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以双侧颅神经麻痹为临床表现的鼻眶脑毛霉菌病的临床特点(附1例报告)
编辑人员丨1天前
目的 探讨以双侧颅神经麻痹为临床表现的鼻眶脑毛霉菌病(ROCM)的临床特点.方法 回顾性分析1 例以双侧颅神经麻痹为临床表现的ROCM患者的临床资料,并结合相关文献进行分析讨论.结果 本例患者青年男性,既往体健,有新发糖尿病及糖尿病酮症酸中毒.该患者急性起病,进展迅速,出现双眼失明、双上眼睑下垂和眼外肌麻痹,CSF二代测序、真菌荧光染色涂片和培养均证实存在毛霉菌.虽然早期积极给予有效抗真菌治疗,但是患者迅速出现脑出血及脑疝,最终自动出院后死亡.结论 ROCM是罕见的高死亡率感染性疾病.对于糖尿病/糖尿病酮症酸中毒患者,当双侧颅神经麻痹作为临床症状且不能用其他病变解释时,建议考虑是否存在ROCM.CSF二代测序有助于快速诊断.
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编辑人员丨1天前
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鳖甲煎丸调控EGFR/MAPK/ERK通路对MHCC-97H肝癌细胞的影响
编辑人员丨1天前
目的 探讨鳖甲煎丸通过miR-885-5p对表皮生长因子受体(EGFR)/丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的靶向调控对MHCC-97H肝癌细胞的影响及作用机制.方法 SPF级SD大鼠10只随意分为空白组和鳖甲煎丸(1.1 g/kg)组,制备空白及鳖甲煎丸含药血清.取对数生长期的MHCC-97H细胞,分为模型组、不同质量分数(5%、10%、15%、20%)空白血清梯度组和鳖甲煎丸含药血清梯度组,以及不含细胞的空白组.CCK-8法检测细胞增殖,筛选含药血清最佳干预时间及质量分数.将MHCC-97H细胞分为空白对照组(不做任何处理)、鳖甲煎丸含药血清组(20%鳖甲煎丸含药血清)、miR-885-5p mimics组(转染miR-885-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-885-5p阴性对照物)、鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组(20%鳖甲煎丸含药血清和转染miR-885-5p mimics),各组细胞均培养72 h.采用双荧光素酶报告实验验证miR-885-5p与EGFR的靶向关系.CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,Annexin V-APC/PI双染色法检测细胞凋亡水平,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-885-5p、EGFR、MAPK的激酶(MEK)、ERK1、ERK2 mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测EGFR、磷酸化的EGFR(p-EGFR)、MEK、磷酸化的MEK(p-MEK)、ERK1、ERK2、磷酸化的ERK1(p-ERK1)、磷酸化的ERK2(p-ERK2)、基质金属蛋白酶1(MMP1)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达;通过皮下注射法建立裸鼠MHCC-97H肝癌细胞皮下瘤模型,观察不同剂量鳖甲煎丸(0.55、1.1、2.2g/kg)对裸鼠肝癌皮下瘤的抑制效果.结果 筛选出鳖甲煎丸含药血清最佳干预质量分数及时间为20%、72 h,同时,双荧光素酶报告实验显示,miR-885-5p可以直接靶向结合EGFR;各项实验报告显示空白对照组和miR-NC组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清组、miR-885-5p mimics组和鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组MHCC-97H肝癌细胞增殖率明显降低(P<0.01),迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05,P<0.01),同时,与细胞增殖、侵袭密切相关的蛋白CyclinD1和MMP1的蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),晚期凋亡率和总凋亡率均明显升高,促进细胞凋亡(P<0.01);鳖甲煎丸含药血清组、miR-885-5p mimics组和鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组明显上调miR-885-5p mRNA(P<0.01),抑制EGFR、MEK、ERK1、ERK2 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),抑制EGFR、MEK、ERK1、ERK2磷酸化激活(P<0.01),其中,鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组效果最好(P<0.05,P<0.01).裸鼠肝癌皮下瘤模型验证了鳖甲煎丸可抑制裸鼠肝癌皮下瘤生长.结论 鳖甲煎丸可促进MHCC-97H肝癌细胞凋亡,抑制其增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能和通过miR-885-5p靶向调控EGFR/MAPK/ERK信号通路有关.
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编辑人员丨1天前
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血性羊水细胞培养方法的改良与应用
编辑人员丨1天前
目的 比较血性羊水不同培养方法的成功率.方法 收集2021年1月至2022年12月安徽省妇幼保健院行染色体检查的血性羊水标本31例,31例均采用两线培养法:1线载玻片原位培养盒法(简称原位培养法),1线塑料培养瓶和原位培养盒联合培养法(简称联合培养法),收获培养细胞并行吉姆萨染色,比较两种培养方法的成功率和有效染色体核型数量.结果 原位培养法31例,21例培养成功,成功率67.7%;联合培养法31例均培养成功,成功率100%;联合培养法成功率高于原位培养法(P<0.05).31例血性羊水中,3例新鲜出血,原位培养法平均有效核型数为8,联合培养法平均有效核型数为32;28例陈旧性出血,原位培养法平均有效核型数为13,联合培养法平均有效核型数为53.联合培养法的有效核型数高于原位培养法(P<0.05).结论 联合培养法适用于血性羊水标本的培养,值得推广应用.
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编辑人员丨1天前
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丁苯酞拮抗依托泊苷诱导的血管内皮细胞衰老
编辑人员丨1天前
目的 探讨丁苯酞(3-n-butylphthalide,NBP)对依托泊苷诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endo-thelial cells,HUVEC)衰老的影响.方法 将HUVEC分为空白对照组(内皮细胞培养液)、依托泊苷组(500 nmol/L依托泊苷+二甲基亚砜)、依托泊苷+NBP低浓度组(500 nmol/L依托泊苷+5 μmol/L NBP)、依托泊苷+NBP中浓度组(500 nmol/L依托泊苷+10 μmol/L NBP)、依托泊苷+NBP高浓度组(500 nmol/L依托泊苷+20μmol/L NBP)组.通过衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测衰老细胞比例变化;实时荧光定量聚合酶链反应检测衰老相关分泌表型,如白细胞介素(IL)-8、IL-1β、CXC趋化因子配体1(CXCL1)mRNA水平变化;蛋白质免疫印迹检测衰老相关蛋白P21表达水平变化;免疫荧光染色检测增殖相关蛋白Ki67阳性细胞比例变化.结果 与空白对照组比较,依托泊苷组P21表达、SA-β-gal染色阳性细胞比例、IL-8、IL-1β、CXCL1的mRNA水平均显著升高[1.00±0.00 vs 0.59±0.09、(29.58±4.51)%vs(11.27±1.18)%、2.49±0.11 vs 1.00±0.03、6.32±0.15 vs 1.00±0.03、2.40±0.24 vs 1.00±0.04,P<0.05],Ki67 阳性细胞比例显著降低[(5.95±1.55)%vs(27.38± 7.00)%,P<0.05];与依托泊苷组比较,依托泊苷+NBP低浓度组的SA-β-gal染色阳性细胞比例、P21蛋白表达水平、IL-1β的mRNA水平均降低(P<0.05),Ki67阳性细胞比例增加(P<0.05).结论 NBP对依托泊苷诱导的血管内皮细胞衰老具有拮抗作用.
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编辑人员丨1天前
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益肺汤调控TGF-β1/Smad2通路抗肺纤维化机制研究
编辑人员丨1天前
目的:研究益肺汤含药血清对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的肺成纤维细胞(NIH-3T3)的影响,探讨其抑制肺纤维化的作用机制.方法:采用SPF级C57小鼠灌胃益肺汤,1次/d,连续给药3 d制备含药血清.实验分为正常对照组、模型组、模型+正常血清组、模型十含药血清组,给药48 h后0.1%FBS的培养基饥饿处理24 h,100 ng/μl的Ang Ⅱ诱导造模24 h.免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);免疫荧光检测Smad2;Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白(ColⅠ)、α-SMA、纤维连接蛋白(FN)、Smad2;ELISA检测细胞上清转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况.结果:Western blot和免疫荧光显示,造模后,α-SMA、FN、Col Ⅱ、Smad2的蛋白相对表达显著升高,差异具有统计学意义(均P<0.05).益肺汤含药血清干预48 h后造模,α-SMA、FN、Smad2、Col Ⅱ的相对量较模型组下降(均P<0.05).ELISA结果显示,造模后,TGF-β1的相对表达显著升高(P<0.05),益肺汤含药血清干预48 h后,TGF-β1相对量较模型组下降(P<0.05).结论:益肺汤含药血清对Ang Ⅱ诱导的NIH-3T3有一定影响,可有效减轻肺纤维化,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smad2信号通路,降低α-SMA、Col Ⅱ、FN的表达有关.
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编辑人员丨1天前
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基于NLRP3炎症通路研究通窍方对腺样体上皮细胞焦亡的影响
编辑人员丨1天前
目的 探索通窍方含药血清抑制腺样体上皮细胞焦亡的作用机制.方法 选择 2022 年 3 月至 2023 年3 月在银川市第一人民医院耳鼻喉科行腺样体切除术的腺样体肥大(adenoidal hypertrophy,AH)患儿,收集术后切除的腺样体组织,采用组织块贴壁法分离上皮细胞,并进行培养及鉴定.用透射电镜观察腺样体上皮细胞的超微结构;用CCK-8 法筛选通窍方含药血清的最佳干预浓度.将培养至适宜浓度的人原代腺样体上皮细胞分为 4 组,分别是空白对照组、孟鲁司特钠组、通窍方组、MCC950 组(MCC950,10 μmol·L-1).各组给予相应的含药血清处理 24h后,采用RT-qPCR法和Western blot法分别检测NOD样受体蛋白 3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-1)、白细胞介素(IL)1β、IL-18 基因及蛋白表达水平;Tunnel染色法检测细胞凋亡情况;ELISA法检测IL-18、IL-1β、IL-6 和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量.结果 AH患儿的原代腺样体上皮细胞呈不规则型,轮廓不清,折光性较差;免疫荧光细胞鉴定泛角蛋白阳性率高.透射电镜下腺样体上皮细胞可见到明显焦亡征象.通窍方低剂量组细胞存活率最高(P<0.05).与空白对照组相比,通窍方组、孟鲁司特钠组、MCC950 组的NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 基因及蛋白表达量均降低(P均<0.05);细胞凋亡率下降(P均<0.05);细胞上清液中IL-18、IL-1β、IL-6 和TNF-α含量均下降(P均<0.01).结论 通窍方含药血清可通过抑制腺样体上皮细胞焦亡而下调炎症因子表达,其机制或与调节NLRP3 介导的细胞焦亡信号通路有关.
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编辑人员丨1天前
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基于JAK2/STAT3通路研究周氏固金消瘤汤含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响
编辑人员丨1天前
目的:探讨周氏固金消瘤汤(ZSGJXLT)含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响及其机制.方法:应用健康SD大鼠制备ZSGJXLT含药血清与空白血清,将0%(空白血清)及5%、10%、20%、30%、40%ZSGJXLT含药血清作用于A549细胞,CCK-8法测算细胞活性抑制率和半数抑制浓度(IC50).用0%ZSGJXLT(空白对照组)、5%ZSGJXLT(ZSGJXLT 低剂量组)、10%ZSGJXLT(ZSGJXLT 中剂量组)及 20%ZSGJXLT(ZSGJXLT高剂量组)含药血清培养A549细胞,细胞划痕实验及高内涵细胞成像技术观察细胞运动情况;Transwell侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移情况;Western blot法检测A549细胞JAK2/STAT3通路相关蛋白表达情况.结果:与空白对照组相比,不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞活性受到不同程度的抑制,与时间及浓度呈正相关性,24 h的IC50为25.42%.与空白对照组相比,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞划痕愈合率、细胞移动速度均显著下降(均P<0.05),不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞侵袭及迁移数量明显减少(均P<0.05).与空白对照组比较,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞的p-JAK2、p-STAT3、VEGFA蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);不同浓度ZSGJXLT含药血清组MMP-2、MMP-9、N-cadherin蛋白表达有下调趋势,而E-cadherin蛋白表达有上调趋势,呈剂量依赖性,其中ZSGJXLT高剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05).结论:周氏固金消瘤汤含药血清能抑制A549细胞侵袭迁移能力,其机制可能与调控JAK2/STAT3通路有关.
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编辑人员丨1天前
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HTRA3基因对脉络膜新生血管和M2型巨噬细胞极化的影响
编辑人员丨1天前
目的 探讨HtrA丝氨酸肽酶3(HTRA3)基因对脉络膜新生血管(CNV)和M2型巨噬细胞极化的影响.方法 收集30例湿性年龄相关性黄斑变性(wAMD)患者(wAMD组)和30例同期健康体检者(健康组)的空腹静脉血,通过qRT-PCR检测血清HTRA3 mRNA水平.将RF/6A细胞随机分为对照组、NC-sh组和HTRA3-sh组,使用Lipofectamine2000将NC-shRNA和HTRA3-shRNA慢病毒载体分别转染到NC-sh组和HTRA3-sh组RF/6A细胞中,通过qRT-PCR和Western blot检测HTRA3的转染情况.将RF/6A细胞随机分为N组、H组、H+NC-sh组和H+HTRA3-sh组,细胞转染后,N组RF/6A细胞在完全RPMI 1640培养基中进行常氧培养,其他组细胞在添加200 mmol·L-1氯化钴(CoCl2)的RPMI 1640培养基中进行低氧培养,使用Matrigel测定小管形成.将C57BI/6J小鼠随机分为对照组、CNV组、CNV+NC-sh组和CNV+HTRA3-sh组,每组12只.对照组为未建模的小鼠,其他组为激光诱导的CNV模型小鼠.向CNV+NC-sh组和CNV+HTRA3-sh组小鼠玻璃体内分别注射1μL滴度为1 × 1011 TU·mL-1的NC-shRNA和HTRA3-shRNA慢病毒载体.对照组和CNV组小鼠注射PBS.注射后7 d,对小鼠进行荧光素眼底血管造影(FFA)检测和眼球苏木精伊红(HE)染色.通过qRT-PCR检测RF/6A细胞或各组小鼠脉络膜组织中HTRA3、类几丁质酶3样蛋白3(Ym-1)、精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平.通过Western blot检测RF/6A细胞或脉络膜组织中HTRA3、VEGF和细胞核核因子κB(NF-κB)p65的蛋白表达水平.结果 与健康组比较,wAMD组患者的血清HTRA3 mRNA水平升高(t=11.804,P<0.001).与对照组和NC-sh组比较,HTRA3-sh组RF/6A细胞的HTRA3 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05).与N组比较,H组RF/6A细胞的闭合管腔数量、HTRA3和VEGF的mRNA和蛋白表达水平均增加(均为P<0.05).与H+NC-sh组比较,H+HTRA3-sh组RF/6A细胞的闭合管腔数量、HTRA3和VEGF的mRNA和蛋白表达水平均减少(均为P<0.05).与对照组比较,CNV组小鼠的HTRA3的mRNA和蛋白表达水平增加,CNV相对荧光强度升高,Ym-1和Arg-1 mRNA水平升高,iNOS和COX-2 mRNA水平降低,细胞核NF-κB p65蛋白表达水平升高(均为P<0.05).与CNV+NC-sh组比较,CNV+HTRA3-sh组小鼠的HTRA3的mRNA和蛋白表达水平减少,CNV相对荧光强度降低,Ym-1和Arg-1 mRNA水平降低,iNOS和COX-2 mRNA水平升高,细胞核NF-KB p65蛋白表达水平降低(均为P<0.05).结论 下调HTRA3可抑制CNV形成和M2型巨噬细胞极化,HTRA3可能是防治wAMD的重要潜在靶点.
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编辑人员丨1天前
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140例感染性肺炎患儿痰液细菌培养病原菌的分布特征与耐药性
编辑人员丨1天前
目的 分析140例小儿感染性肺炎痰培养病原菌分布特征和耐药性.方法 采集2022年6月至2023年6月于河南省南阳市中心医院进行诊治的140例肺炎患儿痰液细菌培养检查的标本,并进行细菌及药敏实验.对140例感染性肺炎患儿病原菌分布、构成情况进行分析,分析流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、肺炎链球菌等对抗菌药物的耐药性.结果 140例患儿痰液细菌培养检查结果显示阳性60例,阳性率42.9%,共分离出68株病原菌,其中革兰阴性菌、革兰阳性菌、真菌的株数分别为40、26、2株,分别占比58.8%、38.2%、2.9%,所有病原菌株中,流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌、金黄色葡萄球菌的株数分别为22、20、11、4株,检出率分别为15.7%、14.3%、7.9%、2.9%,因肺炎链球菌导致的感染性肺炎患儿,对青霉素、左氧氟沙星耐药率低(11.1%,5.6%),流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌导致的感染性肺炎患儿,对头孢噻肟、阿莫西林耐药率低(7.1%,22.7%,0).结论 140例感染性肺炎患儿的主要致病菌为流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、肺炎链球菌等,对于因肺炎链球菌导致的感染性肺炎患儿,可采用青霉素、左氧氟沙星等治疗,而对流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌等导致的感染性肺炎患儿,可采用头孢噻肟、阿莫西林等治疗.
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编辑人员丨1天前
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腺苷A2B受体激活减轻脓毒症诱导的急性肺损伤及肺微血管内皮炎症损伤
编辑人员丨1天前
目的 分析腺苷A2B受体(A2BR)激活对脓毒症诱导的急性肺损伤(ALI)的影响并探讨其在肺微血管内皮炎症损伤中的调控作用.方法 (1)将24只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、ALI模型组(ALI组)、A2BR激动剂BAY60-6583干预组(ALI+BAY组)和A2BR抑制剂PSB1115干预组(ALI+PSB组),每组6只.制模后24 h处死大鼠取肺组织,光镜下行肺损伤评分(Smith评分),计算肺湿/干质量比值(W/D).Evans Blue染色法测定肺水清除率(AFC).酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肺组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)的水平.(2)采用TNF-α诱导人肺微血管内皮细胞(HPMECs)损伤模型,设立对照组、TNF-α组、BAY组、PSB组、BAY+TNF-α组和PSB+TNF-α组,各组细胞培养24 h后采用异硫氰酸荧光素(FITC)-白蛋白(albumin)法检测HPMECs单层通透性,Werstern blot法检测IL-1β、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管内皮钙黏连蛋白(VE-cadherin)、促血管生成素(ANGPT)的表达水平.结果 与sham组比较,ALI组的Smith评分、肺W/D及肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β水平均显著升高,AFC显著降低;与ALI组比较,ALI+BAY组的Smith评分、肺W/D及肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低,AFC显著升高;而ALI+PSB组结果相反.TNF-α诱导HPMECs损伤模型中,与对照组比较,TNF-α组IL-1β、ICAM-1表达水平及HPMECs单层通透性升高,VE-cadherin、ANGPT表达水平降低.与TNF-α组比较,BAY+TNF-α组IL-1β、ICAM-1表达水平及HPMECs单层通透性降低,VE-cadherin、ANGPT表达水平升高,而PSB1115预处理可逆转上述现象.上述各组之间差异有统计学意义(均P<0.05).结论 腺苷A2BR激活可减轻脓毒症诱导的ALI,并通过减轻肺微血管内皮炎症、降低通透性、促进血管生成等途径起保护作用.
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编辑人员丨1天前