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M1型巨噬细胞来源的外泌体微小RNA-16-5p对心房肌细胞电生理的影响
编辑人员丨1周前
目的 探讨M1型巨噬细胞来源的外泌体微小RNA(miR)-16-5p对心房肌细胞电生理的影响及可能机制.方法 将小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)分为脂多糖(LPS)组(LPS诱导刺激RAW264.7细胞24 h使其分化为M1型巨噬细胞)、miR-16-5p阴性对照(NC)组(将miR-16-5p NC 转染 RAW264.7 细胞后诱导分化)、miR-16-5p 模拟物(mimics)组(将 miR-16-5p mimics 转染 RAW264.7 细胞后诱导分化)、miR-16-5p 抑制物(inhibitor)组(将 miR-16-5p inhibitor转染RAW264.7细胞后诱导分化)及LPS+中性鞘磷脂酶抑制剂(GW4869)组(RAW264.7细胞经LPS诱导完成后加入10 p.M GW4869继续培养).5组巨噬细胞培养48~72h后收集上清液,采用超速离心法提取外泌体.采用实时荧光PCR(qRT-PCR)检测转染后巨噬细胞miR-16-5p相对表达水平.将心房肌细胞(HL-1细胞)暴露于快速电刺激(1.0V/cm,10Hz)48h构建快速起搏诱导的房颤细胞模型,与各组外泌体共培养,心房肌细胞分为A组(起搏HL-1细胞+LPS组外泌体)、B组(起搏HL-1细胞+miR-16-5p NC组外泌体)、C组(起搏HL-1细胞+miR-16-5p mimics组外泌体)、D 组(起搏 HL-1 细胞+miR-16-5p inhibitor 组外泌体)、E 组(起搏 HL-1 细胞+LPS+GW4869组外泌体).采用膜片钳检测各组心房肌细胞动作电位时限[复极化达50%和90%的动作电位时限(APD50、APD90)],采用蛋白质免疫印记法检测5组细胞中磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)表达水平.结果 miR-16-5p mimics组巨噬细胞miR-16-5p相对表达水平高于 miR-16-5p NC 组(P<0.001),而 miR-16-5p inhibitor 组低于 miR-16-5p NC 组(P<0.05).A组和B组HL-1细胞APD50和APD90比较差异均无统计学意义(P>0.05);C组HL-1细胞APD50和APD9.均短于A组(P<0.05);D组及E组HL-1细胞APD50和APD9.均长于A组(P<0.01).A组和B组HL-1细胞PI3K表达水平、p-AKT/AKT比较差异均无统计学意义(P>0.05);C组HL-1细胞PI3K表达水平、p-AKT/AKT均低于A组(P<0.001);D组及E组HL-1细胞PI3K表达水平、p-AKT/AKT均高于A组(P<0.001).结论M1型巨噬细胞来源的外泌体miR-16-5p可缩短心房肌细胞动作电位时限,可能与抑制PI3K/AKT通路有关.
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编辑人员丨1周前
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基于Notch信号通路研究雷公藤多苷对体外培养小鼠卵巢生殖干细胞的毒性作用及机制研究
编辑人员丨1周前
以优化培养体系中生长状态良好的卵巢生殖干细胞(ovarian germline stem cells,OGSCs)为研究对象,观察雷公藤多苷(Tripterygium glycosides,TG)对OGSCs的影响,并从Notch信号通路探讨其生殖毒性的作用机制.采用cell counting kit-8(CCK-8)检测 3.75、7.5、15 μg·mL-1 TG 对体外培养小鼠 OGSCs 活力的影响;免疫荧光技术和逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测 3.75 μg·mL-1 TG给药后OGSCs标志物VASA基因同源类似物(mouse vasa homologue,MVH)、八聚体结合转录因子 4(octamer-binding transcription factor 4,Oct4)蛋白和基因的表达;RT-PCR检测Notch信号通路关键分子神经源性基因Notch同源蛋白 1(neurogenic locus Notch homolog protein 1,Notch1)、Hes家族BHLH转录因子 1(Hes family BHLH transcription factor 1,Hes1)、锯齿典型 Notch 配体 1(jagged canonical Notch ligand 1,Jagged1)基因表达;提取RNA进行转录组学分析TG干预OGSCs的作用机制.3.75 μg·mL-1 TG配伍 40 ng·mL-1 Notch信号通路γ-促分泌酶激动剂jagged canonical Notch ligand(Jagged)联合给药,采用CCK-8检测OGSCs活力水平;免疫荧光双标法检测MVH与Hes1、Notch1、Jagged1 蛋白共表达.结果显示,与空白组比较,TG给药后均显著抑制OGSCs活力(P<0.01 或P<0.001);显著降低OGSCs标志物MVH、Oct4 蛋白和基因表达(P<0.05,P<0.01 或P<0.001);显著抑制Notch1、Hes1、Jagged1基因表达(P<0.001).转录组学分析提示,TG通过干预Notch信号通路相关配体Jagged1 影响OGSCs的生长增殖.实验验证结果表明,配伍Notch信号通路γ-促分泌酶激动剂Jagged可显著缓解TG所致OGSCs活力的降低(P<0.001);并与TG组比较,显著升高MVH/Hes1、MVH/Notch1、MVH/Jagged1 蛋白共表达(P<0.01 或P<0.001).综上可知,TG可发挥γ-促分泌酶抑制剂样作用,通过下调OGSCs标志物MVH、Oct4 和Notch信号通路分子Notch1、Hes1、Jagged1 参与OGSCs途径介导Notch信号通路诱发生殖毒性.
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编辑人员丨1周前
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间充质干细胞/内皮祖细胞基质依赖型组织工程骨修复大鼠股骨缺损
编辑人员丨1周前
目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)/内皮祖细胞(EPC)作为种子细胞构建的基质依赖型组织工程骨(ECM-TEB)修复大鼠股骨缺损的效果。方法:分离培养骨髓来源的MSC和EPC并进行功能鉴定,种植上架于纳米晶胶原基人工骨颗粒,培养14 d后冻干,获得MSC/EPC ECM-TEB和MSC ECM-TEB。扫描电镜观察MSC和EPC在支架表面的生长形态。分别提取MSC ECM-TEB蛋白浸提液(对照组)和MSC/EPC ECM-TEB蛋白浸提液(实验组),加入EPC培养系统中进行迁移、划痕修复、管腔形成检测;另加入MSC培养系统中进行茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)染色检测,观察两组细胞募集、血管生成和成骨分化情况。选取12只SD大鼠,建立股骨缺损模型,按照随机数字表法分为:(1)假手术组:仅在缺损处进行清创处理;(2)MSC ECM-TEB组:在缺损处植入MSC ECM-TEB;(3)MSC/EPC ECM-TEB组:在缺损处植入MSC/EPC ECM-TEB,每组4只大鼠。2个月后行Micro-CT检查和缺损区Masson三色染色观察骨缺损修复情况。冻干后低温保存3个月,采取同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)标记蛋白质谱检测MSC ECM-TEB和MSC/EPC ECM-TEB在成血管方面的差异,并采用基因本体论/京都基因与基因组百科全书技术(GO/KEGG)功能富集方法分析其原因。结果:MSC和EPC在支架表面生长、增殖良好,形成光滑的细胞层状结构。实验组在细胞迁移数、划痕修复比例和管腔形成长度分别为(121.6±8.3)个、(61.5±5.9)%、(11.3±0.6)mm,较对照组显著增多[(85.0±6.7)个、(39.3±3.6)%、(5.9±0.4)mm]( P均<0.01)。茜素红染色和ALP染色结果显示,实验组钙结节矿化面积比例显著增加[(38.8±3.3)%∶(49.9±3.0)%、(38.8±2.4)%∶(45.3±3.3)%] ( P均<0.05)。Micro-CT和Masson染色结果表明,MSC/EPC ECM-TEB组骨缺损修复良好,MSC ECM-TEB组仅形成少量新骨,假手术组几乎没有新骨形成;骨体积分数、骨小梁数量和骨小梁厚度差异均有统计学意义( P<0.05)。蛋白质谱分析结果表明,与MSC ECM-TEB组相比,MSC/EPC ECM-TEB组中有83个血管生成相关的因子显著上调(差异倍数>2, P<0.05);GO/KEGG功能富集分析显示,与MSC ECM-TEB相比,MSC/EPC ECM-TEB在"血管发育"等生物过程存在明显差异( P<0.01),"血管平滑肌收缩通路"等显著增强( P<0.01)。 结论:与MSC ECM-TEB相比,MSC/EPC ECM-TEB在细胞募集、血管生成和新骨生成方面显著增强,是一种更佳的可用于创伤性骨缺损修复的组织工程骨构建策略。
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编辑人员丨1周前
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衰老途径参与大鼠动脉导管闭合机制的初步研究
编辑人员丨1周前
目的:初步探讨衰老途径在大鼠动脉导管闭合过程中的作用及其机制。方法:Spraygue Dawley远交群大鼠30只,其中雌鼠20只,10~15周龄,体重270~330 g,采用随机数表进行随机雌雄配对后交配,受孕后备用。提取孕19 d(E19组)、21 d(E21组)胎鼠和新出生(Day0组)幼鼠的动脉导管原代平滑肌细胞(DASMC)进行培养,于培养48 h后采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组细胞衰老相关标志物p16、21和53基因的转录水平。低氧培养新生大鼠DASMC 3 d后将细胞分为3组,即低氧对照组(G0组)、正常氧浓度处理3 h组(G3组)和正常氧浓度处理6 h组(G6组),干预后采用RT-PCR检测各组细胞p16、21和53基因的转录水平。提取新生大鼠DASMC分为3组,即低氧培养对照组、低氧+小干扰RNA(siRNA)培养组和正常氧浓度培养组,通过Transwell实验检测DASMC迁移能力。结果:E19组胎鼠DASMC的p16、21和53基因的转录水平均高于Day0组新生幼鼠( P均 <0.01),E21组胎鼠DASMC的p16、21和53基因转录水平亦均高于Day0组新生幼鼠( P均 <0.01)。G0组新生大鼠DASMC的p16、21和53基因的转录水平均高于G3组( P<0.05或0.01),G0组新生大鼠DASMC的p16、21和53基因的转录水平亦均高于G6组( P均 <0.01),G3组新生大鼠DASMC的p16、21和53基因的转录水平则均高于G6组( P均<0.05)。正常氧浓度培养组新生大鼠DASMC的迁移能力高于低氧培养对照组( P<0.01),低氧+siRNA培养组新生大鼠DASMC的迁移能力亦高于低氧培养对照组( P<0.01)。 结论:大鼠动脉导管闭合过程中DASMC的衰老标志物随大鼠出生而降低,而衰老途径可能通过抑制DASMC迁移影响动脉导管闭合。
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编辑人员丨1周前
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单分子成像显示视网膜血管内皮细胞膜上血管内皮生长因子受体2聚集状态
编辑人员丨1周前
目的:观察单个视网膜血管内皮细胞膜上血管内皮生长因子受体2 (VEGFR2)的聚集状态。方法:将猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A)分为空白对照组(正常培养)、质粒转染组[转染VEGFR2-绿色荧光蛋白(GFP)重组质粒]。采用共聚焦显微镜观察质粒转染组GFP的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中VEGFR2的mRNA和蛋白表达情况;单分子成像技术记录细胞膜上表达的单个VEGFR2-GFP分子的荧光强度分布和漂白步数,判断受体的寡聚或多聚状态。结果:共聚焦显微镜观察发现,转染12 h后,质粒转染组细胞可见GFP绿色荧光。qPCR检测结果显示,质粒转染组细胞中VEGFR2、GFP mRNA表达较空白对照组显著升高,差异均有统计学意义( t=11.240、12.330, P<0.001、0.001)。Western blot检测结果显示,质粒转染组细胞VEGFR2蛋白表达较空白对照组增强,差异有统计学意义( t=8.346, P<0.01 )。单分子成像结果显示,无配体刺激时RF/6A细胞膜表面上VEGFR2- GFP的荧光强度分布为双峰,其中单体、二聚体比例分别为86.0%、14.0%;通过计数GFP荧光漂白步数,静息状态下受体单体、二聚体、三聚体和四聚体比例分别为81.4%、12.9%、5.5%、0.3%。 结论:无配体状态下,VEGFR2在RF/6A细胞膜表面以单体和包括二聚体在内的多聚体形式共存,以单体为主。
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编辑人员丨1周前
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缺氧条件下中介素和系膜细胞对内皮细胞血管生成的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨缺氧条件下,中介素(IMD)和肾小球系膜细胞(HMC)对内皮细胞的影响。方法:内皮细胞分为4组:(1)内皮细胞与系膜细胞共培养,加IMD处理作为HEMI组;(2)内皮细胞与系膜细胞共培养,无处理作为HEM组;(3)内皮细胞加IMD处理作为HEI组;(4)内皮细胞无处理作为HE组;将各组细胞在1%O 2、94%N 2、5%CO 2条件下缺氧培养12 h后,蛋白质印迹法(Western blot)、免疫细胞化学技术检测相关蛋白表达,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测相关基因mRNA相对表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管内皮生长因子A(VEGFA)含量,体外血管形成实验检测内皮细胞的成管分支数。实验结果两组间比较采用 t检验,多组间比较采用单因素方差分析。 结果:上皮型钙黏分子(VE-cadherin)表达量HEMI(1.629±0.197、1.557±0.066、10.552±0.523)高于HEM(1.116±0.118、1.340±0.161、8.128±0.542)、HEI(1.278±0.096、1.078±0.088、7.523±1.211)、HE组(1.000±0.000, F=0.734、1.244、6.134, P<0.05),差异有统计学意义;血小板内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)表达量HEMI(1.309±0.234、1.203±0.105、1.654±0.462)高于HEM(1.067±0.379、1.038±0.035、1.601±0.397)、HEI(1.225±0.091、1.101±0.038、1.605±0.207)、HE组(1.000±0.000),差异无统计学意义( F=5.083、5.434、6.428, P>0.05);VEGF表达量HEMI(0.904±0.005、1.922±0.457)高于HEM组(0.690±0.071、1.000±0.000, F=8.307、10.896, P<0.01),ELISA中加入IMD组(1.018±0.319)VEGFA浓度比值高于对照组(0.921±0.294, F=0.132, P<0.05),差异有统计学意义;体外血管形成中HEMI(22.289±0.131)、HEM(21.318±0.594)、HEI(21.533±0.867)、HE(20.755±1.798)高于NE组(18.731±0.525, F=5.926、0.030、1.033, P<0.05; F=6.753, P>0.05)。 结论:缺氧条件下,IMD可以直接或通过系膜细胞间接双重影响内皮细胞,促进血管形成。
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编辑人员丨1周前
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脓液培养阴性儿童急性骨髓炎临床特征分析
编辑人员丨1周前
目的:探讨脓液培养阴性的儿童急性骨髓炎临床特征、治疗以及预后。方法:收集2017年11月至2021年1月在山东大学附属儿童医院经影像学检查、手术、病理确诊的69例急性骨髓炎患儿的临床资料。根据术后脓液培养结果,脓液培养阴性的20例患儿为观察组,其中男14例,女6例,年龄4个月至12岁;脓液培养阳性的49例患儿为对照组,其中男29例,女20例,年龄19 d至12岁。所有患儿治疗均采用抗生素联合骨皮质开窗封闭负压引流。所有患儿入院后均使用一代或二代头孢类抗生素抗感染,根据术后脓液培养结果,观察组继续使用术前抗生素,对照组根据药敏结果调整抗生素。收集两组患儿起病时最高体温、炎症指标、手术次数、住院天数、是否合并关节炎以及并发症等资料。采用独立样本 t检验、秩和检验、 χ2检验对两组间的数据进行对比分析。 结果:观察组手术次数中位数为2次,明显少于对照组的3次,差异有统计学意义( P<0.05);观察组患儿体温中位数、中性粒细胞计数、C反应蛋白中位数分别为38.3℃、(9.05±0.92)×10 9/L、18.93 mg/L,明显低于对照组的39.2℃、(11.99±3.93)×10 9/L、87.55 mg/L,差异有统计学意义( P<0.05);两组患儿住院天数( P=0.086)、红细胞沉降率( P=0.888)、白细胞( P=0.124)方面的差异均无统计学意义。观察组合并关节炎8例,对照组20例;观察组发生并发症3例,对照组2例,两组患儿在合并关节炎和并发症上差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:脓液培养阴性的急性骨髓炎患儿病情较轻,治疗上采用一代或二代头孢类抗生素联合骨皮质开窗VAC负压引流效果良好。
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编辑人员丨1周前
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高压氧通过调控MAPK信号通路增强紫杉醇对食管癌细胞ECA109药物敏感性的研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨高压氧(HBO)增强食管癌ECA109细胞对紫杉醇(Pac)的药物敏感性及其作用机制。方法:体外培养食管癌ECA109细胞完成后,按照实验设计将细胞分为4组:对照组、Pac组、HBO组和HBO+Pac组。对照组加入DMSO;Pac组加入5 mg/L的Pac(参照IC 50值);HBO组在高压氧舱单独暴露90 min;HBO+Pac组首先将细胞在高压氧舱暴露90 min,随后采用5 mg/L Pac处理。利用CCK-8法检测ECA109细胞的增殖能力,流式细胞术检测ECA109细胞的凋亡情况,Western blotting实验检测ECA109细胞内凋亡蛋白、耐药相关蛋白及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白的表达。 结果:与对照组和HBO组比较,Pac组ECA109细胞的存活率明显降低,凋亡率明显升高( P<0.05);与Pac组比较,HBO+Pac组ECA109细胞的存活率明显降低,凋亡率明显升高( P<0.05)。与对照组和HBO组比较,Pac组和HBO+Pac组ECA109细胞内Bcl-2、caspase-9和p-ERK蛋白的表达明显降低( P<0.05),Bad、caspase-3、PARP、p-JNK、和p-p38蛋白的表达明显升高( P<0.05)。与Pac组比较,HBO+Pac组ECA109细胞内Bad、caspase-3蛋白的表达明显升高,P-gp蛋白表达明显降低( P<0.05),而Bcl-2、caspase-9和PARP蛋白的表达变化不明显( P>0.05)。 结论:HBO联合Pac处理能够增强Pac对ECA109细胞的增殖抑制作用和诱导凋亡作用,其作用机制可能是通过调节ECA109细胞中的MAPK信号通路实现的。
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编辑人员丨1周前
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肾癌血管新生与肿瘤干细胞的相关性探索
编辑人员丨1周前
目的:探索肿瘤血管新生与肾癌干细胞的相关性。方法:应用细胞原代培养方法提取分离在哈尔滨医科大学附属医院泌尿外科接受手术的肾透明细胞癌患者的肾癌干细胞(RCSCs),随后利用qRT-PCR和Western 印迹方法分别检测不同微血管密度(MVD)肾癌组织来源的肾癌干细胞标志物CD105、Sox2基因和蛋白表达水平。利用TCGA数据库数据,分析肿瘤血管新生标志物与肿瘤干细胞调控基因相关性。结果:高MVD肾癌组织来源的RCSCs中干细胞标志物CD105和Sox2基因分别升高(2.34±1.77)倍和(3.92±1.41)倍( PCD105<0.01, PSox2<0.05),蛋白水平升高(5.12±3.31)倍和(4.90±3.30)倍( PCD105<0.05, PSox2<0.01)。高达30%的干细胞促“干性”调控基因与血管新生基因CD31/PECAM1、KDR存在正相关关系,并且有64个基因同时与CD31/PECAM1和KDR基因存在强正相关关系( r>0.6, P<0.05)。 结论:肾癌高微血管密度与肾癌干细胞存在强相关性。
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编辑人员丨1周前
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小鼠炎症创面组织匀浆体外模拟创面炎症微环境的可行性研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨小鼠炎症创面组织匀浆体外模拟创面炎症微环境的可行性。方法:(1)取10只8周龄C57BL/6雄性小鼠,在背部中线两侧用打孔器各取直径1.0 cm的圆形全层皮肤组织,制作正常皮肤组织匀浆上清液。形成全层皮肤缺损创面48 h后,取距创缘2 mm内创面组织,制作炎症创面组织匀浆上清液。取2种组织匀浆上清液,调整总蛋白质量浓度为1 mg/mL,酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,样本数为6。(2)取原代人脐带间充质干细胞(hUCMSC)并培养至第3代,培养48 h后提取正常外泌体。另外取第3代hUCMSC,分别加入总蛋白质量浓度为30、50、100 μg/mL正常皮肤组织匀浆上清液和炎症创面组织匀浆上清液,培养48 h后,提取30、50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体和30、50、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体。取正常外泌体、30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体和30 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体,透射电子显微镜下观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析仪检测外泌体粒径,蛋白质印迹法检测CD9和CD63表达。(3)取1 d龄C57BL/6小鼠乳鼠20只,分离培养原代成纤维细胞(Fb)和第3代Fb,倒置相差显微镜下观察细胞形态。取第3代Fb,培养2 h,利用细胞爬片法结合免疫荧光法观察波形蛋白的表达。(4)取第3代Fb,按随机数字表法分为对照组,正常外泌体组,30、50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组及30、50、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组,每组4孔。对照组不进行任何处理,其余7组依次加入实验(2)中制备的正常外泌体,30、50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体和30、50、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体,并调整外泌体终质量浓度为10 μg/mL。培养48 h,采用细胞计数试剂盒8法检测8组细胞活力。(5)取2个批次第3代Fb,同实验(4)进行分组及处理,每组4孔,并分别调整外泌体终质量浓度为1、10 μg/mL,采用细胞划痕试验检测培养6、12、24 h细胞迁移率。(6)取2个批次第3代Fb,同实验(4)进行分组及处理,但不设置对照组,每组3孔,并调整外泌体终质量浓度为1、10 μg/mL,实时荧光定量反转录PCR法检测培养48 h转化生长因子β 1(TGF-β 1)、TGF-β 3、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析及Bonferroni法。 结果:(1)伤后48 h,小鼠炎症创面组织匀浆上清液中TNF-α含量为(116±3)pg/mL,显著高于正常皮肤组织匀浆上清液的(97±5)pg/mL, t=3.306, P<0.05。(2)hUCMSC正常外泌体、30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体、30 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体均呈典型茶托样;3种hUCMSC外泌体粒径为30~150 nm,均在外泌体正常粒径范围内;3种hUCMSC外泌体CD9和CD63均呈阳性表达。(3)原代细胞轮廓清晰,呈突起的纺锤形、不规则多角形或细长条状;第3代细胞形态与原代细胞相近。培养2 h,细胞中波形蛋白呈阳性表达,细胞鉴定为Fb。(4)培养48 h,30 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组细胞活力为(137.4±2.8)%,明显高于对照组的100%、正常外泌体组的(107.5±2.4)%、30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组的(113.3±3.2)%及50、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组的(104.0±2.0)%、(101.9±1.5)%, P<0.01, 30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组细胞活力明显高于对照组、正常外泌体组及50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组[(103.4±2.2)%、(102.5±1.4)%], P<0.01。(5)外泌体终质量浓度为1 μg/mL时,培养6、12、24 h,30 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组细胞迁移率明显高于对照组、正常外泌体组、30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组及50、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组( P<0.05);培养12 h,30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组细胞迁移率明显高于对照组、正常外泌体组以及50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组( P<0.05)。外泌体终质量浓度10 μg/mL时,培养6 h,30 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组细胞迁移率明显高于对照组、正常外泌体组( P<0.05);30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组细胞迁移率明显高于50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组( P<0.05)。培养12、24 h,30 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组细胞迁移率明显高于对照组、正常外泌体组及50、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组( P<0.05);30 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组细胞迁移率明显高于对照组、正常外泌体组及50、100 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组( P<0.05)。(6)外泌体终质量浓度1 μg/mL时,7组细胞培养48 h TGF-β 1、TGF-β 3、α-SMA mRNA表达量组间总体比较,差异无统计学意义( F=1.123、1.537、1.653, P>0.05)。外泌体终质量浓度为10 μg/mL时,培养48 h,7组细胞TGF-β 1、α-SMA mRNA表达量组间总体比较,差异无统计学意义( F=1.487、1.308, P>0.05)。50 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组细胞培养48 h TGF-β 3 mRNA表达量明显高于正常外泌体组、50 μg/mL正常蛋白刺激外泌体组及30、100 μg/mL炎症蛋白刺激外泌体组( P<0.05)。 结论:小鼠炎症创面组织匀浆上清液预处理对hUCMSC外泌体的总蛋白含量无影响,低浓度炎症创面组织匀浆上清液刺激所得的hUCMSC外泌体能够上调Fb的增殖和迁移能力,但炎症创面组织匀浆上清液中的炎症介质含量过低,不足以有效启动间充质干细胞抗炎及组织修复旁分泌效应。
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编辑人员丨1周前