平,根据中位数将STEMI组患者分为p38MAPK、JNK高表达和低表达.检测STEMI患者血清ICAM-1、TNF-α、IL-6含量,评估STEMI患者心肌损伤程度及无复流情况.结果 STEMI组患者PBMCs中p38MAPK、JNK的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=5.386、5.126,P<0.05);STEMI组中p38MAPK、JNK高表达患者的CK-MB峰值、cTnT峰值及ICAM-1、TNF-α、IL-6含量均高于p38MAPK、JNK低表达患者,差异有统计学意义(t=7.143、4.999、9.528、6.805、6.890、6.226、8.132、7.807、7.162、7.588,P<0.05);STEMI组中无复流患者PBMCs中p38MAPK、JNK的表达水平高于血流正常患者,差异有统计学意义(t=5.208、4.240,P<0.05);经ROC曲线分析,PBMCs中p38MAPK、JNK的表达水平对STEMI患者PCI后无复流具有预测价值(P<0.05).结论 STEMI患者MAPK通路中p38MAPK、JNK的高表达与炎症反应激活、PCI后无复流有关.
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编辑人员丨6天前
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巨噬细胞Bruton酪氨酸激酶基因特异性敲除减轻糖尿病小鼠肾脏损害的作用及机制
编辑人员丨6天前
目的:探讨巨噬细胞Bruton酪氨酸激酶(Btk)基因特异性敲除对糖尿病小鼠肾脏损害的作用及机制。方法:选用巨噬细胞Btk基因特异性敲除(Btk -/-)小鼠和C57BL/6N小鼠链脲菌素(STZ,50 mg/kg)造模成功后随机分为正常组、糖尿病组、Btk -/-组和Btk -/-糖尿病组。12周后测定小鼠一般指标,观察肾组织病理学改变,免疫荧光检测肾组织巨噬细胞标志物CD68表达,免疫组化检测足细胞标志物WT1和Nephrin的表达,Western印迹检测细胞外基质纤维连接蛋白(FN)、IV型胶原(IV-Col)及转化生长因子β1(TGF-β1),巨噬细胞激活标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、磷酸化(p)-Btk,炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路p-p38MAPK、p-JNK、p-ERK以及核因κB(NF-κB)通路p-p65、p-IκB蛋白水平变化;实时荧光定量PCR检测炎性因子IL-1β、TNF-α、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA表达。 结果:与糖尿病组相比,Btk -/-糖尿病组尿白蛋白明显减少,肾组织损伤明显减轻,肾脏巨噬细胞CD68表达明显减少,足细胞标志物WT1及Nephrin表达明显增加,细胞外基质FN、IV-Col及TGF-β1表达明显减少,炎性因子IL-1β、TNF-α及MCP-1表达明显降低,p-JNK、p-ERK、p-p38MAPK及p-p65、p-IκB表达明显下调(均 P<0.05)。 结论:巨噬细胞Btk特异性敲除可能通过MAPK、NF-κB通路降低炎性因子的表达从而对糖尿病小鼠肾脏起到保护作用。
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编辑人员丨6天前
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芍药苷干预对脓毒症大鼠心肌损伤的影响
编辑人员丨6天前
目的:研究芍药苷干预对脓毒症大鼠心肌损伤的影响。方法:采用随机数字表法将SD大鼠分为4组,每组10只。(1)对照组:大鼠腹腔注射1.4 ml生理盐水;(2)二甲基亚砜组:大鼠腹腔注射5%二甲基亚砜溶液1.4 ml;(3)脓毒症模型组:大鼠腹腔注射1.4 ml生理盐水,1 h后腹腔注射0.1 ml(5 mg/kg)脂糖造模;(4)芍药苷干预组:大鼠腹腔注射1.4 ml芍药苷(70 mg/kg),1 h后腹腔注射0.1 ml(5 mg/kg)脂多糖造模。24 h后处死4组大鼠。酶联免疫吸附测定(ELISA)法测4组大鼠血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)及心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、趋化因子C-X-C基序配体1(CXCL1)、趋化因子C-X-C基序配体2(CXCL2)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平,伊文思蓝法测4组大鼠心肌组织中伊文思蓝含量;实时荧光定量聚合酶链式反应法测4组大鼠心肌组织中TNFα、IL-6、IL-1β、CXCL1、CXCL2、VCAM-1mRNA表达;Western-Blot法测血管内皮钙黏蛋白、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(P-p38MAPK)、磷酸化Src蛋白(P-Src)、Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)蛋白表达。结果:与对照组比,脓毒症模型组cTnI增高[(312.9±17.9)pg/ml比(174.4±17.7)pg/ml, P<0.05],伊文思蓝含量上升[(23.8±2.9)μg/g 比(5.2±2.0)μg/g, P<0.05],心肌炎性细胞浸润明显;与脓毒症模型组比,芍药苷干预组cTnI明显降低[(227.7±15.9)pg/ml, P<0.05],伊文思蓝含量显著下降[(13.2±2.3)μg/g, P<0.05],心肌炎性细胞浸润减轻。与对照组比,脓毒症模型组TNFα、IL-6、IL-1β、CXCL1、CXCL2、VCAM-1增高;与脓毒症模型组比,芍药苷干预组TNFα[(63.39±9.55)pg/ml 比(126.54±19.17)pg/ml, P<0.05]、IL-6[(64.03±8.82)pg/ml 比(85.60±9.52)pg/ml, P<0.05]、IL-1β[(69.52±9.23)pg/ml比(130.45±15.10)pg/ml, P<0.05]、CXCL1[(2 600.19±379.54)pg/ml比(4 903.89±533.42)pg/ml, P<0.05]、CXCL2[(93.71±10.83)pg/ml比(127.24±13.92)pg/ml, P<0.05]、VCAM-1[(112.22±13.49)pg/ml 比(149.32±15.65 pg/ml), P<0.05]显著下降。与对照组比,脓毒症模型组TNFα、IL-6、IL-1β、CXCL1、CXCL2、VCAM-1 mRNA表达增高;与脓毒症模型组比,芍药苷干预组IL-6(相对表达量1.271±0.139 比 1.920±0.191, P<0.05)、IL-1β(相对表达量1.180±0.130 比 1.817±0.191, P<0.05)、VCAM-1(相对表达量1.088±0.144 比 1.460±0.166, P<0.05)mRNA表达降低。与对照组比,脓毒症模型组P-p38MAPK、P-Src表达增加,血管内皮钙黏蛋白表达降低。与脓毒症模型组比,芍药苷干预组p38MAPK(相对表达量1.125±0.078 比 1.520±0.164, P<0.05)、P-p38MAPK(相对表达量 1.639±0.133 比 2.112±0.227, P<0.05)表达均明显下降,血管内皮钙黏蛋白表达升高。 结论:芍药苷能改善脓毒症大鼠心脏微血管内皮通透性,抑制炎症相关蛋白及基因的分泌和表达,可能与芍药苷抑制Src/血管内皮钙黏蛋白通路有关。
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编辑人员丨6天前
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改良大鼠肺再灌注损伤动物模型建立与评估
编辑人员丨6天前
目的:建立改良大鼠肺再灌注(IR)损伤模型,评估其病理生理表现,探讨其可行性和重复性。方法:28只成年SD大鼠,每组14只,随机分为假手术组(SHAM组)和肺IR损伤组(IR组)。IR组全麻下气管切开机械通气,仰卧位开胸,找到解剖标志物支气管软骨,暂停通气并置入止血夹,恢复通气,阻断肺门30 min后开放IR 45 min。SHAM组全麻下气管切开机械通气,分离肺门相同时间后关胸。术后抽取动脉血气,肺组织进行大体及HE染色,观察病理改变,测定干湿比,并用Western Blot法检测肺组织中氧化应激通路p38MAPK及NF-κB信号通路、炎性因子TNF-α、内皮细胞功能标志物eNOS表达水平。结果:肺IR损伤可见气管内粉红色水样分泌物,肺大体呈水肿、淤血征象。肺泡炎评分显著升高,干湿比升高,伴p38MAPK、NF-κB信号通路激活,TNF-α表达显著升高,eNOS表达显著下降。结论:左侧夹闭肺门、双侧IR损伤模型是一种实用动物模型,该改良手术方法操作简单、成本低,安全性及可重复性高。
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编辑人员丨6天前
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丝裂原活化蛋白激酶通路与抑郁的关系
编辑人员丨6天前
抑郁的发病机制目前尚不明确,且抗抑郁治疗的疗效有限,因此研究抑郁的发病机制、寻找新的有效的治疗靶点至关重要。目前认为应激等危险因素作用后激活的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路与抑郁发生密切相关。其中p38通路是经典的炎性通路,c-Jun氨基末端激酶通路活化后可参与细胞凋亡,二者均可促进抑郁发生;细胞外信号调节蛋白激酶通路被认为具有抗细胞凋亡作用,因此在抗抑郁方面起重要作用。总之,抑郁发生与炎症反应导致的抑郁相关脑区细胞凋亡坏死有关,而MAPK通路在其中起着重要的调控作用。笔者现对MAPK通路与抑郁的关系及其可能的炎症反应、细胞凋亡机制进行综述,旨在帮助同道进一步了解抑郁的发病机制,为寻求新的治疗靶点提供思路借鉴。
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编辑人员丨6天前