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超声评价血管紧张素Ⅱ联合β-氨基丙腈诱导小鼠主动脉夹层模型主动脉形态与血流动力学变化特点
编辑人员丨6天前
目的:应用彩色多普勒超声(CDUS)观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)联合β-氨基丙腈(BAPN)诱导小鼠主动脉夹层模型主动脉各段形态及血流动力学指标的变化特点。方法:选取20只健康状况良好的6~8周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分为2组:模型组( n=10),AngⅡ联合BAPN腹腔注射建立小鼠主动脉夹层模型;对照组( n=10),腹腔注射生理盐水。常规记录小鼠体重、收缩压和舒张压,第42 d应用CDUS测量2组小鼠升主动脉、胸降主动脉和肾上主动脉的横截面内径,以及收缩期最高流速(PSV)、舒张期末期流速(EDV)、阻力指数(RI)、搏动指数(PI)、时间平均流速(TAMV)、心率、血流最大剪切率(SR)等。将主动脉自根部至肾动脉分叉部分取出,行HE染色观察主动脉壁病理变化。 结果:①模型组与对照组体重、收缩压、舒张压、心率差异有统计学意义(均 P<0.05);与对照组比较(0/10),模型组升主动脉夹层发生率(8/10)明显增高,差异有统计学意义( P<0.05);而胸降主动脉夹层发生率(4/10)、肾上主动脉夹层发生率(3/10)略增高,差异无统计学意义(均 P>0.05)。②模型组升主动脉内径、PSV、EDV、TAMV、PI、SR明显高于对照组,差异有统计学意义(均 P<0.05);两组间RI差异无统计学意义( P>0.05)。模型组胸降主动脉PSV、EDV、TAMV、PI、SR明显高于对照组,差异有统计学意义(均 P<0.05);两组间内径、RI差异无统计学意义(均 P>0.05)。模型组肾上主动脉PSV、TAMV、RI、PI、SR明显高于对照组,差异有统计学意义(均 P<0.05);两组间内径、EDV差异无统计学意义(均 P>0.05)。③模型组主动脉组织HE染色显示,主动脉明显扩张、不规则,管壁不均匀增厚;内皮细胞核染浅淡,部分内膜及中层断裂向外凸出形成夹层动脉瘤;外膜炎症细胞明显浸润。 结论:超声可初步评价高血压合并主动脉夹层血流动力学改变,主动脉PSV、TAMV、PI和SR可能是早期预测高血压发生主动脉夹层的重要指标。
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编辑人员丨6天前
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踝蛋白-1调控小鼠主动脉夹层血管重构的机制研究
编辑人员丨6天前
目的:探索踝蛋白-1(Talin-1)在小鼠主动脉夹层中的作用与机制。方法:FVB雄性小鼠共60只,分为空白组,造模组,Talin-1上调组,Talin-1上调对照组,Talin-1下调组,Talin-1下调对照组,每组10只。除空白组外,其余组均给予β-氨基丙腈结合血管紧张素构建小鼠主动脉夹层模型。利用腺相关病毒技术进行小鼠体内干预Talin-1。用苏木精-伊红和血管弹力纤维染色(EVG)观察主动脉和弹力纤维的形态和结构。用Western blot法检测小鼠主动脉组织中FAK和ERK1/2的磷酸化水平。结果:造模组小鼠主动脉夹层造模成功率70%,空白组未出现主动脉夹层。所有小鼠在实验期间未出现猝死。Talin-1下调组小鼠主动脉夹层发生率100%,显著高于Talin-1下调对照组,Talin-1上调组小鼠主动脉夹层发生率20%,显著低于Talin-1上调对照组(均 P<0.05)。苏木精-伊红染色和EVG结果提示Talin-1下调组小鼠主动脉管壁增厚,伴壁间血肿或假腔形成,同时中膜弹力纤维含量与Talin-1下调对照组相比显著降低,而Talin-1上调组小鼠血管壁中弹力纤维含量显著高于Talin-1上调对照组(均 P<0.05)。Western blot检测发现下调Talin-1显著抑制FAK磷酸化,相反对ERK1/2磷酸化起到促进作用(均 P<0.05)。 结论:Talin-1下调可能通过激活ERK1/2信号通路进而降低小鼠主动脉中膜弹力纤维含量,导致主动脉管壁发生血管重构,促进主动脉夹层的发生。
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编辑人员丨6天前
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RhoA/Rho激酶1及肌球蛋白轻链磷酸化下调诱发主动脉夹层
编辑人员丨6天前
目的:探讨RhoA/Rho激酶1(ROCK1)下调抑制肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化在主动脉夹层(AD)形成过程中的作用。方法:检测正常(NA)和AD主动脉原代平滑肌细胞(SMC)中RhoA/ROCK1的表达与MLC的磷酸化程度。免疫荧光观察SMC中MLC磷酸化程度和结构。β-氨基丙腈(BAPN)联合应用ROCK1抑制剂Fasudil,验证RhoA/ROCK1下调在AD形成中的作用。组间比较采用 t检验或 χ2检验,Kaplan-Meier生存曲线采用非参数检验。 结果:NA组和AD组年龄( t=-1.439, P>0.05)、性别( χ2=0.900, P>0.05)差异无统计学意义,AD组高血压患者多于正常组( χ2=5.562, P<0.05)。AD主动脉SMC中RhoA(NA:42 782±31 339,AD:6 975±3 130, t=2.585, P<0.05)和ROCK1表达下调(NA:64 626±38 822,AD:13 851±961, t=2.977, P<0.05),MLC磷酸化减少(NA:230 193±27 749,AD:51 142±48 151, t=6.561, P<0.01)。免疫荧光显示AD组SMC和Fasudil处理的SMC中MLC磷酸化降低,结构受损。Fasudil联合BAPN的夹层形成率(100%)高于BAPN的夹层形成率(50%, χ2=22.780, P<0.01)。 结论:RhoA/ROCK1下调抑制MLC磷酸化促进了AD的发生。
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编辑人员丨6天前
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前列地尔注射液对β-氨基丙腈诱导的小鼠主动脉夹层的作用及其机制探讨
编辑人员丨6天前
目的:探讨前列地尔注射液对β-氨基丙腈(BAPN)诱导的主动脉夹层的作用及其机制。方法:选取3周龄雄性C57BL/6小鼠26只随机分成对照组(普通饮水, n=13)和模型组(1 g·kg -1·d -1 BAPN饮水, n=13),14 d时提取主动脉组织RNA和总蛋白,采用实时定量聚合酶链式反应和蛋白质免疫印迹检测对照组和模型组主动脉炎症相关基因、EP基因mRNA(每组各6只)和前列地尔受体4 (EP4)蛋白(每组各7只)表达。选取3周龄雄性C57BL/6小鼠88只,按随机区组设计法分为3组:对照组(普通饮水+生理盐水80 μg·kg -1·d -1, n=22)、模型组(1 g·kg -1·d -1BAPN饮水+生理盐水80 μg·kg -1·d -1, n=33)和治疗组(1 g·kg -1·d -1 BAPN饮水+80 μg·kg -1·d -1 前列地尔注射液, n=33)。BAPN饮水前1 d开始每日腹腔注射给药,连续给药28 d。记录每组小鼠体重、血压变化及因主动脉夹层破裂死亡情况。28 d时,大体解剖观察主动脉夹层发生情况;取主动脉组织进行固定、包埋和切片,苏木素-伊红和维多利亚蓝-核固红染色观察主动脉的形态结构变化,同时,免疫组化染色观察对照组(6只)和模型组(6只)EP4蛋白的表达分布情况。并对模型组(3只)和治疗组(4只)血浆PGE1进行ELISA检测。选取3周龄雄性C57BL/6小鼠13只,随机分为模型组(1 g·kg -1·d -1BAPN饮水+生理盐水, n=7)和治疗组(1 g·kg -1·d -1 BAPN饮水+80 μg·kg -1·d -1 前列地尔注射液, n=6),14 d时对主动脉EP4蛋白表达进行定量分析。 结果:模型组小鼠BAPN诱导14 d时主动脉单核细胞趋化因子1 [(2.74±1.55)比(1.00±0.49)]和基质金属蛋白酶2[(1.38±0.42)比(1.00±0.27)]的mRNA表达及EP4蛋白(1.48±0.51比1.00±0.19)表达高于对照组( P均<0.05)。免疫组化结果显示EP4可在模型组的内皮细胞、炎症细胞中表达。小鼠主动脉解剖观察可见模型组和治疗组均有明显的夹层,苏木素-伊红和维多利亚蓝-核固红染色显示模型组和治疗组主动脉夹层血管可见弹力板断裂、充满红细胞的假腔形成和炎症细胞浸润。对照组无主动脉夹层和死亡发生,与对照组相比,模型组主动脉夹层发生率(60.6%,20/33)、破裂死亡率(30.3%,10/33),以及治疗组的主动脉夹层发生率(72.7%,24/33)、死亡率(24.2%,8/33)均明显升高,体重明显降低( P均<0.05),但模型组与治疗组间比较差异无统计学意义( P>0.05)。3组间血压无明显差异( P>0.05)。相较于模型组,治疗组在给药后血药浓度高[(0.540±0.041)μmol/L比(0.436±0.012)μmol/L, t=4.10, P<0.05],EP4蛋白表达低[(0.60±0.30)比(1.00±0.20), P<0.05]。 结论:在BAPN诱导的小鼠主动脉夹层模型中EP4表达增高,但使用前列地尔注射液腹腔给药对该模型中主动脉夹层的破裂无保护作用,其可能原因是前列地尔反馈抑制了EP4的表达。
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编辑人员丨6天前
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Tyrobp基因参与抽动障碍模型小鼠神经炎性反应及相关机制
编辑人员丨6天前
目的:探讨Tyrobp基因参与抽动障碍模型小鼠神经炎性反应及相关作用机制。方法:6周龄C57BL/6J和Tyrobp -/-雄性小鼠各20只,按照随机数字表法分为4组:野生型对照组(WT+NS组)、Tyrobp基因敲除对照组(Tyrobp -/-+NS组)、野生型模型组(WT+IDPN组)和Tyrobp基因敲除模型组(Tyrobp -/-+IDPN组)。WT+IDPN组和Tyrobp -/-+IDPN组小鼠连续7 d按150 mg/(kg·d)的剂量腹腔注射亚氨基二丙腈(3,3-iminodipropionitrile,IDPN)以建立抽动障碍小鼠模型,WT+NS组和Tyrobp -/-+NS组小鼠腹腔注射等量生理盐水。造模结束后,对小鼠的刻板行为进行评估。采用Western blot检测大脑纹状体组织的酪氨酸激酶结合蛋白(tyrosine kinase binding protein,Tyrobp)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、Toll样受体4 (Toll-like receptor,TLR4)、髓样分化因子88 (myeloid differentiation factor 88,MyD88)、磷酸化的核转录因子-κB (phospho-nuclear factor kappa B,p-NF-κB) p65、磷酸化的核因子-κB抑制蛋白α (phospho-inhibitor of NF-κB alpha,p-IκBα)的蛋白表达情况。采用免疫荧光染色观察脑组织小胶质细胞激活情况。采用GraphPad Prism 8.0软件对所得数据进行统计分析,两组数据比较采用 t检验;多个样本均数比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD检验。 结果:刻板行为评估显示,四组小鼠的运动刻板行为和分类刻板行为评分均差异有统计学意义( F=270.9,379.7,均 P<0.01)。WT+IDPN组小鼠的运动刻板行为和分类刻板行为评分均高于Tyrobp -/-+IDPN组[运动刻板行为:(3.23±0.26)分,(2.13±0.21)分, t=9.02, P<0.05;分类刻板行为:(45.80±4.29)分,(26.60±3.48)分, t=12.00, P<0.05]。Western blot结果显示,各组小鼠纹状体TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4、Myd88、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达水平差异有统计学意义( F=29.07,23.09,39.36,57.6,52.55,15.50,40.48,均 P<0.05)。WT+IDPN组蛋白水平高于WT+NS组( t=8.31,7.37,8.13,11.43,10.47,6.05,9.96,均 P<0.05),Tyrobp -/-+IDPN组蛋白水平高于Tyrobp -/-+NS组( t=3.60,3.00,5.84,4.81,3.59,2.26,4.68,均 P<0.05),WT+IDPN组蛋白水平高于Tyrobp -/-+IDPN组( t=3.97,3.93,4.14,6.40,7.63,3.45,3.03,均 P<0.05)。免疫荧光显示,WT+IDPN组和Tyrobp -/-+IDPN组小鼠纹状体区小胶质细胞胞体增大,小胶质细胞呈激活状态,WT+IDPN组较Tyrobp -/-+IDPN组小鼠小胶质细胞激活形态更明显。 结论:Tyrobp可能通过TLR4/Myd88/NF-κB信号通路参与神经炎性反应介导的抽动秽语综合征的发病机制。
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编辑人员丨6天前
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β-氨基丙腈诱导构建大鼠主动脉夹层模型
编辑人员丨6天前
目的:构建β-氨基丙腈(BAPN)诱导的大鼠主动脉夹层模型,并探索最佳剂量和给药方式。方法:选用75只3周龄幼年SD大鼠,均购自中国科学院上海动物中心。采用随机数字表法将其平均分为A~E 5组进行实验,A组给予正常饲料,饮食量不限;B组正常饮食,给予生理盐水皮下注射;C组和D组分别给予混合了浓度分别为0.25%和0.40%的BAPN饲料喂养;E组正常饲料喂养,给予BAPN+生理盐水混合液皮下注射。实验为期6周,通过尸检的方法获取各组大鼠的主动脉标本,针对其中主动脉夹层标本进行形态学分析和病理学检测,并使用材料拉力仪分析标本的应力、应变及弹性模量等力学参数,采用 t检验比较各组间差异。 结果:C组中共11例出现主动脉夹层;D组中共3例出现主动脉夹层;E组中仅1例出现主动脉夹层。对照组(A组和B组)未发现主动脉夹层形成。E组大鼠的胸主动脉中膜厚度[(0.054±0.004) mm比(0.048±0.008) mm, t=2.598, P<0.05]和管壁面积[(0.620±0.074) mm 2比(0.557±0.030) mm 2, t=3.056, P<0.05]均明显高于对照组。 结论:口服低浓度(0.25%)BAPN能够高效构建大鼠AD模型,有助于主动脉夹层形成的力学机制研究。
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编辑人员丨6天前
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1-磷酸鞘氨醇预防小鼠主动脉夹层形成的研究
编辑人员丨6天前
目的:观察1-磷酸鞘氨醇(S1P)对小鼠主动脉夹层(AD)形成的影响。方法:利用BAPN诱导3周龄C57/BL6J小鼠AD的形成,建立AD模型。同时予以S1P作为处理进行分组,分为Control(正常对照)组、BAPN组、BAPN+S1P组、S1P+Methanol(溶剂对照)等4组,观察各组小鼠AD形成情况,记录死亡率,结合苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉结构变化。结果:给药4周后,BAPN+S1P组的小鼠死亡率低于BAPN组[30%(6/20)比55%(11/20), χ2=4.355, P<0.05],AD形成率亦低于BAPN组[30%(6/20)比60%(12/20), χ2=4.043, P<0.05],差异均有统计学意义;同时病理显示S1P处理可缓解主动脉破坏,抑制AD形成。添加甲醇溶剂对照的BAPN+Methanol组和BAPN组一样具有较高的死亡率[70%(14/20)比55%(11/20), χ2=0.175, P>0.05]和AD形成率[65%(13/20)比60%(12/20), χ2=0.152, P>0.05],两组的死亡率和AD形成率差异均无统计学意义;且病理显示两组主动脉血管壁均出现异常改变。 结论:S1P能够对抗BAPN对小鼠主动脉壁的破坏作用,有助于缓解AD的进展。
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编辑人员丨6天前
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BAPN诱导小鼠胸主动脉夹层合并急性肺损伤模型的建立
编辑人员丨2周前
目的 采用β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile monofumarate,BAPN)1 g/(kg·d)饮水给药的方式,构建一种可行性高、稳定的胸主动脉夹层(thoracic aortic dissection,TAD)合并急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的小鼠模型,为研究TAD合并ALI提供合理的动物模型.方法 选取45只SPF级3周龄C57BL/6J雄性小鼠,随机分为CON组15只(正常饮食水)和BAPN组30只(与无菌水配置成1 g/(kg·d)的溶液饮水给药),持续4周.实验期间,观察两组小鼠一般情况、成模率,通过测量小鼠胸主动脉最大直径和主动脉组织苏木素-伊红(HE)染色,验证小鼠TAD模型并将BAPN组分为TAD组和Non-TAD组.进一步检测CON组、Non-TAD组和TAD组小鼠肺组织 HE 病理染色、湿干重比(dry/wet weight ratio,W/D)及肺泡灌洗液(broncho alveolar lavage fluid,BALF)中总蛋白水平和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达情况验证小鼠TAD合并ALI模型.结果 BAPN干预明显延缓小鼠体重和饮水量的增加.与CON组和Non-TAD组相比,TAD组小鼠胸主动脉最大直径明显增粗(P<0.05);主动脉HE染色显示主动脉中层明显增厚,主动脉壁结构破坏、紊乱;肺组织HE染色显示肺间质明显水肿及炎性渗出,伴肺泡腔扩大,肺泡壁上皮脱落及透明膜形成,肺损伤病理评分显著增加(P<0.05);肺组织W/D、BALF中总蛋白水平及IL-1β、IL-6、TNF-α表达也明显升高(P<0.05),而另外两组上述指标无明显差异.结论 通过BAPN饮水给药的方式,可成功建立胸主动脉夹层合并急性肺损伤的小鼠模型.
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编辑人员丨2周前
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FERM、ARH/RhoGEF和pleckstrin结构域蛋白1在胸主动脉夹层中的表达及作用
编辑人员丨2周前
目的 探讨FERM、ARH/RhoGEF和pleckstrin结构域蛋白1(Farp1)在胸主动脉夹层中的表达及作用.方法 胸主动脉夹层(TAD)组织来源于2022年12月至2023年3月在武汉大学中南医院因Stanford A型主动脉夹层行外科手术的患者,收集心脏移植供体残余的胸主动脉作为对照(CRTL)组.通过蛋白质印迹法(Western blot)和免疫组织化学检测TAD与CRTL组胸主动脉组织中Farp1的表达水平;3周龄雄性C57BL/6J小鼠喂养0.25%的β-氨基丙腈酯(BAPN)4周构建胸主动脉夹层模型,检测指标及方法同人胸主动脉组织;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ,1×10-7 mol/L)刺激原代大鼠胸主动脉平滑肌细胞(RAVSMCs)24 h模拟胸主动脉夹层,构建Ad-sh-Farp1敲低腺病毒干扰RAVSMCs中Farp1的表达,通过Western blot检测RAVSMCs中收缩表型蛋白标志物.采用非配对t检验进行统计学分析.结果 Western blot(1.723±0.084,t=5.667,P<0.05)及免疫组织化学染色(3.507±0.232,t=4.393,P<0.05)结果显示人TAD组织中Farp1的蛋白水平高于对照组;小鼠主动脉夹层组织 Western blot(1.304±0.042,t=2.996,P<0.05)和免疫组织化学染色(0.458±0.030,t=4.060,P<0.05)显示了相同结果,且免疫组织化学染色进一步提示Farp1蛋白水平改变主要发生于主动脉中层(平滑肌);细胞实验显示Ang Ⅱ促进RAVSMCs中Farp1蛋白表达上调(1.469± 0.115,t=3.912,P<0.05),敲低 Farp1 抑制了 RAVSMCs 表型转换[α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA):1.762±0.202,t=3.123,P<0.05;CNN1∶1.615±0.101,t=5.288,P<0.05;SM22α:1.618±0.135,t=2.964,P<0.05].结论 Farp1与主动脉平滑肌细胞表型转换明显相关,Farp1蛋白水平增高可能促进胸主动脉夹层的发生发展.
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编辑人员丨2周前
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基于NF-κB信号通路介导免疫炎症反应探讨升清降浊制动颗粒治疗多发性抽动症的作用机制
编辑人员丨1个月前
目的:研究升清降浊制动颗粒对多发性抽动症(TS)的疗效及作用机理.方法 60 只雄性SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、氟哌啶醇组及升清降浊制动颗粒高、低剂量组,每组 12 只.每天腹腔注射 150 mg/kg亚氨基二丙腈(IDPN),连续 7 d,建立TS大鼠模型.造模成功后各组给予相应药物连续灌胃 21 d.每隔 7 d检测大鼠体质量;采用行为学指标评价大鼠行为;旷场实验评价大鼠认知功能;采用ELISA检测大鼠血清和大脑纹状体中DA、D2R、IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平及纹状体内NF-κB(P65、P50)水平;采用Western Blot对大鼠脑纹状体中NF-κB信号通路相关蛋白IκB-α与 IKK-β水平进行检测.结果:与模型组比较,各给药组大鼠体质量显著升高,运动行为和刻板行为显著减少;旷场实验中运动总路程、平均速度、进入中央区次数、中央区路程显著减少;血清和大脑纹状体中D2R、IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ,水平及血清DA水平显著降低,纹状体DA水平显著升高,P65、P50 水平及IκB-α、IKK-β蛋白表达显著降低(P<0.05 或P<0.01).结论:升清降浊制动颗粒可通过调控NF-κB信号通路介导炎症反应,进而改善多发性抽动症.
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编辑人员丨1个月前