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Hepatocyte growth factor protects pulmonary endothelial barrier against oxidative stress and mitochondria-dependent apoptosis
编辑人员丨1周前
Background::Pulmonary microvascular endothelial cells (PMVECs) were not complex, and the endothelial barrier was destroyed in the pathogenesis progress of acute lung injury (ALI)/acute respiratory distress syndrome (ARDS). Previous studies have demonstrated that hepatocyte growth factor (HGF), which was secreted by bone marrow mesenchymal stem cells, could decrease endothelial apoptosis. We investigated whether mTOR/STAT3 signaling acted in HGF protective effects against oxidative stress and mitochondria-dependent apoptosis in lipopolysaccharide (LPS)-induced endothelial barrier dysfunction and ALI mice.Methods::In our current study, we introduced LPS-induced PMEVCs with HGF treatment. To investigate the effects of mammalian target of rapamycin (mTOR)/signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3) pathway in endothelial oxidative stress and mitochondria-dependent apoptosis, mTOR inhibitor rapamycin and STAT3 inhibitor S3I-201 were, respectively, used to inhibit mTOR/STAT3 signaling. Moreover, lentivirus vector-mediated mTORC1 (Raptor) and mTORC2 (Rictor) gene knockdown modifications were introduced to evaluate mTORC1 and mTORC1 pathways. Calcium measurement, reactive oxygen species (ROS) production, mitochondrial membrane potential and protein, cell proliferation, apoptosis, and endothelial junction protein were detected to evaluate HGF effects. Moreover, we used the ALI mouse model to observe the mitochondria pathological changes with an electron microscope in vivo.Results::Our study demonstrated that HGF protected the endothelium via the suppression of ROS production and intracellular calcium uptake, which lead to increased mitochondrial membrane potential (JC-1 and mitochondria tracker green detection) and specific proteins (complex I), raised anti-apoptosis Messenger Ribonucleic Acid level (B-cell lymphoma 2 and Bcl-xL), and increased endothelial junction proteins (VE-cadherin and occludin). Reversely, mTOR inhibitor rapamycin and STAT3 inhibitor S3I-201 could raise oxidative stress and mitochondria-dependent apoptosis even with HGF treatment in LPS-induced endothelial cells. Similarly, mTORC1 as well as mTORC2 have the same protective effects in mitochondria damage and apoptosis. In in vivo experiments of ALI mouse, HGF also increased mitochondria structural integrity via the mTOR/STAT3 pathway. Conclusion::In all, these reveal that mTOR/STAT3 signaling mediates the HGF suppression effects to oxidative level, mitochondria-dependent apoptosis, and endothelial junction protein in ARDS, contributing to the pulmonary endothelial survival and barrier integrity.
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编辑人员丨1周前
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齐墩果酸对糖尿病大鼠心肌保护作用及机制研究
编辑人员丨1周前
目的:观察研究齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy, DCM)大鼠心脏的保护作用及其机制。方法:50只健康4周龄雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为正常对照组(CON)、糖尿病组(DM)、糖尿病+齐墩果酸组(DM+OA)、糖尿病+氯喹(chloroquine,CQ)组(DM+CQ)和糖尿病+齐墩果酸+氯喹组(DM+OA+CQ),每组10只。通过喂食高脂高糖食物(质量百分比35.5%)和腹腔注射链脲霉素建立糖尿病动物模型。OA 80 mg/(kg·d)灌胃喂药4周,CQ 10 mg/(kg·d)腹腔注射4周。于20周后进行超声心功能检测后麻醉取大鼠心脏组织。采用超声心动图检测SD大鼠心脏功能,并通过Western blot技术对自噬相关蛋白LAMP2、p-ULK1、p-p70S6K、p-raptor、LC3、p62进行蛋白半定量分析,观察大鼠心功能及心肌细胞中自噬相关蛋白表达的变化。正态分布计量资料多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK- q检验。 结果:与CON组相比,DM组大鼠心脏舒张末期心肌前壁厚度、左室舒张末期容积、左室收缩末期容积[(7.58±0.25)mm、(376.6±13.6)μL、(132.6±10.8)μL]低于CON组[(8.37±0.11)mm、(458.3±16.4)μL、(166.6±12.8)μL](均 P<0.05)。与DM组比较,DM+OA组大鼠心脏舒张末期心肌前壁厚度、左室舒张末期容积、左室收缩末期容积[(8.63±0.14)mm、(473.6±18.6)μL、(174.6±12.7)μL]高于DM组(均 P<0.05)。DM+OA+CQ组大鼠心脏舒张末期心肌前壁厚度、左室舒张末期容积、左室收缩末期容积[(7.97±0.17)mm、(393.6±15.6)μL、(147.6±10.2)μL]低于DM+OA组(均 P<0.05)。DM组心肌细胞自噬相关蛋白p-ULK1表达升高、p-p70S6K及p-raptor表达降低(均 P<0.05)。与DM组比较,OA治疗组心脏功能障碍减轻,伴随p62表达降低、LC3 Ⅱ/Ⅰ表达升高(均 P<0.05)。与DM+CQ组比较,DM+OA+CQ组p62表达降低,LC3 Ⅱ/Ⅰ表达升高(均 P<0.05)。 结论:OA对糖尿病大鼠的心肌具有保护作用,其机制可能与增强自噬有关。
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编辑人员丨1周前
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没药甾酮通过调控mTOR/自噬通路增强替莫唑胺抗脑胶质瘤的作用研究
编辑人员丨1个月前
目的:探讨没药甾酮增强化疗药物替莫唑胺抗脑胶质瘤的作用及其分子机制.方法:用没药甾酮、替莫唑胺单药及其联合处理U251 细胞后,采用平板克隆形成实验、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)实验检测各组细胞增殖能力;采用Transwell小室实验、划痕愈合实验检测各组细胞侵袭、迁移能力;采用Western Blot检测细胞中mTOR/自噬通路关键蛋白的表达水平.结果:低氧条件下(200 μmol/L的CoCl2 诱导 48 h),没药甾酮单药(10、30、100 μmol/L)和替莫唑胺单药(6.25、12.5、25 μmol/L)能显著抑制U251 细胞克隆形成数(P<0.001);与替莫唑胺单药组(6.25、12.5 μmol/L)比较,没药甾酮(10 μmol/L)联合替莫唑胺(6.25、12.5 μmol/L)抑制U251 细胞克隆形成的作用增强,但差异无统计学意义(P>0.05).没药甾酮单药(10、30、100 μmol/L)和替莫唑胺单药(100、200、400 μmol/L)显著下调了U251 细胞EdU阳性细胞率;与替莫唑胺单药组(200、400 μmol/L)比较,没药甾酮(30、100 μmol/L)联合替莫唑胺(200、400 μmol/L)显著下调了U251 细胞EdU阳性细胞率(P<0.05 或P<0.01).与替莫唑胺单药(400 μmol/L)比较,联用没药甾酮(30 μmol/L)显著抑制U251 细胞迁移、侵袭能力(P<0.001).与替莫唑胺单药(400 μmol/L)比较,联用没药甾酮(30 μmol/L)显著下调U251 细胞中Phospho-mTOR(Ser2448)、Phospho-4E-BP1(Ser65)蛋白表达,显著上调 MAPKAP1、p-P70(S6K)蛋白表达(P<0.05 或 P<0.01),对 mTOR、Phospho-mTOR(Ser2481)、Rictor、Raptor、GβL表达的下调也有一定的增强作用,但差异无统计学意义.与替莫唑胺单药(400 μmol/L)比较,联用没药甾酮(30 μmol/L)显著上调U251 细胞中自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62的表达(P<0.05~P<0.001),对Atg12-5/free-Atg12 也有上调作用,但差异无统计学意义.结论:没药甾酮可通过调控mTOR/自噬信号通路增强替莫唑胺抗脑胶质瘤作用.
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编辑人员丨1个月前
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mTOR蛋白对老龄大鼠肌腱干细胞修复能力影响
编辑人员丨2024/2/3
[目的]探讨mTOR蛋白对老龄大鼠肌腱干细胞肌腱损伤修复能力的影响.[方法]体外培养青年组和老年组大鼠肌腱干细胞,使用腺病毒转染调控mTOR表达,Western blot检测mTOR和相关蛋白.制作老龄大鼠髌腱损伤模型,分为mTOR表达、mTOR干扰、GFP(green fluorescent protein绿色荧光蛋白)和空白组,在2周和4周取大鼠修复肌腱组织,行组织学、组织免疫化学和生物力学检测.[结果]体外试验方面,Western blot结果显示,老年组mTOR[(1.8±0.1)vs(0.9±0.1),P<0.05]、Raptor[(4.1±0.3)vs(2.2±0.3),P<0.05]及 P-Raptor[(1.8±0.1)vs(0.9±0.1),P<0.05]均显著高于青年组;而两组间 AKT、P-Akt、S6K、P-S6k的差异无统计学意义(P>0.05).老年大鼠TSCs体外转染后mTOR、Raptor及P-Raptor表达从高到低的顺序:mTOR的表达组>GFP组>mTOR干扰组(P<0.05).体内试验方面,与术后2周相比,术后4周四组HE组织评分均显著增加(P<0.05),相应时间点分数从高到低的顺序依次为mTOR干扰组>GFP组>mTOR表达组>空白组,差异均有统计学意义(P<0.05).与术后2周相比,术后4周,Col1及SCX的表达均无显著变化(P>0.05),相应时间点,四组间Col1、SCX的表达定量从高到低依次为mTOR干扰组>GFP组>空白组>mTOR表达组,差异均有统计学意义(P<0.05).与术后2周相比,术后4周四组最大损毁强度均显著增加(P<0.05),相应时间点,最大损毁强度值从大到小依次为mTOR干扰组>GFP组>空白组>mTOR表达组,差异均有统计学意义(P<0.05).[结论]抑制mTOR蛋白可加强老龄大鼠肌腱干细胞的修复能力.
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编辑人员丨2024/2/3
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Home range variability and philopatry in Cinereous vultures(Aegypius monachus)breeding in Iberia
编辑人员丨2024/2/3
Large scavengers are strongly dependent on environmental conditions and carrion distribution and abundance,so season and breeding-related factors may influence the spatial ecology of species such as the Cinereous Vulture(Aegypius monachus),the largest European raptor.Iberia holds one of the biggest populations worldwide,but some aspects of the spatial ecology of the species in this region remain unknown.In this study,17 adult Cinereous Vultures were GPS-tracked in order to study their spatial ecology during the adult phase.The average monthly home ranges(95%Kernel Density Estimation,KDE)and core areas(50%KDE)were 6543±19,935 km2 and 1174±4004 km2,respectively.The average monthly home range fidelity ranged between 50 and 73%.Differ-ences in movement-related variables between the seasonal periods(incubation,chick-rearing and non-breeding)were found.During the chick-rearing period,the monthly accumulated distance was higher than during the other periods:3316±1108(chick-rearing)vs.1621±622(incubation)vs.1726±1159 km per month(non-breeding).Additionally,large home range sizes were more frequent during the chick-rearing period.There are two likely causes for these seasonal differences.Firstly,chick-rearing entails a higher energetic expenditure by the parental individuals in foraging activities,so larger movements and foraging areas are expected during this period.Secondly,the flight is favoured during spring and summer due to environmental conditions.Matching chick-rearing and warm months is a great evolutionary advantage for soaring-gliding raptors,as it allows them to cover larger areas with low energy expenditure.Furthermore,six individuals tagged as nestlings highlight the philopatric behaviour of the species:vultures settle their breeding areas 54±51 km from their natal nest(range=9-138 km).
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编辑人员丨2024/2/3
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大鼠心脏移植模型中mTOR C1/C2信号通路在消除慢性排斥反应中的作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究抑制了慢性排斥反应的大鼠模型中,T淋巴细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白-丝/苏氨酸蛋白激酶(mTOR)通路的各成分是否发生改变,探讨mTOR信号通路在抑制慢性排斥反应中的作用.方法 受体August-Copenhagen-Irish(ACI)大鼠与供体Wistar-Furth (WF)大鼠接受腹腔内异位心脏移植术.实验组大鼠给予慢性排斥反应消除处理,即术前给予经改造的Ⅰ类主要组织相容性复合物(MHC Ⅰ),并给予亚治疗量环孢素(CsA)(10 mg/kg,3d),治疗对照组于术后给予亚治疗量CsA(10 mg/kg,3 d),空白对照组不进行处理.将每组大鼠分为在术后1、3、7d处死的3个亚组,每个亚组大鼠数量为5只.分别在亚组对应天数处死大鼠,获取脾脏样本进行T细胞提取与蛋白免疫印迹(Western blot)分析.结果 蛋白免疫印迹结果表明,在消除了慢性排斥反应的移植心脏中(实验组),对雷帕霉素敏感的复合体1 (mTOR C1)的mTOR与mTOR调节相关蛋白(Raptor)下调,对雷帕霉素不敏感的复合体2(mTOR C2)的伴侣分子(Rictor)与哺乳动物应激活化蛋白激酶相互作用蛋白1 (Sin1)下调,mTOR调节因子(Deptor)与mTOR通路下游目标分子(Rac1)也受到抑制.结论 在消除了慢性排斥反应的大鼠心脏移植模型中,mTORC1和C2通路均受到影响,同时影响了细胞增殖调节(mTOR C1)和细胞运动调节(mTOR C2).因此,选择性地对T细胞肌动蛋白细胞骨架通路进行抑制,可成为新的免疫抑制剂发展方向.
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编辑人员丨2023/8/6
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Raptor通过Wnt3a/β-catenin信号通路对乳腺癌侵袭与转移的作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨Raptor是否可以通过Wnt3a/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞的侵袭与转移.方法 采用免疫印迹法(Western blotting)检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231(MDA231)中Raptor蛋白的表达情况;采用小RNA(RNAi)干扰技术将质粒转染MDA231,将过表达质粒转染MCF-7;趋化运动实验检测乳腺癌细胞的运动能力;Transwell侵袭实验检测乳腺癌细胞的侵袭能力;Western blotting检测上皮细胞-间充质转化(EMT)标志物的表达情况;核质分离实验检测β-联蛋白(β-catenin)的转核情况.结果 Western blotting法检测结果显示,Raptor在低转移细胞系MCF-7中低表达,而在高转移细胞系MDA231中高表达.转染后,SiRaptor/M DA231细胞组中Raptor蛋白的表达明显下降,MCF-7/Raptor细胞组中Raptor蛋白的表达明显升高,表明转染成功.用Wnt3a刺激处理后,趋化运动和Transwell侵袭实验结果显示,SiRaptor/MDA231细胞组运动和侵袭能力明显降低,MCF-7/Raptor细胞组运动和侵袭能力明显增强.Western blotting法检测结果显示,用Wnt3a和抑制剂Dkk1不同处理后,SiRaptor/MDA231细胞组中上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)上调,波形蛋白(vimentin)下调,细胞核中β-catenin的表达降低,而MCF-7/Raptor细胞组中E-cadherin蛋白下调,vimentin蛋白上调,β-catenin蛋白的表达升高.结论 Raptor能通过Wnt3 a/β-catenin信号通路促进EMT的发生,进而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移.
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编辑人员丨2023/8/6
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氧化苦参碱对皮肤鳞状细胞癌Colo-16细胞株凋亡及自噬影响的研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨氧化苦参碱对皮肤鳞状细胞癌(cSCC)Colo-16细胞株凋亡及自噬的影响.方法:用不同浓度的氧化苦参碱处理Colo-16细胞株24h后,用流式细胞仪测定不同浓度氧化苦参碱组Colo-16细胞株凋亡率,用免疫印迹(western blot)法测定不同浓度组细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ的表达及LC3-Ⅰ→LC3-Ⅱ转化率.同时用western blot法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、mTOR调节相关蛋白(Raptor)及其mTORser2448、ser2481位点磷酸化产物和Raptor ser792位点磷酸化产物的表达.结果:1.000 g/L、2.000 g/L、4.000 g/L氧化苦参碱浓度组凋亡率明显高于阴性对照组,差异有统计学意义(F=355.12,P<0.05),不同浓度组之间凋亡率差异也有统计学意义(P<0.05).western blot法发现,阴性对照组、溶剂对照组及氧化苦参碱分别为0.025 g/L、0.050 g/L、0.100 g/L、0.500 g/L、1.000 g/L、2.000 g/L各组之间LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ的表达及LC3-Ⅰ→LC3-Ⅱ转化率比较,差异无统计学意义(F值分别为0.86,0.63,0.33,P>0.05),各组别之间mTOR、Raptor蛋白及其mTORser2448、ser2481位点磷酸化产物和Raptor ser792位点磷酸化产物的表达,差异均无统计学意义(F值分别为1.33、1.42、1.12、0.95及0.47,P>0.05).结论:氧化苦参碱可上调Colo-16细胞株的凋亡,且与其浓度正相关.氧化苦参碱对细胞自噬的水平无影响,对自噬相关调控蛋白的表达也无影响.因此,氧化苦参碱可能通过上调Colo-16细胞株的凋亡而非自噬来实现其抗肿瘤效应.
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编辑人员丨2023/8/6
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mTtor通路在糖尿病肾病大鼠足细胞损伤中的作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察mTOR阻断剂对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞蛋白的影响,探讨mTOR通路在DN足细胞损伤中的可能机制.方法 以正常大鼠作为对照组(A组);STZ造模,模型组随机分为DN组(B组)、DN+FK506干预组(C组)、DN+ku0063794干预组(D组).C、D组分别予FK506、ku0063794灌胃.灌胃前1 d、灌胃4、8周分别检测各组大鼠血糖、内生肌酐清除率(Ccr)、24 h尿蛋白;4、8周时检测肾组织mTOR、Raptor、Rictor、Ezrin、α-SMA的表达.结果 4周、8周时C、D组24 h尿蛋白低于B组(P<0.05);Ccr高于B组(P<0.05);mTOR、Raptor、Rictor在B组升高,C、D组均下降(P<0.05);B组Ezrin蛋白明显低于A组(P<0.05),C、D组表达上升(P<0.05);B组α-SMA蛋白高于A组(P<0.05),C、D组降低(P<0.05);病理评分C、D组均较B组降低(P<0.05).相关性分析中Rictor与α-SMA呈正相关(P<0.05),与Ezrin呈负相关(P<0.05);Raptor与Ezrin、α-SMA均无相关性.结论 阻断mTOR通路能降低DN大鼠的尿蛋白、升高Ccr、改善肾脏病理,对肾脏有保护作用;mTORC2信号通路可能参与了DN的足细胞的Ezrin、α-SMA蛋白的表达;FK506也可能阻断mTORC2通路.
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编辑人员丨2023/8/6
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曲妥珠单抗联合紫杉醇新辅助化疗对HER-2阳性乳腺癌病灶内细胞增殖、侵袭的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究曲妥珠单抗联合紫杉醇新辅助化疗对人表皮生长因子受体-2(HER-2)阳性乳腺癌病灶内细胞增殖、侵袭的影响.方法:选择2015年4月-2017年1月期间在湖北省恩施州中心医院诊断为HER-2阳性乳腺癌的患者,随机分为两组,联合组接受曲妥珠单抗联合紫杉醇化疗、对照组接受紫杉醇化疗.取手术切除的乳腺癌病灶并测定细胞增殖基因、细胞侵袭基因及血管新生分子的表达量.结果:联合组患者肿瘤病灶内 USP39、EphA2、NUAK1、Gab2、Raptor、ICAM-1、HIF-1α、VEGF、ANGPLT-2、ANGPLT-4的mRNA表达量显著低于对照组,CCN5、ALEX1、ATG2B、ATG4D、E-cadherin、EBP50的mRNA表达量显著高于对照组.结论:曲妥珠单抗联合紫杉醇新辅助化疗能够抑制HER-2阳性乳腺癌病灶内细胞的增殖、侵袭并减少血管新生.
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编辑人员丨2023/8/6